Люминесцентно-микроскопическое изучение микроорганизмов почвы на почвенных монолитах по звягинцеву

Использование люминесцентной микроскопии в падающем свете дает возможность изучать прижизненно окрашенные почвенные микроорганизмы непосредственно на поверхности почвенных монолитов, агрегатов, структурных отдельностей, корней и т. д. (Звягинцев, 1963). Во многих отношениях метод дает возможность наиболее близко подойти к рассмотрению микроорганизмов и их ассоциаций в естественных условиях.

Приготовляют формочку из нержавеющей стали, пластмассы или стекла. Формочка должна иметь острые края (рис. 5, а).Расчищают поверхность почвы и вдавливают в нее формочку. Формочку можно вдавливать и в любой горизонт почвы, используя для этого обычный почвенный разрез. Расчищают почву, находящуюся по бокам от формочки, и осторожно вынимают ее так, чтобы над краями формочки возвышался слой почвы. Затем острой бритвой срезают лишнюю почву. При этом верхняя граньмонолита должна оказаться на уровне краев формочки. На поверхность почвы помещают каплю раствора акридина оранжевого и накрывают ее очень тонким покровным стеклом. Через 10—20 мин формочку помещают на предметный столик люминесцентного микроскопа и рассматривают почву, применяя иммерсионный объектив. Так как свет подается через объектив, величина монолита принципиального значения не имеет — он может быть большим. Можно рассматривать монолит и без покровного стекла при малых увеличениях. Микроорганизмы на хорошо приготовленных препаратах видны и в этом случае. Часто полезно рассмотреть не срез, а естественный излом монолита или грань структурной отдельности, а также срезы через почвенные агрегаты.

При помощи описываемого метода удается рассмотреть и микрофлору ризосферы. Вынимают корень растения из почвы (толщина корня не имеет значения), окрашивают его акридином оранжевым и помещают на столик микроскопа. Удается хорошо видеть клетки, прикрепившиеся к поверхности корня, корневых волосков и частиц почвы, приставших к корню. При окрашивании акридином клетки корня обладают зеленым свечением, как и микроорганизмы, однако они имеют другой оттенок зеленого свечения и хорошо видны на фоне клеток корня и корневых волосков. Можно поместить монолит почвы с проходящими через него корнями в формочку (рис. 5), сделать срез, который пересекал бы корень, и рассматривать микрофлору ризосферы.

В лабораторных условиях микрофлору корней изучают следующим образом. Берут небольшой стеклянный цилиндр, дно которого делается съемным. Под него^: подстилают одно или несколько покровных стекол. В сосуд насыпают почву и высевают семена какого-либо растения (рис. 5, б). Корни стелются по стеклу. Дно снимают, под покровное стекло сбоку подают краситель, сосуд вверх дном помещают под микроскоп и изучают микрофлору.

Методы обнаружения грибов, находящихся в почвев активном состоянии

Методы, выделений грибов из почвенной взвеси на твердые питательные среды не дают представления о том, какие виды находились в почве в виде спор, а какие в виде мицелия, а метод прямого микроскопирования не позволяет дифференцировать эти организмы по видам. Для определения видов грибов, находящихся в почве в виде мицелия, существует несколько методов. Наиболее приемлемыми, дающими наилучшие результаты, являются методы Торнтона и Честерса.

МЕТОД ЭКРАНИЗИРОВАННЫХ СТЕКОЛ ТОРНТОНА

Приготовляют специальную камеру, сделанную из стекла и представляющую собой прямоугольник (рис. 6). Камера имеет размеры 10X4 см. Сверху камера покрывается прямоугольным стеклом-экраном, толщиной 1 мм, который имеет 10 отверстий диаметром 5 мм. Внутрь камеры на дно помещают стекло, которое плотно прилегает к стенкам камеры. В таком виде камеру стерилизуют. После стерилизации на стекло наливают 8 мл водного агара и отверстия закрывают стерильными покровными стеклами. Всю камеру помещают в почву либо в вертикальном, либо, в горизонтальном положении. Через 7—10 суток камеру извлекают из почвы, стекла с агаром, находящиеся внутри камеры, вынимают и просматривают под бинокуляром или лупой. Из обнаруженных колоний производят выделение грибов в чистую культуру.

Метод рассчитан на то, что через отверстия в стекле-экране проникнут только формы, находящиеся в почве в состоянии активного мицелия.