
- •Упаковка генома тесно увязана с функциональной компартментализацией клеточного ядра
- •Nuclear bodies
- •Ядрышко – единственный ядерный компартмент, который можно увидеть в световой микроскоп без специальной
- •Основной функцией ядрышек является синтез рибосомной РНК и сборка рибосом
- •Во время митоза ядрышко диспергируется. Компоненты грануллярного слоя остаются связанными с поверхностью конденсированных
- •Большинство ядерных компартментов можно увидеть только после окрашивания присутствующих в этих компартментах макромолекул
- •Nuclear bodies
- •Speckles, Interchromatin granule clusters (IGCs)
- •Promyelocytic leukemia bodies (PML)
- •В ядре эукариотической клетки репликоны организованы в кластеры После включения в новосинтезированную ДНК
- •Транскрибирующие РНК-полимеразы II организованы в группы
- •кластеры включения биотина можно видеть после удаления всей РНК, кроме той, которая находится
- •синий – фосфорилированная РНК полимераза зеленый – HBB (b-глобиновый ген)
- •Функции не изолированных мембранами ядерных компартментов
- •Функции не изолированных мембранами ядерных компартментов
- •Функции не изолированных мембранами ядерных компартментов
- •атформой для сборки ядерного компартмента может б лок или регуляторная РНК
- •Paraspeckles Расположены рядом с Sc35 спеклами. Структурной основой является некодирующая РНК. Одной из
- •Откуда берутся компартменты?
- •Сборка не ограниченных мембранами ядерных компартментов
- •Macromolecular crowding and depletion attraction force
- •isotonic
- •Взаимодействие различных участков генома с компартментами модулирует форму хромосомных территорий и поддерживает межхромосомные
- •Активные гены часто располагаются на границах SC35 компартментов. При этом разные гены, кодирующие
- •Компартменты являются достаточно вариабельными по составу и число их в индивидуальных клетках может
- •Использование флуоресцентных маркеров, входящих в состав полипептидной цепи, позволило изучать динамику распределения и
- •собственная флуоресценция Иммуноокрашивание
- •GFP_PCNA локализуется в местах синтеза ДНК – «репликационных фабриках»
- •Для изучения динамики передвижения и взаимодеействия молекул используются методы FRAP (Fluorescence Recovery After
- •Обмен белками между нуклеоплазмой и большинством типов компартментов происходит достаточно быстро
- •Экспрессия одного из маркеров околоядрышкового компартмента
- •димые в микроскоп компартменты представляют собой одукт динамического равновесия между связанными и связанными
- •Простое перемещение гена к тому или иному компартменту может способствовать активации, либо инактивации
- •В ядре есть активные и неактивные зоны. Простое перемещение гена (сегмента хромосмы) в
- •Распределение внутри ядра меченных предшественников, включенный в ДНК начале (синий цвет) и конце
- •Перемещение геномного домена из одного компартмента в другой может быть связано с изменением
- •Можно перетащить ген к ядерной оболочке. В этом случае он обычно инактивируется
- •Прицентромерные области также являются неактивным компартментом
- •Трехмерная организация генома, как и вообще организация живой клетки не является статичной.
- •После кратковременного включения флуоресцентной метки в ядра делящихся клеток можно пометить отдельные домены
- •Существует ли некая структурная платформа для ядер компартментализации?
- •Ядерный матрикс
- •Все известные типы «speckles» сохраняются после экстракции из ядер хроматина.
- •Многолетние исследования не предоставили убедительных доказатель существования ядерного матрикса в живой клетке
- •регация хромосомных территорий вытекает из свойств длинных полимеро тверждается результатами компьютерного моделирования
- •Единый хроматиновый домен и интерхроматиновый компартмент можно видеть после окраски хроматина в живых
- •Многие функциональные компартменты локализуются в интерхроматиновом домене
- •The model of T. Cremer
- •микроскопия сверхвысокого разрешения
- •Активные модификации
- •Репрессивные модификации – condensed large aggregates
- •активные модификации колокализуются с областями низкой плотности ДНК
- •активные модификации колокализуются с РНК полимеразой
- •активные и репрессивные модификации пространственно сегрегирован
- •ользованием микроскопии высокого разрешения можно видеть, что хромосомные итории неоднородны. Они состоят из
- •откуда берется ядерный матрикс?
- •Особенности позиционирования хромосомных территор и генов внутри хромосомных территорий
- •Разработка техники дифференциальной окраски хромосом и техники конфокальной микроскопии позволила анализировать взаимное пространственное
- •При оценке положения хромосмных территорий в ядре наиболее удобным параметром является расстояние между
- •Внутри хромосомных территорий позиции генов не являются случайными
- •Предпочтительные радиальные позиции индивидуальных хромосом могут различаться в клетках, дифференцированных по разным путям
- •цы хромосомных территорий являются достаточно условными. В ряде случ аются вне хромосомных территорий

В ядре есть активные и неактивные зоны. Простое перемещение гена (сегмента хромосмы) в неактивную зону мажет привести к репрессии транскрипции.

Распределение внутри ядра меченных предшественников, включенный в ДНК начале (синий цвет) и конце (красный цвет) S фазы

Перемещение геномного домена из одного компартмента в другой может быть связано с изменением его транскрипционного статуса и тайминга репликации Одним из неактивных компартментов является периферическая часть ядра
Ядра клеток CHO выделяли на разных стадиях G1 фазы и стимулировали к вхождению в S фазу посредством помещения в экстракт из яйцеклеток ксенопуса. В ядрах, изолированных через 1 час после митоза - глобиновый домен (неактивный в клетках CHO) и домен гена DHFR (активный в клетках CHO) не имели предпочтительной локализации в ядре и предпочтительного времени репликации. В ядрах, изолированных через 2-3 часа после митоза, - глобиновый домен локализовался на перефирии ядра и реплицировался в конце S фазы. Домен DHFR лакализовался внутри ядра и реплицировался в начале S фазы.

Можно перетащить ген к ядерной оболочке. В этом случае он обычно инактивируется
белок ламины, слитый с lac-репрессором, который экспрессируется под контролем индуцибельного промотора
ген lac оператор

Прицентромерные области также являются неактивным компартментом
В тимоцитах на |
центромер |
|
|
||
разных стадиях |
|
|
дифференцировки |
|
|
экспрессируются |
с |
|
разные |
||
ассоциация % |
поверхностные
антигены
экспрессия CD4 и CD8
|
|
|
|
экспрессия CD4 |
экспрессия CD8 |

Трехмерная организация генома, как и вообще организация живой клетки не является статичной.
Перемещаются как хромосомные территории в целом, так и отдельные домены внутри хромосомных территорий
mCherry-TetO GFP-LacO
TetO |
LacO |

После кратковременного включения флуоресцентной метки в ядра делящихся клеток можно пометить отдельные домены хромосом (те домены, которые реплицировались в момент введения метки). Последующее наблюдение за динамикой перемещения таких доменов в живых клетках позволяет утверждать, что перемещения доменов внутри хромосомных территорий являются хаотичными и весьма ограниченными
Существует ли некая структурная платформа для ядер компартментализации?

Ядерный матрикс

Все известные типы «speckles» сохраняются после экстракции из ядер хроматина.
Replication speckles (early pattern) on nuclei and nuclear matrix