- •1. Луи Пастер и его роль в развитии микробиологии. Разработка Пастером научных основ специфической профилактики инфекционных болезней.
- •4. И.Г.Савченко и его роль в развитии отечественной микробиологии. Развитие микробиологии в России. Роль медицинской микробиологии в осуществлении профилактического направления здравоохранения.
- •5. Роль отечественной микробиологии в санитарном и противоэпидемическом обеспечении Российской Армии и укреплении обороноспособности нашей страны. Морфология микробов
- •1. Определение понятия о микробах. Понятие о виде микробов. Основные принципы классификации микроорганизмов. Критерии и признаки, используемые при классификации. Нумерическая таксономия.
- •3. Строение бактериальной клетки. Функции клеточной стенки. Структура клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Пептидогликан, липополисахарид, липопротеин, внешняя мембрана, их структура, функции.
- •5. Строение бактериальной клетки. Цитоплазматическая мембрана, ее структура и основные функции. Роль мембраны в процессах мобилизации энергии, механизм энергизации мембраны.
- •6. Рибосомный аппарат бактериальной клетки, его функции. Структура рибосмы. Содержание рибосом в клетке. Сущность процессов транскрипции и трансляции.
- •7. Споры бактерий. Образование и структура споры, ее прорастание. Генетический контроль спорообразования.
- •6. Ферментация углеводов как дифференциально-диагностический признак бактерий. Среды Гисса. Принципы их конструирования. Оценка результатов роста бактерий на средах Гисса.
- •Генетика микроорганизмов
- •1. Ядерный аппарат у бактерий и его особенности. Механизм репликаиии бактериальной хромосомы.
- •2. Бактериальная хромосома, ее упаковка в клетке. Формы обмена генетическим материалом у бактерий: конъюгация, трансформация, трансдукция, трансфекция и сексдукция.
- •3. Конъюгативный механизм обмена генетическим материалом у бактерий. F-плазмиды, их роль, функции tra-оперона.
- •4. Генетический контроль синтеза факторов патогенности у бактерий.
- •6. Плазмиды бактерий. Определение понятия. Классы плазмид. Характеристика r-плазмид, их значение, распространение среди бактерий.
- •1. Антисептика. Дж. Листер и н. И. Пирогов - основоположники антисептики. Асептика. Методы стерилизации.
- •2. Влияние на микробов физических факторов. Стерилизация. Пастеризация. Тиндализация.
- •3. Антагонизм среди микробов. Работы и. И. Мечникова в этой области. Микробы- антагонисты как продуценты антибиотиков.
- •5. Микрофлора воздуха. Роль воздуха в распространении возбудителей инфекционных болезней. Методы исследования микрофлоры воздуха.
- •6.Микрофлора воды. Роль воды в распространении возбудителей инфекционных болезней. Понятие о коли-титре и коли-индексе.
- •7. Микрофлора почвы. Роль почвы в распространении возбудителей инфекционных болезней. Значение почвы в распространении столбняка в условиях Краснодарского края.
- •8. Нормальная микрофлора человека и ее значение для организма. Микрофлора толстого кишечника. Ее формирование и состав. Дисмикробиоценоз, причины возникновения и способы предупреждения и лечения.
- •9. Сапрофитизм и паразитизм микробов. Патогенность и ее проявление (инфекциозность агрессивность, токсическое действие). Факторы патогенности. Вирулентность, методы ее определения.
- •10. Пути и способы проникновения патогенных микробов в организм человека. Динамика развития инфекционного процесса, периоды. Бактерионосительство и его значение.
- •12. Экзотоксины и эндотоксины, их свойства, химическая природа, действие на организм.
- •13. Влияние социальной среды на возникновение, течение и исход инфекционных болезней.
- •Иммунология
- •1.Луи Пастер и его роль в развитии микробиологии. Разработка Пастером научных основ специфической профилактики инфекционных болезней.
- •2. Виды иммунитета. Приобретенный иммунитет, пассивный и активный иммунитет. Нейро-гуморальные механизмы регуляции продукции антител (гипоталамо-гипофизо-адренокортикальная система).
