Раздел: « общая вирусология »
Занятие 13. Дата _______. Тема: «Структура и биология вирусов. Методы диагностики вирусных инфекций. Культивирование вирусов. Методы индикации вирусов. Идентификация вирусов. Серологическая диагностика вирусных инфекций»
Виды культур тканей
А. Культуры переживающих Б. Культуры растущих тканей
кусочков
(эксплантантов) тканей
1. культуры 2. однослойные 3. суспензионные
фиксированных культуры
клеток культуры тканей клеток
а)первично-трипсинизированные в)перевиваемые культуры
б)полуперевиваемые культуры
Схема 6. Виды культур тканей
Культура клеток типа Культура клеток ____ЦПД вирусов_______
куриных фибробластов типа HeLa (гибель и деструкция монослоя)
_______ЦПД вирусов _ЦПД вирусов__ Реакция_____
цитоплазматические включения внутриядерные включения гемадсорбции
Таблица 54. Реакция гемагглютинации (РГА) для индикации вируса в аллантоисной жидкости куриного эмбриона
|
Ингредиенты |
Разведения вируссодержащего материала |
Контроль эритроцитов | |||||
|
1:2 |
1:4 |
1:8 |
1:16 |
1:32 | |||
|
Изотонич. р-р хлорида натрия, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 | |
|
Аллантоисная жидкость (вируссодержащий материал), мл |
0,5 |
|
|
|
вылить в дез. р-р |
-- | |
|
1% суспензия эритроцитов, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 | |
|
Перемешать, инкубировать при комнатной температуре в течение 30- 60 мин. | |||||||
|
Результаты: |
|
|
|
|
|
| |
|
ВЫВОДЫ: РГА положительная/отрицательная. В аллантоисной жидкости обнаружен/не обнаружен вирус, обладающий гемагглютинирующей способностью. Титр вируса ______. | |||||||
Таблица 55. РСК с иммунной и нормальной сыворотками
|
Результаты: |
Разведения сыворотки |
Контроли | ||||||||
|
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
эритр. |
комплемента |
гемолит. системы | ||
|
Иммунная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
|
Нормальная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
|
ВЫВОДЫ: РСК положительная с иммунной / нормальной сывороткой. Титр антител в _____________________ сыворотке _________. | ||||||||||
Условные обозначения: «+» - наличие гемолиза (РСК «-«),
«-» - отсутствие гемолиза (РСК «+«).
Рисунок 14. Реакция биологической нейтрализации (РБН) в культуре клеток для идентификации вируса
|
|
|
|
|
|
|
|
неизв. вирус + cыворотка X |
неизв. вирус + cыворотка Y |
Контроли: | |||
|
культ. клеток |
вируса |
cыворотки X |
cыворотки Y | ||
ВЫВОДЫ:
Таблица 56. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) с иммунной и нормальной сыворотками
|
Номера пробирок |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
Контроли | ||
|
Разведения сыворотки |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
сыво-ротки |
вируса |
эритро-цитов |
|
Ингредиенты: | |||||||||
|
Изотонич. р-р хлорида натрия, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
1,0 |
|
Исследуемая сыворотка 1:10, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 вылить |
0,5 |
--- |
--- |
|
Вирусный диагностикум, 4 AЕ, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
--- |
0,5 |
--- |
|
1% суспензия эритроцитов, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
Результаты: | |||||||||
|
Иммунная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Нормальная сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ВЫВОДЫ: РТГА положительная с иммунной / нормальной сывороткой. Титр антител в _____________________ сыворотке _________.
| |||||||||
Условные обозначения: «+» - наличие гемагглютинации (РТГА «-«),
«-» - отсутствие гемагглютинации (РТГА «+«).
Рисунок 15. Реакция биологической нейтрализации (РБН) в культуре клеток с парными сыворотками
|
Первая сыворотка |
Вторая сыворотка |
Контроли | |||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| ||
|
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
культ. клеток |
вируса |
первой сыв. |
второй сыв. | ||
ВЫВОДЫ: