3_MIKROBIOLOGIYa_metoda_IMMUNITET

антителами, на втором – образовавшийся комплекс соединяется с ФИТЦ-

меченой сывороткой против Fc-фрагмента иммуноглобулинов кролика

(антивидовой конъюгат), которую получают путем иммунизации ослов,

лошадей и других животных кроличьими антителами. При положительном результате реакции наблюдают свечение, которое регистрируют с помощью люминесцентной микроскопии. Удобство использования этого метода состоит в том, что антивидовые конъюгаты универсальны – они могут использоваться для обнаружения любого антигена.

антивидовой конъюгат специфические кроличьи антитела искомый антиген

Рис. 22. Схема непрямого МФА

Иммуноблоттинг

Высокочувствительный метод, основан на сочетании электрофореза

(разделение антигенов по молекулярной массе) и ИФА (или РИА).

Используется при диагностике ВИЧ-инфекции.

Оценка состояния иммунной системы

Иммунным статусом (иммунореактивностью) называют структурное и функциональное состояние иммунной системы индивидуума, определяемое комплексом клинических и лабораторных иммунологических показателей.

Сила и форма иммунного ответа на один и тот же объект у разных людей может варьировать в широких пределах, а у одного и того же человека

- в различные периоды жизни и время суток — в зависимости от биоритмов,

обусловленных, например, колебаниями гормонального фона.В связи с этим при оценке иммунного статуса возможен большой размах колебаний

иммунологических параметров даже в условиях физиологической нормы, с

возможным коэффициентом вариации до 30%.

Показания к оценке иммунного статуса: трансплантации органов и тканей; выявление различных видов иммунопатологии; хронически текущие инфекционные и ряд соматических заболеваний; злокачественные новообразования; проведение цитостатической, иммунодепрессивной и иммуномодулирующей терапии; подготовка операциям, к ЭКО и др.

Оценка иммунного статуса базируется на комплексе показателей:

данных иммунограммы, клинического обследования (сбор анамнеза,

врачебный осмотр, рентгенологические, аппаратные обследования, клинико-

лабораторные методы (анализ крови, анализ мочи и т. п.).

Иммунограмма — это совокупность лабораторных методов иммунологического исследования крови или других биологических жидкостей, отражающих состояние различных звеньев иммунной системы человека.

Одни и те же иммунологические тесты, входящие в структуру иммунограммы, можно группировать на основе различных принципов.

Наиболее распространенными являются подразделения на тесты I уровня

(ориентировочные) и II уровня (функциональные).

Тесты 1 уровня могут быть выполнены в любой клинической им-

мунологической лаборатории первичного звена здравоохранения и позволяют выявить грубые нарушения со стороны иммунной системы.

Кпоказателям иммунограммы I уровня относят определение:

1)количества популяций и субпопуляций лимфоцитов: общее количество

(абсолютное в г/л и относительное в %) Т-лимфоцитов (СD3+), Th (СD4+), ЦТЛ (СD8+), NK (СD16+), В-лимфоциты (СD19+/СD20+);

2)концентрации сывороточных иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM);

3)фагоцитарной активности лейкоцитов;

4)сывороточного титра комплемента;

5)дополнительно - уровень ЦИК (циркулирующих иммунных комплексов) при оценке аутоиммунных, лимфопролиферативных,

хронических инфекционных заболеваний.

Информативным показателем является иммунорегуляторный индекс

(ИРИ) - сопоставление количества субпопуляций Т-лимфоцитов — СD4+Тh

и СD8+ в периферической крови (в нормесоставляет 1,6-2,2).

Определение содержания популяций и субпопуляций клеток иммунной системы, маркеров активации лимфоцитов и ряда других показателей при постановке иммунограммы основано на взаимодействии меченных флюоресцентной меткой моноклональных антител с соответствующими CD-

антигенами клеток.

Для детекции образующихся иммунных комплексов используют 2

основных методических приема:

1)люминесцентную микроскопию (непрямой МФА);

2)проточную цитофлюориметрию (the flowcytofluorimetry).