- •4. Комплемент, состав, основные свойства. Пути активации. Участие комплемента в реакциях иммунитета. Рск, методика ее постановки и практическое использование.
- •7. Антигенное строение микробной клетки. Основные группы антигенов. Химическая природа антигенной специфичности. Значение изучения антигенов в серологической классификации микроорганизмов.
- •9. Иммунные сыворотки, их назначение, способы получения. Приготовление диагностических агглютинирующих сывороток и их практическое применение.
- •10. Структура молекулы антитела. Константные и вариабельные участки легких и тяжелых полипептидных цепей, определяемые ими свойства антител. Классы и типы иммуноглобулинов.
- •11. Антитоксины, их свойства, механизм действия. Значение антитоксинов в формировании иммунитета. Получение и титрование антитоксических сывороток, применение в медицинской практике.
- •12. Иммунитет. Выработка антител по типу первичного и вторичного иммунного ответа. Образование клеток иммунологической памяти.
- •13. Современные теории, объясняющие происхождение и специфичность антител. Клонально-селективная теория и ее основные предпосылки. Особенности генетического контроля биосинтеза антител.
- •14. Центральные и периферические органы иммунитета. Основные формы иммунного ответа. Роль антител в формировании иммунитета. Полные и неполные антитела методы их обнаружения.
- •16. Происхождение и пути дифференцировки клеток-эффекторов иммунной системы. Лимфокины, их роль в иммунитете.
- •17. Определение понятия иммунитет. Феномен бласттрансформации как пример распознавания генетически отличающихся клеток лимфоцитами и превращения их клетки-эффекторы.
- •18. Система в-лимфоцитов, их происхождение, основные свойства, природа специфических рецепторов. Превращение в-лимфоцитов в антителообразующие клетки.
- •20. Роль макрофагов в иммунитете.
- •21. Роль фагоцитоза в защитных реакциях организма. Механизм и фазы фагоцитарного процесса. Завершенный и незавершенный фагоцитоз. Мононуклеарная фагоцитарная система. Опсонины.
- •25. Инфекционная аллергия. Аллергическая проба в диагностике инфекционных болезней. Отличие реакций гиперчувствительности замедленного типа от реакций гиперчувствительности немедленного типа.
- •27. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней. Серологические реакции. Коагглютинация. Радиоиммунный метод (рим). Иммуноферментный метод (ифм).
- •28 Иммунофлуоресцентный метод (прямой и непрямой) диагностики инфекционных болезней. Сущность метода, его преимущества и недостатки.
- •29. Реакция пассивной гемагглютинации, механизм протекания и ее практическое применение.
- •32. Литические свойства иммунных сывороток. Роль комплемента, механизм взаимодействия комплемента с комплексом антиген-антитело. Серологические реакции, протекающие с участием комплемента
- •1. Вирусы. Основные свойства вирусов, отличающие их от всех остальных живых организмов. Группы критериев, используемых для классификации вирусов.
- •2. Молекулярная структура вирусов. Вирион. Особенности упаковки нуклеокапсида. Особенности структуры генома вирусов. Основные этапы взаимодействия вируса с клеткой.
- •3. Вирусы, их природа, происхождение. Методы культивирования вирусов.
- •5. Бактериофаги. Вирулентные и умеренные фаги. Механизм взаимодействия вирулентного фага с микробной клеткой. Особенности морфогенеза крупных фагов.
- •8. Реакция гемагглютинации, ее механизм у вирусов гриппа. Реакция торможения гемагглютинации, ее практическое применение.
- •1. Стафилококки. Общая характеристика свойств. Факторы патогенности. Токсины, образуемые стафилококками, генетический контроль их синтеза. Современная классификация стафилококков и ее принципы.
- •2. Микробиологический диагноз стафилококковых заболеваний. Выделение стафилококков, определение их патогенности, чувствительности к антибиотикам и фаготипирование.
- •4. Этиология и патогенез скарлатины. Работы г. Н. Габричевского и и. Г.Савченко по изучению этиологии скарлатины. Микробиологическая диагностика стрептококковых заболеваний.
- •5. Менингококки. Характеристика морфологических, культуральных и биохимических свойств. Серогруппы. Патогенез менингококковых инфекций. Специфическая профилактика .
