Лабораторная диагностика хламидиозов

Поскольку хламидиозы распространены глобально, а их клинические проявления очень разнообраз­ны, особое значение в диагностике этих заболеваний имеют лабораторные методы. В зависимости от формы болезни материалом для исследования служат: соскобы с конъюнктивы, экссудат из бубонов, смывы из носоглотки, уретры, материал, взятый тампоном со слизистой оболочки дыхательных, мочеполовых путей, мокрота, кровь (во время лихорадки), а также секционный материал (кусочки печени, селезенки, легких и других тканей). Материал для исследования – СОСКОБЫ (но не мазки) с коньюктивы, стенок мочеиспускательного канала, шеечного канала и его отделяемого, содержимое бубонов, мокрота и др.

Бактериологическая диагностика состоит из предварительного микроскопического исследования материала, выделения возбудителя и его идентификации. Предварительное исследование заключается в бактериоскопии с целью обнаружения хламидий в инфицированных клетках либо с помощью прямой или непрямой иммунофлуоресценции, либо с использованием фазово-контрастной оптики, либо с приме­нением окраски по Романовскому-Гимзе. Для выделения возбудителя исследуемым материалом заража­ют культуры клеток (лучше всего L-929, McCoy, HeLa) или куриные эмбрионы. Для подавления роста бактерий исследуемый материал обрабатывают гентамицином, стрептомицином и канамицином. Зара­женные культуры клеток инкубируют при 35-36 °С в течение 6 дней, а затем микроскопируют с помощью фазового контраста, иммунофлуоресценции, ставят пробу на гликоген и определяют принад­лежность к роду Chlamydia с помощью РСК с групповым антигеном. РСК считается положительной в разведении 1 : 8. При заражении куриных эмбрионов исследуют желточные мешки эмбрионов, погибших в течение 4-10 дней. При отсутствии бактериального загрязнения микроскопируют препараты, окра­шенные по Романовскому-Гимзе, и определяют в суспензии из желточного мешка наличие группового антигена в РСК. Выделенную культуру идентифицируют по признакам, указанным в табл. 46. В случае выделения С. trachomatis производят определение серотипа. Для этой цели сыворотку морской свинки, от которой выделен данный штамм, испытывают с прототипными антигенами известных 15 серотипов с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции.

Для обнаружения хламидий применяют также биологический метод – исследуемым материалом заражают белых мышей и морских свинок, так как некоторые штаммы С. psittaci патогенны для мышей, но не для свинок, и наоборот, некоторые штаммы С. trachomatis (серотипы А, В и С) не размножаются в организме мышей, но патогенны для свинок.

Новорожденные мыши погибают при внутримозговом их заражении через 5-10 дней от геморраги­ческого менингита, при интраназальном – через 5-10 дней от пневмонии. У мышей и свинок при внутрибрюшинном заражении увеличиваются печень, селезенка, а в брюшной полости образуется фибринозный экссудат. При микроскопическом исследовании у животных, зараженных разными спо­собами, обнаруживаются микроколонии хламидий в мононуклеарных клетках ликвора (при внутримоз­говом), легких (при интраназальном), селезенке, печени и в перитонеальном экссудате (при внутри­брюшинном заражении). В связи с тем, что С. pneumoniae плохо размножаются в культурах клеток и в куриных эмбрионах, для их обнаружения и идентификации используют моноклональные антитела к видоспецифическому антигену в реакциях иммунофлуоресценции.

Для серологической диагностики пситтакоза (орнитоза) и венерического лимфогранулематоза применяют РСК и непрямую иммунофлуоресценцию. Комплементсвязывающие антитела появляются через 4-8 дней в небольшом количестве, затем титр их возрастает. Поэтому РСК лучше ставить с парными сыворотками. В связи с наличием у хламидий родового антигена специфичность и чувстви­тельность серологических реакций может быть повышена на основе использования моноклональных антител и выявленных с их помощью наиболее специфических для каждого вида (и серотипа) антигенов-диагностикумов.

Для диагностики хламидиозов могут быть использованы и внутрикожные аллергические пробы, но степень их специфичности зависит от степени специфичности аллергенов, так как могут быть перекрестные реакции за счет общих групповых антигенов.