- •Транскрипция «через» нуклеосомы
- •Работающая РНК-полимераза раскручивает ДНК, создавая домен позитивной суперспирализации перед собой и домен негативной
- •Анализ пауз, возникающих при транскрипции через нуклеосому, показал, что все они приходятся на
- •Перенос кор-частицы за полимеразу (модель, подтвержденная Студицким в экспериментах с использованием РНК полимеразы
- •В результате транскрипции полимеразой Sp6 «через нуклеосому» октамер перемещается в область “upstream”. Перемещение
- •ли в модельном эксперименте для транскрипции «через нуклеосому» пользовать не РНК-полимеразу фага Т7,
- •Partial dissociation of H2A-H2B dimmer (dimmers) from nucleosomal core is a key event
- •При повышенной концентрации соли (1.2 M NaCl) разворачивание нуклеосомы происходит спонтанно и включает
- •Transcription through nucleosomes by Pol II
- •The key role in displacement of H2A-H2B (H2A.Z-H2B) plays transcription elongation factor FACT
- •НК можно снять с нуклеосомного ядра под действием физической силы. В присутств CT
- •Chromatin remodeling factor CHD1 recruits FACT to the regions reach in H3 trimethylated
- •Транскрипция через нуклеосомы, собранные на мишенях позиционирования. Обычно транскрибируются с одинаковой эффективностью в
- •Сильные контакты ядром в начале нуклеосомы не влияли
- •Для прохождения РНК полимеразы II через нуклеосому принципиальное значение играет образование так называемой
- •Спомощью ряда экспериментальных манипуляций можно собрать гексануклеосомы, в ядре которых отсутствует один из
- •При высокой плотности транскрипционных комплексов нуклеосомы удаляются с ДНК, о чем свидетельствует высокая
- •NET_seq протокол (native elongation transcript sequencing)
- •In vivo паузы совсем не там, где in vitro (особенно при прохождении Pol
- •РЕПЛИКАЦИЯ ДНК
- •Существуют две группы экспериментальных подходов для картирования позиций участков начала репликации ДНК
- •Как выделять
- •Genomic study of replication initiation chromosomes reveals the influence
- •PNAS,
- •При использовании для картирования ori препарата однонитевой ДНК, обработанной экзонуклеазой фага лямбда, обнаруживается
- •Многие участки начала репликации имеют одни и те же позиции в стволовых клетках
- •существует некая (далеко не абсолютная) корреляция между позициями участков начала репликации и доменами
- •С использованием препарата коротких цепей новосинтезированной ДНК, обработанных 5’-экзонуклеазой фага лямбда, в области
- •Ori часто колокализуются с регуляторными последовательностями
- •Колокализация ori с активно-транскрибирующимися районами не очевидна
- •У низших (дрожжи) и высших (человек) эукариот участки начала репликации располагаются в свободных
- •У мыши для ori, расположенных в CpG островках, характерно бимодальное распределение фрагментов новосинтезированной
- •Между двумя точками старта репликации находится GC-богатый участок, тогда как в точках старта
- •ori неравномерно распределены по длине хромосомы. Раннереплицирующиеся
- •на сколько места локализации белков, участвующих в инициации репликации, совпадают с работающими участками
- •У дрожжей (Schizosaccharomyces pombe ) позиции Orc1 и Mcm6, картированные с помощью СhIP
- •Можно ли подобрать некую комбинацию признаков, которая позволит
- •7,268 and 8,212 high-confidence replication origins in S2 and Bg3 cells 16%–20% of
- •G4 мотивы часто находятся рядом с ori на расстоянии 250-300 п.н. и являются
- •е особенности ori прослеживаются на уровне последовательнос
- •propeller twist
- •Эпигенетические маркеры в окрестностях работающих ori
- •редсказывающая программа, учитывающая нарушения в геометрии двойн пирали (twist, propeller twist, minor groove
- •Проивлечение к определенной позиции ORC2 и cdc6 достаточно для сборки активного участка начала
- •Эритроидные и неэритроидные
- •Для нормальной работы зоны инициации репликации локуса DHFR необходим активный промотор DHFR, а
- •можно заменить промотор на гетерологичный из клеток Дрозофилы при этом инициация репликаци происходит
- •В активной и неактивной копиях X хромосомы используются одни и те же участки
- •Что дают методы, ориентированные на анализ индивидуальных клеток
- •Основные выводы:
- •Рибосомные гены дрожжей. Включение BUdR в начале S фазы. Рибосомные повторы выявляются с
- •Разные ori используются в двух последующих циклах репликации ДНК у дрожжей пульс в
- •Репликационные вилки, двигающиеся от активного ori супрессируют другие ori, находящиеся в пределах зоны
- •Есть единичные (обычно длинные) репликоны и кластеры работающих репликонов
- •личие «спящих» ori позволяет закончить репликацию в срок даже при никновении различного рода
- •В соматических клетках выбор тех ori, которые будут работать в S фазе, происходит
- •Время репликации (Timing)
- •Анализ числа аллелей, присутствующих в ядра реплицирующихся клеток позволяет определять время репликации (соотношение
- •Replication timing profiles of two example chromosomes at a 1 Mb resolution. (A)
- •Хромосомы построены из раннереплицирующихся и позднереплицирующихся областей
- •Домены тайминга репликации совпадают с ТАДами и ЛАД-ами
- •Существует определенная корреляция между активностью гена и временем его репликации. Активные и потенциально
- •HS4 не важен для установления домена ранней репликации, но важен для установления домена
Транскрипция «через» нуклеосомы
Работающая РНК-полимераза раскручивает ДНК, создавая домен позитивной суперспирализации перед собой и домен негативной суперспирализации позади себя.
Нуклеосома связывает негативные супервитки в силу чего с чисто энергетичесой точки зрения она будет стремиться переместиться в негативно суперспирализованный домен
Анализ пауз, возникающих при транскрипции через нуклеосому, показал, что все они приходятся на момент прохождения первой половины пути (до центра симметрии нуклеосомы, 20-60 пн от начала нуклеосомы). Далее транскрипция идет свободно. Это свидетельствует в пользу модели, постулирующей, что октамер переносится до того, как РНК полимераза переходит через ось симметрии. На границах нуклеосомы задержек не происходит
Перенос кор-частицы за полимеразу (модель, подтвержденная Студицким в экспериментах с использованием РНК полимеразы фага Т7, и эукариотической РНК полимеразы III)
небольшое перемещение нуклеосомы
промотер свободен
нуклеосома переместилась на промотор
В результате транскрипции полимеразой Sp6 «через нуклеосому» октамер перемещается в область “upstream”. Перемещение октамера на
присутствующую в растворе свободную ДНК не происходит. Таким образом, нуклеосома полностью не диссоциирует с транскрибируемого фрагмента ДНК
Сайт А, доступный для рестриктазы до транскрипции, перестает быть доступным после транскрипции
ли в модельном эксперименте для транскрипции «через нуклеосому» пользовать не РНК-полимеразу фага Т7, а эукариотическую РНК-полимера нуклеосома не удаляется и не перемещается
ли катушечный механизм прохождения РНК-полимеразы через нуклеосом ботает и в этом случае, то размеры петли должны быть пренебрежимо м
катушечная модель прямо увязывает расстояние, на которое смещается нуклеосом с размером петли