125. Эритроциты: особенности строение, количество, функции эритроцитов. Методика подсчета эритроцитов.

Эритроциты - красные кровяные тельца. Имеют форму двояковогнутого диска.

Функции эритроцитов:

1. Дыхательная - транспорт кислорода и участие в транспорте углекислого газа.

2. Адсорбция и транспорт питательных веществ.

3. Адсорбция и транспорт токсинов.

4. Регуляция ионного состава плазмы крови.

5. Формирует реологические характеристики крови/вязкость и т.д./ Количество эритроцитов: у мужчин 4,5-5,0 млн. в 1 мм3, 4,5-5,0*1012/л; у женщин 4,0-4,5 млн. в 1 мм3,4,0-4,5*1012/л.

Эритроцитоз - увеличение содержания эритроцитов. Эритропения – снижение содержания эритроцитов, это состояние может еще обозначатся термином "анемия". Возможны истинные и ложные изменения количества эритроцитов. Истинные - изменения во всем организме. Ложные - изменения за счет изменения объема плазмы крови.

Размеры эритроцитов: 6-8 микрон - нормоцит; менее 6 микрон - микроцит; 8-10 микрон - макроцит; более 10 микрон - мегалоцит.

Для подсчета эритроцитов наберите кровь в соответствующий смеситель до метки 0.5. после этого наберите в смеситель 3% раствор хлористого натрия до метки 101. Концы заполненного меланжера зажмите 3 и 1 пальцами и встряхните его в течении 1 минуты. Затем выдуйте на ватный тампон 2-3 капли, а 4 нанесите на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

Подсчет эритроцитов производят в 5 больших квадратах, разделяемых на 16 маленьких. Подсчитайте все эритроциты внутри квадрата и на верхней и левой его сторонах. На основании произведенного подсчета вычислите количество эритроцитов в 1 мм² крови по формуле:

Х= , где

Х- количество эритроцитов;

а-количество эритроцитов, подсчитанные в 5 больших квадратах;

200-степень разведения крови.

126.Гемоглобин. Основные функции эритроцитов обусловлены наличием в их составе особого белка хромопротеида — гемоглобина. Молеку­лярная масса гемоглобина человека равна 68 800. Гемоглобин состоит из белковой (глобин) и железосодержащей (гем) частей. На 1 мо­лекулу глобина приходится 4 молекулы гема.В крови здорового человека содержание гемоглобина составляет 120—165 г/л (120—150 г/л для женщин и 130—160 г/л для мужчин). У беременных содержание гемоглобина может понижаться до 110 г/л, что не является патологией. Основное назначение гемоглобина — транспорт О2 и СО2. Кроме того, гемоглобин обладает буферными свойствами, а также способ­ностью связывать некоторые токсичные вещества. Гемоглобин человека и различных животных имеет разное стро­ение. Это касается белковой части — глобина, так как гем у всех представителей животного мира имеет одну и ту же структуру. Гем состоит из молекулы порфирина, в центре которой расположен ион Fe2+, способный присоединять О2. Структура белковой части гемо­глобина человека неоднородна, благодаря чему белковая часть раз­деляется на ряд фракций. Большая часть гемоглобина взрослого человека (95—98%) состоит из фракции А (от лат. adultus — взрослый); от 2 до 3% всего гемоглобина приходится на фракцию А2; наконец, в эритроцитах взрослого человека находится так на­зываемый фетальный гемоглобин (от лат. fetus — плод), или гемоглобин F, содержание которого в норме подвержено значительным колебаниям, хотя редко превышает 1—2%. Гемоглобины А и А2 обнаруживаются практически во всех эритроцитах, тогда как ге­моглобин F присутствует в них не всегда. Гемоглобин F содержится преимущественно у плода. К моменту рождения ребенка на его долю приходится 70—90%. Гемоглобин F имеет большее сродство к О2, чем гемоглобин А, что позволяет тканям плода не испытывать гипоксии, несмотря на относительно низкое напряжение О2 в его крови.  Гемоглобин обладает способностью образовывать соединения с О2, СО2 и СО. Гемоглобин, присоединивший О2, носит наименование оксигемоглобина (ННbО2); гемоглобин, отдавший О2, называется восстановленным, или редуцированным (ННb). В артериальной кро­ви преобладает содержание оксигемоглобина, от чего ее цвет при­обретает алую окраску. В венозной крови до 35% всего гемоглобина приходится на ННb. Кроме того, часть гемоглобина через аминную группу связывается с СО2, образуя карбогемоглобин (ННbСО2), благодаря чему переносится от 10 до 20% всего транспортируемого кровью СО2. 

