protokoly_2020

многоатомных спиртов, аминокислот и др. в соответствии с идентификационной таблицей.

4. Провизвели серотипирование выделенной чистой культуры с эшерихиозными поливалентными ОК-сыворотками в слайд-агглютинации:

-ОКА - «+»

-ОКВ - «+»

-ОКС - «-»

-ОКД - «-»

-ОКЕ - «-»

Дополнительно поставили реакцию слайд-агглютинации с монорецепторными сыворотками, входящими в состав поливалентной сыворотки ОКВ:

-О20:К84- «-»

-О26:К60- «+»

-О55:К59 - «-»

-О111ав:К58 - «-»

5.Для подтверждения результатов РА на стекле в двух рядах пробирок поставили развернутую РА с живой и прогретой кипячением (60 минут) исследуемой культурой имонорецепторнойсывороткой О26:К60 по схеме:

6.Произвели посев чистой культуры для определения ее чувствительности к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом по стандартной методике.

7.Посевы поставили в термостат при +37° С на сутки.

4этап исследования

1. Учет ферментативных свойств:

-глюкоза (газ) - «+»

-лактоза - «-»

-маннит - «+»

-сахароза - «-»

-дульцит - «+»

-индол - «+»

-сероводород - «-»

-орнитин - «+»

-лизин - «+»

-цитрат Симмонса - «-»

-ацетат натрия - «+»

2.Учет развернутой РА:

-титр живой культуры с сывороткой О26:К60–1/400

-титр «гретой» культуры с сывороткой О26:К60–1/1600

3.Идентифицировали культуру по совокупности ферментативных (с помощью таблиц) и антигенных свойств.

Заключение: на основании изучения морфологических, культуральных, ферментативных, антигенных считаем, что из фекалий больного выделена культура Escherichia coli серовариант О26:К60.

Протокол № 23 Бактериологическое исследование фекалий на холерное

вибрионосительство

1 этап исследования

1.2г испражнений отобрали с помощью ложки-шпателя, вмонтированного в крышку стерильного контейнера, сразу после дефекации из дезинфицированного и тщательно вымытого судна, на дно которого был помещен лист плотной чистой бумаги. Материал был доставлен в лабораторию в течение 2 ч.

2.Посев материала:

-0,5-1,0 г(мл) нативных фекалий внесли во флакон с 50 мл 1% пептонной воды (1-ой средой накопления);

-1г фекалий суспендировали в 5 мл 0,9%-ого раствора хлорида натрия, тщательно гомогенизировли, оставляли на 30 мин. для оседания крупных частиц, после чего выполнили посев надосадочной жидкости петлей на щелочной агар (ЩА) и на элективную среду TCBS.

3. Флаконы поместили в термостат на 6-8ч, чашки оставляют на 12-18ч. при при +37 °С.

2 этап исследования

1.Учет роста: во флаконе с первой пептонной водой через 6ч. обнаружили характерный рост в виде нежной поверхностной пленки.

2.С первой среды накопления петлей делали высев на пластинки щелочного агара и TCBS, а также в 5 - 8 мл второй среды накопления.

3.Посевы поместили в термостат при +37 °С, просматривали соответственно через 6-8 и 10-18ч.

3 этап исследования

1.Учет роста: в пробирке со второй пептонной водой обнаружили характерный рост в виде нежной поверхностной пленки; на ЩА через 12ч. от момента первичного посева - колонии в S-форме: круглые, гладкие, плоские, голубоватые, гомогенные, с ровными краями, прозрачные в проходящем свете и светло-серые с голубым или зеленоватым оттенком, 1-3 мм в диаметре; на TCBS через 18ч. от момента первичного посева - колонии желтого цвета.

2.Из выросшей культуры приготовили мазок, в мазке — Грамизогнутые и прямые палочки, также препарат «раздавленная капля», при темнополевой микроскопии — подвижные вибрионы.

3.Определили оксидазную активность культуры из подозрительных колоний - «+».

4.Колонии агглютинировли холерными сыворотками в разведении 1:50:

-О1 - «+»

-О139 - «-»

-Огава - «+»

-Инаба - «-»

5.Выдали предварительный ответ об обнаружении в исследуемом материале холерного вибриона О1.

6.Колонии, давшие положительные результаты в оксидазном тесте и слайд-агглютинации, отсеяли на полиуглеводныую лактозо-сахарозную среду и на сектор пластинки щелочного агара для накопления чистой культуры.

7.Посевы поместили в термостат при +37 °С на 10-12ч.

4 этап исследования

1.Учет роста: в пробирке с лактозо-сахарозной средой обнаружили изменение цвета столбика при сохранении цвета скошенной части без образования газа:

-лактоза - «-»

-сахароза - «+»;

на ЩА — полупрозрачный нежный бесцветный налет.

2.Для проверки чистоты выросшей на ЩА культуры приготовили мазок, в мазке — Грамизогнутые и прямые палочки.

3.Повторили агглютинацию холерными сыворотками:

-О1 (1:100) - «+»

-О139 - «-»

-Огава (1:50) - «+»

-Инаба (1:50) - «-»

4.Провели идентификацию выделенной культуры по фенотипическим признакам путем посевов:

-на пластинку ЩА с полимиксином

-на ЩА «сплошным газоном» и нанесли в соответствующие сектора по капле холерных бактериофаов «С» и Эль-Тор

-в среды Гисса с сахарозой, маннозой, арабинозой.

5.Посевы поместили в термостат при +37 °С на 10-12ч.

