8. Антигенная характеристика

Стафило - наличие тейховой кислоты и белка А клеточной стенки

Стрепто - для определения серогруппы применяют реакцию преципитации в жидкой среде с использованием солянокислых экстрактов, полученных из стрептококков, и диагностических групповых сывороток.

9. Фаготипирование - с помощью 22 фагов международного набора для проведения

10. Чувствительность к антибиотикам –

Стафило - методом диффузии в агаре с помощью стандартных дисков или методом серийных разведений.

Стрепто - метод серийных разведений в бульоне необходимо использовать бульон Мюллера-Хинтон.

Серологический метод

Стафилококки

4. Определение титра анти-а-токсина в сыворотке крови больных реакцией торможения гемолиза по Выгодчикову.

5. Определение титра АТ к риботейхоевой кислоте,

6. Проведение реакции аутоагглютинации

Стрептококки

3. Определение наличия в крови стрептококкового АГ в РСК и специфических стрептококковых антител к токсинам.

4. Антистрептолизин О определяют в реакции нейтрализации.

Заключение

3. В семье 4 из 5 человек заболели брюшным тифом. Пятый, незаболевший член семьи – женщина 50 лет. Она перенесла брюшной тиф несколько лет назад. В настоящее время практически здорова. Однако 1–2 раза в год у нее бывают приступы холецистита. Могла ли она быть источником инфекции? Как (с помощью каких методов) это установить?

Данная женщина могла быть источником инфекции, если лечение не было произведено до конца и произошла хронизация процесса. Возбудителем инфекции является микроб – Salmonella Typhi.

Для диагностики используется бактериологический метод исследования:

Материал для исследования – желчь, кал во время приступов холецистита.

1. Накопление возбудителя в селентиновом бульоне

2. Посев материала на дифференциально-диагностические питательные среды – Эндо, Левина, Плоскирева и ВСА. Культивируют сутки при 37 градусах.

3. Учет характера роста

Колонии нежные, круглые, гладкие

ВСА – черные колони

На среде плоскирева бесцветные

На среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии;

На среде Левина – светло-фиолетовые колонии;

4. Посев на среду Окельницкого (выделение чистой культуры) 2) Идентификация

Микроскопирование – Окраска по Грамму, красные закругленные палочки, располагающиеся одиночно или попарно;

Биохимические свойства – посев на среду Гисса, ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу, не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол,

Антигенная характеристика - Н-антиген – жгутиковый термолабильный, О-антиген – соматический термостабильный и Vi-антиген – антиген вирулентности.

Фаготипирование - у S. Typhi типируют Vi-фагами;

Чувствительность к антибиотикам - методом проточной цитометрии с применением аптамеров

3) Начиная со 2-й недели заболевания возможно проведение серологического исследования:

А) РИГА ставят с 0-, Н- и Vi-диагностикумами. Положительным считают диагностический титр не менее 1:200;

Б) ИФА.

4) На основе полученных данных делается заключение.

4. У пациента, поступившего в стационар с диагнозом «Пищевая токсикоинфекция», резко нарастают явления обезвоживания. Как можно установить этиологию заболевания? Составить алгоритм микробиологического исследования биоматериала.

Данный патологический процесс может быть вызван - V. Cholerae.

Вследствие высокой контагиозности данного заболевания необходимо использовать экспресс-методы диагностики, так же используется бактериологический метод исследования.

Материал для исследования - испражнения, рвотные массы, желчь.

Экспресс методы: РИФ, ПЦР, ИФА.

Бактериологический метод исследования:

1) Посев материала на 1% пептонную воду для обогащения, через 6 часов пленку с пептонной воды пересевают на щелочной ага или среду TCBS (тиосульфатцитрат-

бромтимоловый синий, сахароза)

На щелочном агаре круглые прозрачные S-колонии с ровными краями, маслянистые, голубоватые в проходящем свете.

На агаре TCBS образует желтые колонии.

2) Идентификация

Микроскопирование – окраска по Грамму, подвиные прямые или изогнутые палочки.

Биохимические свойства –сбраживают до кислоты глюкозу, мальтозу, сахарозу, маннит, лактозу (медленно), левулезу, гликоген и крахмал. Не сбраживают арабинозу, рамнозу,

дульцит, инулин, инозит. Посев на триаду Сахаров Хейберга: 1 группа -холерный вибрион сахароза (+), манноза (+) и арабиноза (-), остальные 5 групп Хейберга объединяют нехолерные вибрионы

Антигенная характеристика - термостабильные О-(150 серогрупп) и термолабильные Н-антигены.

Фаготипирование - классический вибрион - фаг С4, Эльтор - фаг Эльтор-2

Чувствительность к антибиотикам - применяют стандартный диско-диффузионный метод. При этом используют диски, пропитанные фторхинолонами (ципрофлоксацин, офлоксацин, ломефлоксацин), левомицетином, рифампицином, тетрациклином (доксициклином)

3) На основе полученных данных делается заключение.