Гемоглобин способен образовывать довольно прочную связь с СО. Это соединение называется карбоксигемоглобином (ННЬСО). Сродство гемоглобина к СО значительно выше, чем к О2, поэтому гемоглобин, присоединивший СО, неспособен связываться с О2. Од­нако при вдыхании чистого О2 резко возрастает скорость распада карбоксигемоглобина, чем пользуются на практике для лечения отравлений СО. 

Сильные окислители (ферроцианид, бертолетова соль, пероксид, или перекись, водорода и др.) изменяют заряд от Fe2+ до Fe3+, в результате чего возникает окисленный гемоглобин — прочное сое­динение гемоглобина с О2, носящее наименование метгемоглобина. При этом нарушается транспорт О2, что приводит к тяжелейшим последствиям для человека и даже смерти.

  Цветовой показатель

О содержании в эритроцитах гемоглобина судят по так назы­ваемому цветовому показателю,— относительной величине, характе­ризующей насыщение в среднем одного эритроцита гемоглобином. Fi — процентное соотношение гемоглобина и эритроцитов, при этом за 100% (или единиц) гемоглобина условно принимают величину, равную 166,7 г/л, а за 100% эритроцитов — 5*10 /л. Если у человека содержание гемоглобина и эритроцитов равно 100%, то цветовой показатель равен 1. В норме Fi колеблется в пределах 0,75—1,0 и очень редко может достигать 1,1. В этом случае эритроциты называются нормохромными. Если Fi менее 0,7, то такие эритроциты недонасыщены гемоглобином и называются гипохромными. При Fi более 1,1 эритроциты име­нуются гиперхромными. В этом случае» объем эритроцита значительно увеличивается, что позволяет ему содержать большую концентрацию гемоглобина. В результате создается ложное впе­чатление, будто эритроциты перенасыщены гемоглобином. Гипо- и гиперхромия встречаются лишь при анемиях. Определение цве­тового показателя важно для клинической практики, так как позволяет провести дифференциальный диагноз при анемиях раз­личной этиологии.