- •7. Микробиологический диагноз заболеваний, вызываемых менингококками.
- •8. Гонококки, характеристика морфологических, культуральных и биохимических свойств. Методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых гонококками.
- •2. Микрофлора воды. Роль воды в распространении возбудителей инфекционных болезней. Понятие о коли-титре и коли-индексе.
- •3. Семейство кишечных бактерий. Общая характеристика семейства, состав, принципы классификации. Использование тест-систем для ускоренной идентификации возбудителей кишечных инфекций.
- •6. Возбудители брюшного тифа и паратифом а и в. Характеристики их свойств, антигенное строение. Патогенез брюшного тифа.
- •7. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифом. Фаготипирование их возбудителей и его значение. Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.
- •8. Бактерионосительство при брюшном тифе и методы ого выявлении. Особенности антигенного строении возбудители брюшного тифа и его фаготипирование.
- •11. Возбудители дизентерии. Характеристика свойств. Факторы патогенности. Антигенное строение шигелл. Классификации дизентерийных бактерий.
- •12. Клебсиеллы и вызываемые ими заболевания. Лабораторная диагностика, профилактика.
- •15. Микробиологический диагноз холеры. Правила взятия материала для исследования. Выделение возбудителя и его идентификация, определение биовара. Основные принципы терапии холеры.
- •3. Коринебактерии дифтерии. Патогенез болезни. Лабораторная диагностика. Иммунитет. Специфическая профилактика и терапия. Проблема ликвидации дифтерии.
- •Возбудители коклюша и паракоклюша. Характеристика их свойств. Патогенез коклюша. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика.
- •5. Микробиологический диагноз коклюша и паракоклюша. Специфическая профилактика коклюша.
- •6. Микобактерии и их характеристика. Классификация микобактерий. Палочка туберкулеза, ее основные свойства, факторы патогенности. Бактериоскопическая диагностика туберкулеза.
- •7. Пути и способы заражения туберкулезом. Патогенез туберкулеза. Специфическая гранулема. Особенности иммунитета при туберкулезе. Организация борьбы с туберкулезом в России.
- •8. Методы микробиологической диагностики туберкулеза. Метод микрокультур.
- •10. Возбудитель лепры. Морфологические и культуральные особенности. Лабораторная диагностика. Аллергические пробы и их диагностическое значение. Химиотерапия лепры.
- •6. Парамиксовирусы. Парагриппозные вирусы.
- •7. Вирус кори, характеристика его свойств
- •8.Аденовирусы. Характеристика свойств.
- •1. Инактивированная формалином вакцина Дж. Солка.
- •2. Живая вакцина а. Себина из аттенуированных им штаммов полиовирусов I, II и III типов.
- •11.Пути и способы зараженя полиомиелитом.(poliovirus hominis)
- •1. Инактивированная формалином вакцина Дж. Солка.
- •2. Живая вакцина а. Себина из аттенуированных им штаммов полиовирусов I, II и III типов.
- •12.Вирусы Коксаки и эсно.
- •13. Гепатит а.
- •1. Адсорбция на клетке.
- •3. Внутриклеточное размножение.
- •I доза — сразу после рождения; II доза — через 1—2 мес; III доза — до конца 1-го года жизни.
- •15. Ретровирусы. Ретрови?русы (лат. Retroviridae) — семейство рнк-содержащих вирусов.
- •19.Вирусные гепатиты человека, особенности их эпидемиологии. Основные свойства возбудителей. Принципы лабораторной диагностики.
- •21. Возбудитель вич-инфекции.
- •23. Эпидемиология и патогенез вич-инфекции.
- •2. Микроскопический диагноз чумы.
- •3. Возбудитель сибирской язвы.
- •4. Микробиологический диагноз сибирской язвы
- •5. Возбудитель туляремии. Francisella tularensis. К этому же роду относится f. Novicida.
- •6. Методы микробиологической диагностики туляремии.
- •7. Возбудитель бруцеллеза. Характеристика его свойств. Виды и биовары бруцелл и методы их дифференциации.
- •8. Возбудитель бруцеллеза. Характеристика его свойств. Виды и биовары бруцелл. Резервуары бруцеллеза в природе.