Серологическая диагностика чаще всего применятся для выявления вирусоносителей и переболевших. Используют РА, РПГА - положительный ответ получают при наличии высокого титра (в РА-1:180-1:3200) или при нарастании его в парных сыворотках.

5. У новорожденного обнаружен конъюнктивит с гнойным отделяемым. Мать практически здорова, но в ее анамнезе – воспаление придатков матки. Что можно заподозрить и как установить этиологию заболевания у ребенка и матери?

Можно предположить, гонококковую инфекцию: у материи гонорея, а у ребенка бленнорея.

Для установления этиологии заболевания необходимо использовать бактериоскопический, бактериологический и серологический методы.

Материал для исследования – гнойное отделяемое из уретры и с конъюнктивы глаза.

1) Бактериоскопическое исследование. Нужно приготовить 2 мазка:

А) Окраска по Граму – грамотрицательные диплококки бобовидной формы расположенные по парно;

Б) Окраска метиленовым синим – незавершенный фагоцитоз.

2)Бактериологическое исследование

А) Материал засевают на специальные питательные среды: КДС (казеин, дрожжевой экстракт и сыворотка крови), сывороточный агар. Инкубируют при 37⁰ в течении 24-72 часов

Гонококки, содержащие в клеточной стенке протеин II, образуют слегка мутные бесцветные колонии; бактерии, не содержащие протеин II, образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы с ровными краями.

Далее культуру пересевают на сывороточный питательный агар для выделения чистой культуры

Б) Идентификация

Микроскопирование – Окраска по Граму – грамотрицательные диплококки бобовидной формы расположенные по парно;

Биохимические свойства –разлагают только глюкозу с образованием кислоты, измененные формы иногда не ферментируют ни одного углевода, продуцируют каталазу и цитохромоксидаз Протеолитическая активность отсутствует: аммиака, сероводорода и индола не образую

Антигенная характеристика – наличие пилей, поринового белка, белков наружной мембраны и липоолигосахарида.

Чувствительность к антибиотикам – метод разведения в агаре, метод Е-тестов, ПЦР (генетические маркеры).

В) На основе полученных данных делается заключение.

3) Серологический метод используют при хронической гонорее, при отсутствии у больного выделений.

РСК по Борде—Жангу по стандартной схеме, в качестве АГ для РСК применяют гоновакцину или АГ из убитых гонококков

6. На фоне ремиссии у пациента, переболевшего пневмонией и получившего антибиотикотерапию, резко повысилась температура, слизистая оболочка рта покрылась серо-белым налетом. Как выявить этиологию нового заболевания?

Данный патологический процесс, может быть, вызван дрожжеподобными грибами рода Candida.

Для выявления этиологии заболевания необходимо использовать микроскопический, микологический, серологический методы.

Материал для исследования – налет из полости рта.

1) Микроскопический метод – окраска по Граму, грамположительные дрожжеподобные почкующиеся овальные или округлые клетки. Наличие псевдомицелия, мицелия с перегородками и почкующихся бластопор

2) Микологический метод:

1. Посев материала на бульон Сабуро и инкубирование 3-5 суток при температуре 35С, далее пересевают культуру на агар Сабуро с глюкозой (среда N2) и инкубируют 24-48 часов при 35C.

В стерильные среды перед посевом добавляют пенициллин и стрептомицин для подавления роста сопутствующей бактериальной флоры.

2. Учет характера роста

образуются круглые, диаметром до 1 см, выпуклые сметанообразные гладкие колонии белого цвета с ровными краями и глубоким врастанием в среду ветвистого древовидного псевдомицелия.

3. Выделенную чистую культуру пересевают в жидкие среды ( картофельную, кукурузную среды, морковно-картофельный отвар и др.) для выявления псевдомицелия

В жидких питательных средах Candida образуют равномерное помутнение, осадок или пленку на поверхности среды.

4. Идентификация

Микроскопирование – окраска по Граму, грамположительные дрожжеподобные почкующиеся овальные или округлые клетки. Наряду с псевдомицелием, у этих грибов можно найти истинный мицелий и хламидоспоры (крупные двухконтурные споры с зернистым содержимым)

Биохимические свойства – не обладают уреазной активностью, расщепляют глюкозу, утилизируют углеводы, нитраты не утилизируют,

Дифференциальным признаком, является способность образовывать ростовые трубки - трубкообразные выросты бластоспор (признак РТ).

Антигенная характеристика – чрезвычайно гетерогенная группа, внутри которой имеются как родственные, так и обособленные виды.

Чувствительность к антибиотикам – посев на ВДП (миндал.), посев на МПО (влаг.).

В) На основе полученных данных делается заключение.

3)Серологический метод: реакция агглютинации, РСК, РП, ИФА с кандидозным антигеном.