5. Методы стерилизации. Характеристика.

1. Прокаливание – употребляется непосредственно перед употреблением. Прокаливают иглы, пинцеты, стеклянные палочки и др.

2. Стерилизация сухим паром. Применяют при обработке посуды и сухих материалов. Для этого их нагревают в сушильных шкафах в течение 2 часов при температуре 170 °С. При этом колбы и пробирки закрывают ватными тампонами, посуду заворачивают в бумагу, где она будет храниться после стерилизации.

3. Стерилизация текучим паром. Выполняется в кипятильнике Коха в течение трех дней по 30 мин ежедневно при 100 °.

4. Стерилизация насыщенным паром под давлением. Это наиболее быстрый и надежный способ стерилизации. Стерилизацию проводят в герметично закрывающемся толстостенным котле – автоклаве. Надежной стерилизации достигают нагреванием при 120 °С и давлением 1 атм. В течение 20 минут.

5. Пастеризация. Это нагревание при 65-80 °С в течение 30 минут с последующим быстрым охлаждением до 10-11 °С.

6. Стерилизация фильтрованием через микропористые фильтры. Применяется при обработке сред, компоненты которых легко разлагаются при нагревании.

6. Методы культивирования микроорганизмов. Питательные среды.

Различают два способа культивирования микроорганизмов: поверхностный и глубинный. Поверхностный выращивания осуществляется на поверхности жидкой или твердой питательной средах. Он сопровождается потреблением субстратов питательной

среды и выделением в нее продуктов жизнедеятельности. При глубинном культивировании микроорганизмы распределяются во всем объеме жидкой питательной среды в специальном аппарате − ферментаторе или биореакторе.

В настоящее время шире применяется глубинный способ культивирования, так как он максимально технологичен, легко управляем и при этом за короткое время получается большое количество бактериальной массы.

В промышленных условиях культивирование осуществляется двумя способами: периодическим и непрерывным.

Для осуществления периодического культивирования клетки микроорганизмов вносят в питательную среду, которая не обновляется на протяжении всего процесса. Компоненты среды также не удаляются из сосуда. Микроорганизмы при определенных условиях проходят все стадии роста и развития популяции.

При непрерывном культивировании, осуществляемом при помощи турбидостатов и хемостатов, выращивание микроорганизмов проводится с постоянным обновлением среды. Самые оптимальные условия для поддержания культуры создаются в фазе

экспоненциального (логарифмического) роста.

Питательная среда – жидкий, полужидкий или плотный субстрат, используемый для выращивания микроорганизмов (грибов, бактерий и прочее) в лабораторных и производственных условиях.

Среды отличаются по происхождению, консистенции, составу и назначению.

а) по происхождению

Естественные, искусственные и синтетические.

Естественные представляют собой натуральный продукт (молоко, хлеб, яйцо и др.), или естественны субстрат (сыворотка крови, желчь).

Искусственные среды готовят по определенным рецептам из настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов, азотистых веществ.

Синтетические среды готовят из химически чистых веществ (солей, углеводов, витаминов и др.), взятых в определенных соотношениях.

б) по консистенции

Жидкие, полужидкие и плотные (твердые).

Жидкие среды состоят из воды и растворенных в ней веществ (мясная вода, мясопептонный бульон).

Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде желатина (10-15 %) или агар-агара (1-2 %).

Полужидкие среды содержат те же уплотняющие вещества, но с меньшим количеством (0,2-0,3 %) агар-агара.

в) по назначению

Обычные, специальные, элективные и дифференциально-диагностические.

Обычные питательные среды применяют для выращивания большинства микроорганизмов. Это, например, мясопептонный бульон или мясопептонный агар.

Специальные среды применяются для выделения и культивирования определенных групп или видов микроорганизмов. Например, среда Чапека – для культивирования грибов.

Элективные среды пригодны для развития, приспособившегося к данным условиям существования вида микроорганизмов. Сопутствующие микроорганизмы либо совсем не растут на таких средах, либо развитие их сильно задерживается. Например, накопительные среды С.В. Виноградского для почвенных микроорганизмов.

Дифференциально-диагностические среды применяются для изучения биохимических свойств микробов и для выделения чистых культур некоторых микроорганизмов. Например, жидкая среда Гиса с углеводами.