127.Лейкоциты (белые кровяные тельца) представляют собой образования различной формы и величины. По строению лейкоциты делятся на две группы: зернистые (гранулоциты) и незернистые (агранулоциты). К гранулоцитам относятся нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, к агранулоцитам — лимфоциты и моноциты. В норме количество лейкоцитов у взрослых людей колеблется от 4,5 до 9 тыс. в 1 мм3, или 4,5—9•10в 9степени/л. Увеличение числа лейкоцитов за пределы нормы называется лейкоцитозом, уменьшение — лейкопениеи. Физиологические лейкоцитозы. Лейкопении Различают следующие виды физиологических лейкоцитозов. Пищевой лейкоцитоз возникает после приема пищи. При этом число лейкоцитов увеличивается незначительно (в среднем на 1—3 тыс. в I мкл) и редко выходит за границу верхней физиологической нормы. При пищевом лейкоцитозе большое количество лейкоцитов скапливается в подслизистой основе тонкой кишки. Здесь они осуществляют защитную функцию (препятствуют попаданию чужеродных агентов в кровь и лимфу). Пищевой лейкоцитоз носит перераспределительный характер и обеспечивается поступлением лейкоцитов в циркуляцию из депо крови. Миогенный лейкоцитоз наблюдается после выполнения тяжелой мышечной работы. Число лейкоцитов при этом может возрастать в 3—5 раз. Огромное количество лейкоцитов при физической нагрузке скапливается в мышцах. Миогенный лейкоцитоз носит как перераспределительный, так и истинный характер, так как при нем отмечается усиление костномозгового кроветворения. Эмоциональный лейкоцитоз, как и лейкоиитоз при болевом раздражении, носит перераспределительный характер и редко достигает высоких цифр. Овуляторныи лейкоцитоз характеризуется незначительным повышением числа лейкоцитов при одновременном снижении количества эозинофилов. При беременности большое количество лейкоцитов скапливается в подслизистой основе матки. Этот лейкоцитоз в основном носит местный характер. Его физиологический смысл состоит не только в предупреждении попадания инфекции в организм роженицы, но и в стимулировании сократительной функции матки. Во время родов число лейкоцитов увеличивается за счет повышения количества нейтрофилов. Содержание белых кровяных телец уже в начале родового акта может достигать более 30 000 в 1 мкл. Послеродовый лейкоцитоз сохраняется на протяжении 3—5 дней и связан с поступлением лейкоцитов из депо крови и костномозгового резерва. Лейкопении встречаются только при патологических состояниях. Особенно тяжелая лейкопения может наблюдаться при поражении костного мозга — острых лейкозах и лучевой болезни. Лейкоцитарная формула В норме и патологии учитывается не только количество леикоцитов, но и их процентное соотношение, получившее наименование леикоцитарнои формулы, или лейко граммы. В крови здорового человека могут встречаться зрелые и юные лейкоцитов, однако в норме обнаружить их удается лишь у самой многочисленной группы - нейтрофилов. К ним относятся юные и палочкоядерные нейтоойилы. Увеличение количества юных и палочкоядерных неитрофилов свительствует об омоложении крови и носит название сдвига лейкоцитарной формулы влево; снижение количества этих клеток говорит о старени крови и называется сдвигом лейкоцитарной формулы вправо. Лейкоцитарная формула здорового человека Нейтрофилы: метамиелоциты 0-1%,палочкоядерные 1-4,сегментоядерные 50-65, Агранулоциты: базофилы 0-1, эозинофилы 1-4 лимфоциты 25-40 Характеристика отдельных видов лейкоцитов Нейтрофилы Нейтрофилы содержат богатейший набор биологически активных субстанций, в том числе способных убивать бактерии, вирусы и раковые клетки. Нейтрофилы подвижны, легко проникают в экстравазальное пространство ткани, высокоактивны. При стимуляции нейтрофилы быстро реализуют свой цитолитический материал по отношению к вирусинфииированным и опухолевым клеткам и могут запускать у них генетические программы апоптоза. Нейтрофилы осуществляют цитотоксический эффект (киллинг) в отношении отдельных чужеродных клеток. Обладая фагоцитарной функцией, нейтрофилы поглощают не только бактерии, но и продукты повреждения тканей. Базофилы. Функция базофилов и тучных клеток обусловлена наличием в них ряда биологически активных веществ. К ним в первую очередь принадлежит гистамин, расширяющий кровеносные сосуды. В базофилах содержатся противосвертываюш.ие вещества — гепарин, хондроитинсульфаты А и С, дерматансульфат и гепарансульфат.