- •9. Методы микробиологической диагностики бруцеллеза.
- •1. Неклостридиальная анаэробная микрофлора. Состав группы, роль в патологии человека.
- •2. Микрофлора почвы
- •3. Возбудители газовой анаэробной инфекции. Характеристика их свойств. Патогенез заболевания. Микробиологический диагноз. Специфическая профилактика и терапия.
- •4. Возбудитель столбняка, характеристика его свойств. Столбнячный токсин, его функции, механизм действия. Анатоксин. Специфическая профилактика и терапия столбняка
- •1. Проведение плановой активной иммунизации детей и взрослых против столбняка.
- •2. Экстренная иммунопрофилактика в связи с травмами.
- •1. Проведение плановой активной иммунизации детей и взрослых против столбняка.
- •2. Экстренная иммунопрофилактика в связи с травмами.
- •6. Возбудитель ботулизма, свойства, типы токсинов.
- •7. Ботулизм, патогенез, микробиологическая диагностика
- •2. Лептоспиры
- •3. Микробиологический диагноз лептоспирозов.
- •4. Особенности патогенеза и иммунитета при сифилисе.
- •5. Возбудители возвратных тифов
- •9. Токсоплазмоз. Единственной патогенной для человека токсоплазмой является Toxoplasma gondii
- •11. Патогенная амеба.
3. Вирусы, их природа, происхождение. Методы культивирования вирусов.
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.
Методы культивирования вирусов
Поскольку вирусы не растут на искусственных питательных средах, а размножаются только внутриклеточно, нужно было найти простые и общедоступные методы их культивирования. Крупным достижением было предложение Р. Гудпасчура в 1932 г. использовать для культивирования вирусов куриные эмбрионы, в клетках которых успешно размножаются многие вирусы. Однако окончательное решение проблемы их культивирования оказалось возможным лишь после того, как были разработаны основные способы культивирования клеток вне организма.
Хотя способность клеток расти вне организма была установлена еще в 1907 г., потребовалось много лет для разработки доступных методов культивирования клеток, а в них — вирусов. Вначале был использован метод переживающих тканей. Он заключался в том, что в колбу, содержащую питательную среду, вносили кусочек ткани. Клетки некоторых тканей в таких условиях могут переживать (но не размножаться) до 30 дней, а в них могут размножаться вирусы. Однако этот способ давал очень небольшой выход вирусов. Необходимо было разработать условия, при которых клетки ткани могли бы свободно размножаться. К началу второй половины XX в. эпидемии полиомиелита приняли настолько широкий и опасный характер, что требовалось принять немедленные меры для создания вакцины, которую можно было бы использовать для массового применения. Но для этого нужно было найти метод, позволяющий быстро выращивать вирусы в большом количестве. Это и явилось одним из обстоятельств, стимулировавших разработку методов культивирования вирусов. Для получения культур клеток, которые можно было бы использовать для выращивания вирусов, необходимо было решить четыре главных проблемы:
1) получить в необходимом количестве свободные (т. е. изолированные друг от друга) клетки;
2) создать такие питательные среды и условия, в которых клетки могли бы активно размножаться;
3) обеспечить условия, при которых в культурах клеток не могли бы размножаться бактерии;
4) определить методы, с помощью которых можно было бы распознавать рост вируса в культуре клеток и идентифицировать его.
Все эти проблемы были решены. Для выделения изолированных, но жизнеспособных клеток из разрушенных тканей использовали обработку их слабым раствором трипсина, разрушающего межклеточные мостики. Для культивирования клеток были предложены различные среды, содержащие все необходимые для размножения клеток питательные вещества (аминокислоты, основания, витамины и др.), минеральные соли, имеющие оптимальную рН и т. д. К питательным средам добавляли индикатор, по изменению цвета которого можно было судить о метаболизме клеток и их размножении. Было установлено, что в качестве основы, на которой клетки размножаются и образуют монослой, может быть использовано хорошо обработанное стекло пробирок и колб. Для подавления возможного роста бактерий вируссодержащий материал перед посевом его в культуры клеток обрабатывают антибиотиками. Решающее значение имели опыты, проведенные в 1949 г. Дж. Эндерсом, Т. Веллером и Ф. Роббинсом, которые показали, что вирус полиомиелита хорошо размножается в первично-трипсинизированных культурах клеток, полученных из почек обезьян.
