58 58. Правила оформления и подачи экстренного извещения на инфекционного больного.

Информация в виде Экстренного извещения должна содержать: фамилию, имя, отчество больного (носителя), возраст, диагноз, дату заболевания, место жительства, место работы и (или) учебы; для детей, посещающих детское дошкольное учреждение, его адрес, номер и дату последнего посещения; перечень проведенных первичных противоэпидемических мероприятий, включая место и дату госпитализации. В Экстренном извещении фиксируются также дата и час первичной сигнализации, фамилия, имя, отчество и должность передавшего и принявшего сообщение, регистрационный номер сообщения.  Форма Экстренного извещения утверждается Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора Российской Федерации.

2. Правила оформления и подачи экстренного извещения на инфекционного больного.

3. Экстренное извещение об инфекционном заболевании, пищевом, остром профессиональном отравлении, необычной реакции на прививку.

4. 1. Диагноз _______________________________________________________

5. (подтвержден лабораторно: да, нет (подчеркнуть))

6. 2. Фамилия, имя, отчество ________________________________________

7. 3. Пол: м. ж. (подчеркнуть) ______________________________________

8. 4. Возраст (для детей до 14 лет — дата рождения) _________________

9. 5. Адрес, населенный пункт ___________ район _____________________

10. улица ____________________________________ дом N _____ кв. N _____

11. __________________________________________________________________

12. (индивидуальная, коммунальная, общежитие — вписать)

13. 6. Наименование и адрес места работы (учебы, детского учреждения)

14. __________________________________________________________________

15. 7. Даты:

16. заболевания ___________________________________________________

17. первичного обращения (выявления) ______________________________

18. установления диагноза _________________________________________

19. последнего посещения детского учреждения, школы _______________

20. госпитализации ________________________________________________

21. 8. Место госпитализации __________________________________________

22. 9. Если отравление — указать, где оно произошло, чем отравлен

23. пострадавший _____________________________________________________

24. 10. Проведенные первичные противоэпидемические мероприятия и

25. дополнительные сведения __________________________________________

26. 11. Дата и час первичной сигнализации (по телефону и пр.) в СЭС __

27. __________________________________________________________________

28. Фамилия сообщившего ______________________________________________

29. Кто принял сообщение _____________________________________________

30. 12. Дата и час отсылки извещения _________________________________

31. Подпись пославшего извещение _____________________________________

32. Регистрационный номер __________________________ в журнале ф. N 60

33. лечебно-профилактического учреждения

34. 13. Дата и час получения извещения СЭС ___________________________

35. Регистрационный N _______________ в журнале ф. N 60 санэпидстанции

36. __________________________________________________________________

37. Подпись получившего извещение.

57. 57. Оценка иммунного статуса. Современные методы оценки клеточных реакций иммунитета, количественные и функциональные методы: определение субпопуляции лимфоцитов моноклональными антителами и проточной цитометрией, реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ), реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), реакция иммунофлуоресценции (РИФ).

Фенотипирование лимфоцитов широко применяется в клинической иммунологии. В основе метода лежит взаимодействие моноклональных антител, меченных флуоресцентной меткой, с поверхностными антигенами лимфоцитов и последующий анализ образцов на проточном цитометре. Возможно использование одного моноклонального антитела, меченного флуорохромом, или двух различающихся по специфичности моноклональных антител, меченных разными флуорохромами (рис. 2.7). Определяют процент клеток, несущих на своей поверхности искомый антиген, и среднюю интенсивность свечения, которая характеризует выраженность экспрессии исследуемого антигена. Для проведения исследования можно использовать как цельную кровь, так и предварительно выделенные

РБТЛ может проводиться с бактериальными, лекарственными, бытовыми, пыльцевыми аллергенами и с неспецифическим стимулятором фитогемагглютинином (ФГА).

Реактивы и оборудование: ФГА (венгерский препарат с исходной концентрацией 4 мг/мл, рабочее разведение 0,1 мл ФГА + 1,9 мл среды 199), среда 199 с добавлением 100 ЕД пенициллина и 50 ЕД стрептомицина на 1 мл среды, гепарин, краситель аэурэозин Романовского — Гимза, термостат, стерильный бокс, микроскоп, камера Горяева, предметные стекла, стерильная посуда (пробирки, пастеровские пипетки, пипетки на 1,0 и 5,0 мл, пенициллиновые флаконы и резиновые пробки), шприцы 1, 10, 20-граммовые.