Эозинофилы. Эозинофилы содержат большое число гранул, в которых находятся ферменты и многие биологически активные соединения. Основным компонентом гранул является главный щелочной белок, имеющий мол. массу около 1000 и играющий важную роль в защите от паразитбв. Эозинофилы обладают фагоцитарной активностью. Особенно интенсивно они фагоцитируют кокки. В тканях эозинофилы скапливаются преимущественно в тех органах, где содержится гистамин — в слизистой оболочке и подслизистой основе желудка и тонки кишки, в легких. Здесь их число превышает содержание в крови в 200—300 раз. Эозинофилы захватывают гистамин и разрушают его с помощью фермента гистаминазы. Велика роль эозинофилов, осуществляющих цитотоксический эффект, в борьбе с гельминтами, их яйцами и личинками. Содержание эозинофилов резко возрастает при аллергических заболеваниях, когда происходит дегрануляция базофилов и выделение анафилактнческого хемотаксического фактора, который привлекает эозинофилы. При этом эозинофилы выполняют роль «чистильщиков», фагоцитируя и инактивируя продукты, выделяемые базофилами. Моноциты и макрофаги выполняют многообразные функции: • являются активными фагоцитами, распознают Аг и переводят его в так называемую иммуногенную форму (выполняют функции антигенпрезентирующих клеток), • играют существенную роль в противоинфекционном и противораковом иимунитете; • участвуют в метаболизме липидов и железа; • синтезируют отдельные компоненты системы комплемента и факторы, принимающие участие в сосудисто-тромбоцитарном гемостазе, процессе свертывания крови и растворении кровяного сгустка. Лимфоциты, как и другие виды лейкоцитов, образуются в костном мозге, а затем поступают в циркуляцию. Здесь одна популяция лимфоцитов направляется в вилочковую железу, где в результате контакта со стромальными элементами и гуморальными факторами преимущественно полипептид ной природы превращаются в так называемые Т-лимфоциты. У челбвека окончательное формирование В-лимфоцитов происходит в костном мозге. Популяция Т-лимфоцитов гетерогенна и представлена следующими классами клеток: • Т-киллеры, осуществляющие лизис клеток-мишеней, к которым можно отнести возбудителей инфекционных болезней, грибы, микобактерии, опухолевые клетки; • Т-хелперы, или помощники иммунитета. Т-хелперы разделяются на 2 клона (Txl и Тх2). Txl являются регуляторами клеточного, а Тх2 — гуморального иммунитета. Предположение о том, что среди Т-лимфоцитов имеется популяция супрессоров, не нашло экспериментального подтверждения. Большинство В-лимфоцитов в ответ на действие чужеродных антигенов переходят в плазмоциты и продуцируют антитела или иммуноглобулины, т.е. являются антителопродуцентами. Однако среди В-лимфоцитов также различают В-киллеры и В-хелперы. Существует группа клеток, получивших наименование ни Т-, ни В-лимфоциты. К ним относятся так называемые 0-лимфоциты, являющиеся в основном предшественниками Т- и В-клеток и составляющие их резерв. К 0-лимфоцитам также относят клетки, носящие название натуральные (природные) киллеры, или НК-лимфоциты. Двойные клетки несут на своей поверхности маркеры и Т-, и В-лимфоцитов и способны заменять как те, так и другие.

Методика подсчета в камере

Принцип метода подсчета лейкоцитов аналогичен принципу подсчета эритроцитов, суть его состоит в точном отмеривании крови и разведении ее в определенном объеме жидкости с последующим подсчетом клеточных элемен­тов в счетной камере и пересчете полученного результата на 1 мл крови.

Оборудование и реактивы:

1. Смесители или пробирки для подсчета лейкоцитов.

2. 3 %-ный раствор уксусной кислоты, к которому прибавлено несколько капель метил-виолета или метиленовой синьки.

3. Счетная камера.

4. Микроскоп.

Смеситель для лейкоцитов отличается от смесителя для эритроцитов тем, что имеет более широкий просвет капилляра и меньший по величине резервуар. На смесителе нанесены 3 метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10 либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).