Разработка способов получения культур клеток позволила широко внедрить в практическую медицину современные классические методы вирусологической диагностики инфекционных заболеваний, с одной стороны, и обеспечить накопление вирусов в количествах, достаточных для производства вакцин, с другой. Основной недостаток первично-трипсинизированных клеток заключается в том, что после нескольких пересевов они перестают размножаться. Поэтому предпочтением стали пользоваться культуры таких клеток, которые способны размножаться in vitro бесконечно долго. Такие перевиваемые культуры клеток получают из опухолевых тканей (НеLа, НЕр-2 и др.) или из мутантных клеток с полиплоидным набором хромосом. Однако опухолевые клетки нельзя применять для получения вакцин. Для этих целей используют только культуры таких клеток, которые не содержат никаких кон- таминантных вирусов и не обладают злокачественностью. Лучше всего этим требованиям отвечают культуры диплоидных клеток. «Штаммом диплоидных клеток называется морфологигески однородная культура клеток, стабилизированная в процессе культивирования in vitro, имеющая огранигенный срок жизни, характеризующаяся тремя фазами роста (стабилизации, активного роста и старения), сохраняющая в процессе пассирования кариотип, свойственный исходной ткани, свободная от контаминантов и не обладающая онкогенной активностью при трансплантации хомячкам» (решение Симпозиума по диплоидным клеткам, Москва, 1971).
Как оказалось, вирусы могут размножаться не только в культурах клеток, образующих монослой на стекле пробирок, но и в суспензиях живых клеток.
Таким образом, для выделения чистых культур вирусов в настоящее время используют чаще всего заражение куриных эмбрионов, первично-трипсинизированных и перевиваемых культур клеток.
Широкое распространение получил предложенный в 1952 г. Р. Дюльбекко метод бляшек (негативных колоний), позволяющий производить количественное определение вирусов. Для выделения вирусов монослой клеток после удаления питательной среды заражают вируссодержащим материалом и покрывают слоем агара, содержащего индикатор нейтральный красный. Чашки (флаконы) инкубируют при температуре 37 °С. Через 48—96 ч выявляются пятна-бляшки. Они имеют диаметр 1—3 мм и выглядят неокрашенными на розовом фоне. Пятна возникают за счет цитопатического действия вируса. Этот метод позволяет непосредственно обнаруживать рост вирусов.
Различают два механизма гибели клеток, вызываемой вирусами, — некроз и апоптоз. Некроз происходит из-за необратимых нарушений целостности клеточных мембран, апоптоз — вследствие фрагментации ядерной ДНК под действием клеточной эндонуклеазы. Установлено, что апоптоз играет важную роль в патогенезе инфекций, вызываемых рядом РНК-содержащих вирусов (ретровирусов, миксовирусов, альфавирусов, буньявирусов, пикорнавирусов, флавивирусов).
Цитопатическое действие вирусов может проявляться в виде следующих изменений:
1) Равномерная мелкозернистая деструкция клеток (полиовирусы, вирусы Коксаки и др.).
2) Очаговая мелкозернистая дегенерация клеток (вирус гриппа, клещевого энцефалита и др.).
3) Гроздевидная дегенерация клеток (аденовирусы).
4) Крупнозернистая равномерная деструкция клеток (вирус герпеса).
5) Симпластообразование (респираторно-синцитиальный вирус, вирус кори и другие).
О росте вирусов в клетках можно судить также по поведению индикатора, добавляемого к питательной среде. Если клетки активно осуществляют метаболизм, рН среды сдвигается в кислую сторону, и среда окрашивается в желтый цвет. В случае размножения вируса клетки погибают, рН среды мало меняется, и она сохраняет первоначальный (малиновый) цвет или (при нейтральной рН) приобретает оранжевый. Некоторые вирусы, в частности вирус гриппа, обладают особыми рецепторами (гемагглютининами), с помощью которых они адсорбируются на эритроцитах и вызывают их склеивание (гемагглютинацию). Такие вирусы легко обнаруживаются с помощью реакции гемагглютинации или гемадсорбции (эритроциты адсорбируются на инфицированных вирусами клетках культуры тканей, см. цв. вкл., рис. 79,1). Кроме того, для обнаружения вируса в культурах клеток могут быть использованы различные серологические реакции: преципитации в агаре, иммунофлуоресценции, РСК, ИФМ и пр., а также метод ДНК-зонда и заражение животных, чувствительных к данному вирусу.