Наиболее точным, автоматизированным методом является проточная цитофлюориметрия. Метод основан на пропускании через суспензию клеток иммунной системы лазерного излучения и регистрации в проточном цитофлюориметере :

1)связывания клеток иммунной системы смеченными флюорохромами моноклональными антителами к поверхностным маркерам данной популяции или субпопуляции;

2)физических свойств этих клеток (диаметра ядра, размера и гранулярности клетки)

Тесты II уровня позволяют провести более тщательный анализ иммунного статуса и уточнить характер дефекта, выявленного на предыдущем этапе с помощью тестов 1 уровня. Они направлены на оценку функциональной активности лимфоцитов:

выявление пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов иих адаптационного резерва проводят в реакции бласттрансформации

лимфоцитов (РБТЛ) под действием стимуляторов — митогенов или

специфических антигенов с последующим подсчетом количества по-

лучаемых бластных форм.

регистрация CD-маркеров активации лимфоцитов (СD69, СD25,

СD71, HLA-DR, СD23, СD95);

определение уровней цитокинов, секретируемых клетками иммунной системы в ИФА, а также проточной лазерной цитофлюориметрии;

определение компонентов комплемента.

При интерпретации результатов иммунограммы следует иметь в

виду ряд важных моментов:

1)решающее значение в постановке диагноза имеют клинические данные,

иммунограмма несет вспомогательное диагностическое и прогностическое значение;

2)необходимо сопоставлять абсолютные и относительные (процентные)

значения иммунологических показателей, учитывать данные общего анализа крови и предполагаемую стадию иммунного ответа;

3)первоочередное значение при оценке иммунограммы имеет соотношение комплекса показателей иммунограммы;

4)однотипные изменения показателей иммунограммы могут наблюдаться при принципиально разных патологических процессах;

5)необходим учет индивидуальных особенностей пациента (возраста,

пола и др.).

Иммунопатология

Иммунопатология – это раздел иммунологии, изучающий патологические процессы и болезни, связанные с нарушением функционирования иммунной системы, их диагностику и лечение.

Основные типы иммунопатологических процессов:

1)ослабление функций иммунной системы при дефектах одного или нескольких звеньев иммунной системы (иммунодефициты);

2)избыточное реагирование иммунной системы преимущественно на экзогенные антигены (аллергическая гиперчувствительность);

3)неправильное реагирование иммунной системы на эндогенные антигены

(аутоиммунные заболевания);

4)лимфопролиферативные заболевания (опухоли иммунной системы).

Аллергическая гиперчувствительность

Гиперчувствительность – это объективно регистрируемые проявления и

симптомы, развивающиеся при воздействии определенных стимулов в дозах, не

вызывающих этих проявлений у индивидуумов в условиях физиологической нормы (рис.25). Гиперчувствительность, опосредованную иммунологическими ме-ханизмами, называют аллергической. Если иммунный механизм исключен или не доказан, состояние обозначается как неаллергическая гиперчувствительность.

Рис.25. Современная классификация и номенклатура гиперчувствительности

По данным официальной статистики аллергическими заболеваниями страдает от 10 до 15% населения. Это одно из наиболее частых проявлений патологии иммунитета.

Впервые четкая классификация иммунных механизмов тканевого повреждения при аллергиях была дана английскими учеными Робином Кумбсом (R. Coombs) и Филипом Джеллом (P. Gell) в 1969 г., в соответствии с которой выделялось 4 типа реакций (табл. 11).

1-3 типы опосредуются синтезом иммуноглобулинов к аллерге-

нам/антигенам, 4-й — формированием сенсибилизированных к антигену Т-

лимфоцитов.

Таблица11

Типы аллергических реакций

Механизмы развития аллергической гиперчувствительности

Вразвитии любого типа аллергической реакции выделяют 2 стадии:

1)стадия сенсибилизации — время от момента первичного контакта клеток иммунной системы с аллергеном/антигеном, развития иммунного ответа на него до образования и накопления продуктов иммунной реакции; длится в среднем 2 недели; клинические проявления отсутствуют.

2)стадия проявлений (разрешения) — при повторном контакте происходит взаимодействие аллергена с продуктами иммунной

реакции, приводящее к воздействию на определенные клетки и ткани и появлению характерных симптомов.