5 этап исследования

1.Учет результатов фенотипической идентификации:

-рост на ЩА с полимиксином - «+»

-чувствительность к фагу «С» - «-»

-чувствительность к фагу «Эль-Тор» - «+»

-сахароза - «+»

-манноза - «+»

-арабиноза - «-»

2.Идентифицировли выделенную культуру по соответствующим

таблицам.

Заключение: на основании изучения морфологических, культуральных, ферментативных, антигенных свойств, чувствительности к холерному бактериофагу считаем, что из фекалий обследуемого выделена культура Vibrio cholera, биовар Эль-Тор, серовар Огава.

Протокол № 24 Серологическая диагностика бруцеллеза

У больного с подозрением на бруцеллез в качестве исследуемого материала использовали сыворотку крови.

Для постановки предварительного диагноза поставили ориентировочную реакцию агглютинации Хеддельсона на стекле с концентрированной цельной сывороткой обследованного и концентрированным бруцеллезным диагностикумом, окрашенным метиленовым синим.

Реакцию ставили на тщательно вымытом обезжиренном стекле (схема 1). В квадраты I, II, IIIвнесли цельную исследуемую сыворотку в объемах 0,04, 0,02, 0,01 мл. В IV и V квадраты внесли 0,03 мл раствора натрия хлорида с добавлением 0,5% фенола. В I,II, IIIиIV(КА) квадраты внесли по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, в V квадрат (КС) - 0,03 мл сыворотки.

Содержимое квадратов с помощью стеклянной палочки осторожно смешали, начиная с наименьшего объема сыворотки. Стекло равномерно подогрели над пламенем спиртовки в течение 15-30 секунд.

Схема 1.

Постановка РА Хеддельсона

Учет производили непосредственно после постановки реакции.

РА Хеддельсона положительна, следовательно сыворотка обследованного предположительно содержит антитела к возбудителю бруцеллеза.

Для определения титра специфических антител и подтверждения диагноза «бруцеллез» поставили развернутую РА Райта в пробирках в соответствии со схемой 2.

Схема 2.

Постановка РА Райта

дез.раствор

Титр исследованной сыворотки в РА Райта составил 1/400, что превышало диагностический(1/100-1/200).

Заключение

На основании результатов РА Хеддельсона и РА Райта можно подтвердить, что у больного бруцеллез.

Протокол № 25

Серологическая диагностика первичного и повторного (болезни Брилля-Цинссера) эпидемического сыпного тифа

У больных с эпидемическим сыпным тифом (№1, №2, №3) для дифференциации первичного и повторного заболевания (болезни БрилляЦинссера) взяли кровь, получили из нее сыворотку. С полученными сыворотками поставили ИФА (непрямой вариант) для обнаружения IgM и IgG к антигену Провачека возбудителя эпидемического сыпного тифа (Rickettsia prowazekii). При постановке ИФА использовали конъюгаты против IgM и IgG человека.

Схема постановки ИФА

Условные обозначения:

К+ - положительная контрольная сыворотка К- - отрицательная контрольная сыворотка КК – контроль конъюгата №1 – сыворотка больного №1 №2 - сыворотка больного №2 №3 - сыворотка больного№3

С помощью мультискана произвели учет ИФА.

У больного №1 обнаруженыIgM, отсутствуют IgGк антигену Провачека,

убольного №2 отсутствуют IgM, обнаруженыIgGк антигену Провачека,

убольного №3 отсутствуют IgM и IgGк антигену Провачека.

Заключение:

На основании результатов ИФА считаем, что у больного №1 подтвержден диагноз «первичный эпидемический сыпной тиф», у больного №2 - «повторный эпидемический сыпной тиф (болезнь Брилля-Цинссера)». У больного №3 антитела (IgM и IgG)к антигену Провачека не обнаружены, что не подтверждает у него диагноз «эпидемический сыпной тиф».

Протокол № 26 Профилактическое (скрининговое) обследование населения

на сифилис

У сотрудников детского сада «Радуга» (9 чел.) с целью планового профилактического (скринингового) обследования на сифилис забрали кровь для постановки реакции микропреципитации на сифилис (МРП).

В качестве исследуемого материала использовали сыворотку обследованых для выявления антител к неспецифическому (кардиолипиновому) антигену, сходному по иммунохимической природе с антигеном возбудителя сифилиса. Предварительно сыворотку инактивировали при +560С 30 мин.

Для постановки МРП в лунки планшета внесли по 0,09 мл сыворотки обследованных, а также контрольной положительной, слабоположительной и отрицательной сывороток. Затем в каждую лунку добавили по 0,03 мл эмульсии кардиолипинового антигена (схема 1). Ингредиенты перемешали встряхиванием в течение 5 мин., затем в каждую лунку внесли по 0,09 мл раствора натрия хлорида, перемешали и оставили при комнатной температуре на 5 мин.

Схема 1.

Постановка МРП (качественный вариант)

Условные обозначения:

К(+) - положительная контрольная сыворотка К(-) - отрицательная контрольная сыворотка

К(±) - слабоположительная контрольная сыворотка

Результаты учитывали после появления хлопьев в контроле слабоположительной («±») сыворотки.

Схема 2.

Учет МРП

В лунке слабоположительной сыворотки обнаружили образование небольшого количества мелких хлопьев (++). В опытной лунке №3 обнаружили образование крупных хлопьев (++++), значит МРП положительна и сыворотка обследованного №3, предположительно, содержит антитела к кардиолипиновому антигену.

Заключение

Результаты МРП свидетельствуют о наличии в сыворотке крови обследованного №3 антител к кардиолипиновому антигену. Для подтверждения результата рекомендуется постановка ИФА.