2. Дыхательный тест с с-14-гликохолатом, с-14-д-ксилозой.

Тест с С-14-Д-ксилозой является высокоинформативным. Его чувствительность и специфичность близки к 90%. Доза радиации для пациента минимальная.  

5. Биохимические исследования кала

Для нарушений биоценоза характерно появление ферментов щелочной фосфатазы (в норме отсутствует) и энтерокиназы (в норме до 20 единиц), которые у здоровых людей инактивируются в толстой кишке.  

6. Газо-жидкостная хроматография фекалий

Метод позволяет оценить вещества, связанные с жизнедеятельностью микрофлоры.  

1. Газо-жидкостная хроматография в сочетании с масс-спектрометрией фекалий

Метод позволяет определять до 170 видов бактерий и грибов в различных биологических средах.  

7. Морфологическое исследование биоптата тощей кишки

При дисбиотических изменениях кишечного микробиоценоза в биоптате могут выявляться уплощение ворсин энтероцитов и инфильтрация воспалительными клетками собственной пластинки слизистой оболочки кишки.  

8. Молекулярные методы

Позволяют определить уникальную последовательность оснований в ДНК, исследовать рибосомальную РНК, которые специфичны для определенных микроорганизмов.

8. Опишите схему обследования на дисбактериоз кишечника. Какие питательные среды используются?

Материал для исследования — испражнения.

Подготовка к проведению исследования:

1. Отбор материала (испражнений)

2. Приготовление навески испражнений

3. Приготовление серийных разведений испражнений (для определения количества бактерий)

Кал собирают в стерильную посуду. Посуда стерилизуется автоклавированием (1 атм — 20 минут) или кипячением. Дезрастворы использовать нельзя.

Количество кала — 3-5 гр. Доставка в лабораторию не позднее 2 часов с момента забора. В крайних случаях разрешается хранение кала при температуре не более 12 часов от момента получения пробы.

Из доставленной пробы берут навеску кала — 0,2 — 1г и эмульгируют в пробирке с буферным раствором тиогликолевой кислоты в соотношении 1:10.

Из пробирки с первым разведением кала готовятся десятикратные серийные разведения кала. Для этого берут 8 стерильных химических пробирок. В каждую пробирку вносят по 4,5 мл буфера. Стерильной пипеткой (на 1 мл) из готового разведения 1:10 берут 0,5 мл гомогенизированного кала и вносят в пробирку с буферным раствором, перемешивают и сбрасывают пипетку в дезраствор. Для приготовления каждого разведения берут новую пипетку.

Берутся разные типы сред с учётом потенции микробов (для некоторых среда обогащения, для лругих – накопления).

Для определения ростка бифидобактерий – берут из самых больших разведений (так как их больше всего!!!) -7 – -11 на среду Блаурокка (Печеночный бульон, пептон ферментативный, лактоза, цистеина гидрохлорид, натрия хлорид, агар).

Для определения ростка лактобактерий и молочно-кислых стрептококков – также большое разведение – -7 на середу МРС (протеозопептон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, глюкоза, твин-80, аммония цитрат, натрия ацетат, магния сульфат, марганца сульфат, натрия гидрофосфат, агар-агар).

Для определения ростка энтеробактерий из средних разведений (-5) в чашки Петри на среды Эндо (Мясопептонный агар, лактоза, фуксин, сульфит натрия, гидрофосфат натрия, карбонат натрия), Левина (агар, лактоза, эозин, метиленовая синь, пептон ферментативный, калия гидровосфат, натрия гидрокарбонат) с количественным учётом.

Для определения гемолитической активности стрептококков используют кровяной агар (настой сердца, пептон, агар, натрия хлорид) из средних разведений.

Для определения клостридий берут навеску из средних разведений (-5) на среду Вильсон-Блер (натрия сульфит, панкреатический гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, железа цитрат, агар)

Для определения дрожжеподобных грибков берут из разведения -3 в среду Сабуро (декстроза. агар, смесь пептического перевара животной ткани и панкреатического гидролизата казеина).

Из этого же разведения берут стафилококки на ЖСА (МПА, натрия хлорид, желточная эмульсия).

Посев на среды накопления – из самых первых разведений на среду Плоскирева (панкреатический гидролизат рыбной муки с тиосульфатом и цитратом натрия, дрожжевой экстракт, натрий фосфорнокислый двузамещенный, желчь очищенная сухая, натрий хлористый, йод кристаллический, нейтральный красный, бриллиантовый зеленый, агар), посев на магниевую среду (магния хлорид, пептон ферментативный, натрия хлорид, калия дигидрофосфат, малахитовый зеленый) – для выявления ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ.

Затем инкубация и учёт.

Правила учёта:

- оценка морфологии в мазке по Граму, характера и количества колоний, культуральных и биохимических свойств;

- при необходимости продолжение идентификации (если вдруг обнаружили стафилококки, продолжаем их изучать дальше по стандартной схеме микробиологической диагностики стафилококковых инфекций);

- проведение перерасчёта с учётом разведения и посевной дозы;

- подсчёт микробов.