99) Особенности современных методов диагностики гельминтов. Методы овогельминтоскопии.

Просмотр препаратов (исследование) производят при малом увеличении микроскопа: объектив Х8 – Х10, окуляр Х7-Х10. Только в сомнительных случаях используют объектив - Х40. При просмотре яиц с прозрачной оболочкой необходимо затемнить поле зрения микроскопа.

I. Метод нативного мазка

1. Крупинку фекалий (30-40 мг) растереть на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина (можно в воде или в физиологическом растворе) до равномерной взвеси

2. Покрыть покровным стеклом

3. Исследовать

На одном предметном стекле готовят две капли взвеси фекалий на расстоянии 3-4 см друг от друга, используя разные палочки для фекалий.

Этот метод малоэффективен, особенно при слабой инвазии. Метод используют как дополнительный к другим методам. Преимущества: можно использовать для обследования большой группы населения, не трудоемок, не требует специального оборудования, специальной подготовки.

II. Метод толстого мазка (метод Като и Миура)

1. Квадратные пластинки целлофана (22х30 мм)выдержать в феноле, затем в смеси дистиллированной воды (100 мл) + глицерин (100 мл) + 3% малахит зеленый (1 мл)24 часа. ГЛИЦЕРИН ОБЕЗВОЖИВАЕТ ПЛАСТИНКУ ЦЕЛЛОФАНА, ФЕНОЛ ОБЕЗЖИРИВАЕТ, просветляет препарат. МАЛАХИТ ОКРАШИВАЕТ В ЗЕЛЕНЫЙ ЦВЕТ, что улучшает их наблюдение в нативном препарате.

2. Крупинку фекалий (100 мг) намазать на стеклянную пластинку (25х35 мм)- препарат мутный, яйца трудно различать, т.к. они окрашены пигментом фекалий в желто-коричневый цвет.

3. Накрыть влажной целлофановой пластинкой (препарат обезвоживается, обезжиривается и просветляется, яйца окрашиваются в зеленоватый цвет. Препарат легче изучать).

4. С помощью предметного стекла притереть целлофан.

5. Препарат выдержать в течение часа при комнатной температуре.

6. Затем выдержать 30 минут в сушильном шкафу при 400С.

7. Исследовать.

С помощью этого метода можно исследовать большой объём фекалий в препарате. Наиболее точный метод.

Не используется при исследовании яиц карликового цепня и анкилостом т.к. они быстро разрушаются.

Благодаря этому методу можно изготавливать постоянные препараты.

III. Метод Телемана – осаждения.

Основан на разности плотности яиц и раствора. Используется раствор меньшей плотности, чем яйца гельминтов (яйца тяжелее). Растворы эфиро-формалиновые, эфиро-уксусные.

1. Фекалии (1,5 г) смешать в стакане с 50% раствором соляной кислоты (5 мл) или с 10% раствором едкого натра – NaOH. Смесь пропустить через металлически фильтр.

2. Затем смесь перелить в пробирку с эфиром (5 мл).

3. Закрыть пробкой, встряхнуть до равномерной взвеси.

4. В результате в пробирке образуется три слоя взвеси.

5. Два верхних слоя слить.

6. К осадку добавить воду, встряхнуть.

7. Центрифугировать.

8. Исследовать 2 капли осадка при увеличении микроскопа 7Х10.

9. С помощью этого метода можно исследовать яйца всех гельминтов.

IV. Метод Фюллеборна — всплывания (флотации).

Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов всплывать в насыщенных солевых растворах (350 г поваренной соли + 1литр кипяченой воды = фильтровать через марлю). Используется раствор имеющий плотность большую, чем яйца гельминтов(яйца легче).

1. Одну часть фекалий смешать с 20-ю частями насыщенного раствора хлорида натрия (NaCl).

2. Удельный вес раствора составляет 1,18. Раствор добавлять постепенно.

3. Удалить крупные частицы фекалий.

4. Смесь оставить отстаиваться 40-60 минут.

5. Яйца гельминтов, имеющих меньший удельный вес, чем раствор всплывут на поверхность.

6. С поверхности проволочной петлей (диаметр – 1 см) снять несколько капель и перенести на предметное стекло.

7. Покрыть покровным стеклом и исследовать.

С помощью этого метода нельзя обнаружить яйца Trematoda и неоплодотворенные яйца Ascaris. Яйца этих гельминтов и яйца Trichuris trichiura можно обнаружить в осадке.