Тип 1 (анафилактический), или аллергическая IgE-опосредованная гиперчувствительность

Возникает при контакте с разновидностью антигенов, называемых

аллергенами. Аллергены могут быть:

природными - эпидермальные, пищевые, пыльцевые, аллергены насекомых

(инсектные), микроорганизмов и др.;

антропогенными - промышленные химические соединения, лекарственные препараты, вакцины, иммунные сыворотки, латекс, и др.

Аллергены могут иметь различные способы попадания в организм — контактный (через кожу), ингаляторный (через дыхательные пути),

алиментарный (через желудочно-кишечный тракт), парентеральный

(инъекционный, при укусах, ужалениях насекомых).

Вфазу сенсибилизации происходит:

1)формирование гуморального иммунного ответа на аллерген с образованием аллергенспецифичеких IgE

2)фиксация IgE на рецепторах мембрантучных клеток, базофилов.

Стадия проявления (разрешения) подразделяется на 3 фазы (рис.26):

1)иммунологическая - взаимодействие аллергена с IgЕ,

фиксированными на тучных клетках, дестабилизацияих мембран;

2) патохимическая - дегрануляция тучных клеток с выбросом большого количества биогенных аминов и медиаторов (гистамина,

серотонина, цитокинов, эйкозаноидов и др.);

3) патофизиологическая - развитие клинических проявлений под действием медиаторов на эндотелий, миоциты, нервные клетки и др.

Рис.26. Стадия разрешения IgE-опосредованной аллергической реакции

Эффекты действия медиаторов анафилаксии на организм:

расширение и повышение проницаемости сосудов, усиление кровотока,

хемотаксис эозинофилов, нейтрофилов, базофилов (в комплексе четыре вышеуказанных эффекта обусловливают возникновение таких проявлений, как гиперемия и отек в очаге, падение артериального давления);

спазм гладкой мускулатуры (яркое проявление этого эффекта — бронхоспазм с возможным развитием удушья);

усиление секреции слизи (ринорея, слезотечение и др.);

раздражение нервных клеток (выражается в возникновении зуда).

Анафилактический шок — острая системная IgE-опосредованная аллергическая реакция на повторный контакт с аллергеном, угрожающая жизни и сопровождающаяся выраженными гемодинамическими нарушениями, а также нарушениями функций других органов и систем.

Основные аллергены:

лекарственные препараты (местные анестетики, антибиотики,

сыворотки/иммуноглобулины, особенно при внутривенном введении);

яды насекомых при ужалениях.

Основные причины смерти – остановка сердца и асфиксия.

Атопии — случаи IgE-опосредованной аллергии, при которых установлена генетическая предрасположенность возникновения сенсибилизации организма к аллергенам окружающей среды.

Атопические заболевания проявляются в самом раннем возрасте. Для их развития характерна определенная последовательность — прогрессирование различных проявлений аллергии, начиная от младенчества

идалее (усиление симптомов уже развившейся формы атопии,

присоединение других форм или последовательная их смена с возрастом),

что получило название «аллергического марша». Характерно продолжительное течение со сменой периодов обострений и ремиссий.

Типичным «стартом» является атопический дерматит с последующим присоединением или сменой на атопический ринит (риноконъюнктивит) и

атопическую бронхиальную астму.

Тип 2 (цитотоксический)

Происходит выработка IgG к антигенам клеток собственного организма, которые могут являться естественным компонентам клеточных мембран или антигенами, вторично сорбированным на оболочках клеток при их повреждении лекарствами, вирусами и др.

Специфические IgG соединяются с антигенами на клеточных мембранах. Образовавшиеся иммунные комплексы активируют систему комплемента и эффекторные клетки (макрофаги, естественные киллеры,

цитотоксические лимфоциты и др.), запуская механизмы иммунного лизиса клеток собственного организма. Основными типами клеток-мишеней являются: эритроциты, эндотелиальные клетки сосудов, гепатоциты,

эпителиальные клетки почек и др.).

Тип 3 (иммунокомплексный)

Формирование иммунных комплексов при взаимодействии поступающих извне антигенов и образующихся к ним антителами IgG

определенных изотипов постоянно происходит в условиях физиологической