Техника. В стерильную пробирку; смоченную гепарином (0,1 мл на 5 мл крови), вносят венозную кровь, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 40—50 минут. После оседания эритроцитов пастеровской пипеткой отсасывают плазму, содержащую лейкоциты, в стерильную пробирку. Отбирают 1 мл плазмы для постановки реакции. Подсчитывают число клеток в счетной камере Горяева (А), оставшуюся плазму освобождают от лейкоцитов центрифугированием (1000 об/мин) в течение 10 минут. Аутоплазму используют в дальнейшей работе для приготовления питательной среды (для культивирования клеток), разводя средой 199. Оптимальная концентрация клеток для постановки РБТЛ— 1:10⁶ в 1 л. Для достижения данной концентрации 1 мл плазмы с известным количеством лейкоцитов (А) разводят до определенного объема (х) питательной средой х = А : 10⁶ (в 1 л) — конечный объем смеси, в 1 л которого содержится 1 X 10⁶ клеток. Разведенную в нужной концентрации клеточную взвесь разливают в стерильные пенициллиновые флаконы по З мл, добавляют по 0,1 мл ФГА (в рабочем разведении), плотно закрывают флаконы резиновой пробкой и культивируют клетки в термостате при 37° С в течение 3 суток. Через трос суток флаконы вынимают и сливают надосадочную жидкость, осадок на дне флакона тщательно смешивают с оставшимися несколькими каплями среды, продувая воздух через пастеровскую пипетку. Наносят каплю взвеси на предметное стекло, подсушивают на воздухе, фиксируют в метаноле 3 минуты и красят по методу Романовского — Гимза в течение 15 минут.

Оценка результатов. Просматривается 300—400 клеток, при этом подсчитывается количество бластов и бластоподобных переходных форм лимфоцитов. Подсчитывается количество трансформированных клеток в процентах к общему числу просчитанных клеток (у здоровых детей их количество составляет 60—70%).

Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), микрометод А. Г. Артемовой (1973)

Реакция проводится обычно с бактериальными и лекарственными аллергенами, иногда с пищевыми. В реакции используются гепаринизированная кровь больного и испытуемые аллергены в той же концентрации, которая применяется для кожного тестирования.

Реактивы и оборудование: среда 199, 0,9% раствор хлористого натрия, гепарин, цемент «фосфат», термостат, спиральная центрифуга, микроскоп, часовые стекла, миграционные капилляры Трошанова.

Техника. В стерильную пробирку, смоченную гепарином (1—2 капли), набирают 3—5 мл крови из вены больного и быстро перемешивают. Затем гепаринизированную кровь в объеме по 0,2 мл наносят на два часовых стекла, одно из которых является контрольным. На опытное добавляют 0,05 мл аллергена, а на контрольные—0,05 мл среды 199 или 0,9% раствора хлористого натрия, используемого для разведения аллергена. Смеси перемешивают отдельными стеклянными палочками. В каждую смесь погружают конец пластинки, содержащий 5 прямоугольных микрокапилляров  с поперечным сечением 0,4 X 0,15 мм (миграционные капилляры Трошанова). Концы капилляров замазывают свежеприготовленным цементом «фосфат» (модификации И. П. Замотаева с соавт., 1974) и центрифугируют в спиральной центрифуге УС в течение 5 минут при 2800 об/мин. В результате центрифугирования над слоем эритроцитов образуется слой лейкоцитов. Затем капилляры помечают в термостат при 37° С на 18—20 часов под углом 10°. Исследование опытного и контрольного препаратов проводят под микроскопом при малом увеличении объектива (Х20) с помощью измерительной сетки, вставляемой в окуляр (X 4).

Оценка результатов. Определяется зона миграции лейкоцитов в опытных и контрольном микрокапиллярах. Размер зоны миграции лейкоцитов оценивают по количеству квадратов сетки, полностью заполненных лейкоцитами. Для каждой пробы определяют среднюю величину из показателей 5 контрольных и 5 опытных микрокапилляров с последующим подсчетом индекса торможения миграции лейкоцитов (ИТМЛ) по формуле       ИТМЛ = [(Пк - По)/Пк] ·100%, где Пк — средний показатель зоны миграции лейкоцитов 5 контрольных, По —5 опытных микрокапилляров (табл. 5).

Реакция оценивается как отрицательная, если ИТМЛ в опытном капилляре отличается от контрольного менее чем на 30%, слабо положительная ( + ) при различии ИТМЛ на 30—40% и положительная (++), если разница более 50%.

1. реакция иммунофлуоресценции (РИФ).

Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса).Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител.  Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.  Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.