4. Строение бактериофагов. Взаимодействие Т-фагов с микробной клеткой (адсорбция, проникновение фаговой ДНК в клетку, размножение фага и выход его из клетки). Лизогения и лизогенная конверсия, механизм. Практическое использование фагов в медицине.
Бактериофаги— вирусы бактерий. Бактериофагия — процесс взаимодействия фагов с бактериями, заканчивающийся очень часто их разрушением.
Поскольку естественной средой обитания любого фага является микробная клетка, жизнь фагов связана с бактериями. Фагам присущи все биологические особенности, которые свойственны вирусам. Их геном представлен либо ДНК, либо РНК и заключен в белковую оболочку (капсид), структурные субъединицы которой уложены по типу либо спиральной, либо кубической симметрии. Крупные фаги, имеющие хвостик, устроены по типу бинарной симметрии (головка — икосаэдр, хвостик — спиральная симметрия). Фаги различаются по форме — нитевидные, сферические; фаги, имеющие головку и хвостик; по размерам — мелкие, среднего размера и крупные. Чем крупнее фаги, тем больше у них генов и сложнее их жизненный цикл.
Лизогения и лизогенная конверсия, механизм.
Жизненный цикл фага может проявляться в форме продуктивной (фаг размножается в клетке и выходит из нее), редуктивной (геном фага проникает в клетку, однако размножения фага не происходит, его геном интегрируется в хромосому клетки-хозяина, становится ее составной частью, т. е. фаг превращается в профаг, а клетка становится лизогенной) и абортивной инфекции, при которой взаимодействие фага с клеткой обрывается на какой-то стадии жизненного цикла фага, и он погибает.
Клетка, несущая профаг, называется лизогенной, потому что профаг, передающийся клеткой по наследству, может выйти из хромосомы, активироваться и вызвать продуктивную форму инфекции.
Если в результате лизогении, т. е. внедрения профага в хромосому клетки-хозяина, она получает новые наследуемые признаки, такую форму ее изменчивости называют лизогенной конверсией, т. е. изменчивостью, обусловленной лизогенией. Ли- зогенную конверсию вызывают только умеренные фаги.
Взаимодействие Т-фагов с микробной клеткой:
1)Адсорбция фагов на клеточной поверхности бактерий при помощи специфических рецепторов (белков-лоцманов), которые располагаются на кончике нити, шипа или хвостика. В свою очередь, на клеточной стенке бактерии располагаются ее фагоспецифические рецепторы, распознаваемые фагом.
2)Проникновение фагового генома через клеточную стенку и цитоплазматиче- скую мембрану внутрь клетки и освобождение его от оболочки (раздевание фага).
3)Установление фагового генома с помощью белка-лоцмана для реализации содержащейся в геноме информации:
4)Репликация фаговой геномной ДНК или РНК.
5)Сборка вновь синтезированных вирионов — заключение геномной НК в белковую оболочку, морфогенез фагов.
6) Выход вновь синтезированных фагов из клетки:
а) путем отпочковывания;
б) путем лизиса клетки изнутри. Он осуществляется свободным лизоцимом и вызывает гибель клетки.
Практическое применение фагов. Благодаря своему разрушающему (литическому) действию на бактерии фаги могут быть использованы с лечебно-профилактической целью при различных заболеваниях (дизентерия, холера, различные гнойно-воспалительные заболевания и т. д.). Наборы стандартных фагов, в том числе международные, используются для фаготипирования возбудителей ряда болезней (холеры, брюшного тифа, сальмонел- лезов, дифтерии, стафилококковых и других заболеваний). Фаги широко используют для изучения генетики микроорганизмов.