Ход исследования. При взятии крови для подсчета лейкоцитов предва­рительно удаляют ватным тампоном остатки крови с кожи и, слегка сдавливая палец, выпускают свежую каплю крови. При работе со смесителями кровь на­бирают до метки 0,5, затем разводят 3 %-ным раствором уксусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в течение 3 мин, после чего сливают 1-2 ка­пли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками для подсчета лей­коцитов наливают 0,4 мл 3 %-ного раствора уксусной кислоты и в нее выпус­кают 0,02 мл крови, отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Тщательно встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку и, набрав содер­жимое, заполняют счетную камеру. Так как лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов, то для большей точности подсчет производят в 100 больших (не­разграфленных) квадратах. Обычно в одном большом квадрате находится 1-2 лейкоцита. Число лейкоцитов в 1 мкл крови рассчитывается аналогично расче­ту числа эритроцитов по формуле:

X = (А х 4000 х В)/Б,

где X — количество лейкоцитов в 1 мкл крови; А — количество лейкоцитов, сосчитанных в 1600 малых квадратах; Б — количество сосчитанных малых квадратов (1600); 4000 — величина, умножая на которую мы получаем количе­ство клеток в 1 мкл.

128.Сосудисто – тромбоцитарный гемостаз. Тромбоциты.особенности строения , количество, функции. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз сводится к образованию тромбоцитарной пробки, или тромбоцитарного тромба. Условно его разделяют на три стадии: 1) временный (первичный) спазм сосудов; 2) образование тромбоцитарной пробки за счет адгезии (прикреп­ления к поврежденной поверхности) и агрегации (склеивания между собой) тромбоцитов; 3) ретракция (сокращение и уплотнение) тром­боцитарной пробки.

Сразу после травмы наблюдается первичный спазм кровеносных сосудов, благодаря чему кровотечение в первые секунды может не возникнуть или носит ограниченный характер. Первичный спазм сосудов обусловлен выбросом в кровь в ответ на болевое раздражение адреналина и норадреналина и длится не более 10—15 с. В даль­нейшем наступает вторичный спазм, обусловленный активацией тромбоцитов и отдачей в кровь сосудосуживающих агентов — серотонина, ТхА2, адреналина и др.

Повреждение сосудов сопровождается немедленной активацией тромбоцитов, что обусловлено появлением высоких концентраций АДФ (из разрушающихся эритроцитов и травмированных сосудов), а также с обнажением субэндотелия, коллагеновых и фибриллярных структур. В результате «раскрываются» вторичные рецепторы и создаются оптимальные условия для адгезии, агрегации и образо­вания тромбоцитарной пробки.

Адгезия обусловлена наличием в плазме и тромбоцитах особого белка — фактора Виллебранда (FW), имеющего три активных цен­тра, два из которых связываются с экспрессированными рецепторами тромбоцитов, а один — с рецепторами субэндотелия и коллагеновых волокон. Таким образом, тромбоцит с помощью FW оказывается «подвешенным» к травмированной поверхности сосуда.

Одновременно с адгезией наступает агрегация тромбоцитов, осу­ществляемая с помощью фибриногена — белка, содержащегося в плазме и тромбоцитах и образующего между ними связующие мо­стики, что и приводит к появлению тромбоцитарной пробки.

Важную роль в адгезии и агрегации играет комплекс белков и полипептидов, получивших наименование «интегрины». Последние служат связующими агентами между отдельными тромбоцитами (при склеивании друг с другом) и структурами поврежденного сосуда. Агрегация тромбоцитов может носить обратимый характер (вслед за агрегацией наступает дезагрегация, т. е. распад агрегатов), что зависит от недостаточной дозы агрегирующего (активирующего) агента.

Из тромбоцитов, подвергшихся адгезии и агрегации, усиленно секретируются гранулы и содержащиеся в них биологически актив­ные соединения — АДФ, адреналин, норадреналин, фактор Р4, ТхА2 и др. (этот процесс получил название реакции высвобождения), что приводит к вторичной, необратимой агрегации. Одновременно с высвобождением тромбоцитарных факторов происходит образовани­ем тромбина, резко усиливающего агрегацию и приводящего к по­явлению сети фибрина, в которой застревают отдельные эритроциты и лейкоциты.

Благодаря контрактильному белку тромбостенину тромбоциты подтягиваются друг к другу, тромбоцитарная пробка сокращается и уплотняется, т. е. наступает ее ретракция.

В норме остановка кровотечения из мелких сосудов занимает 2—4 мин.

Важную роль для сосудисто-тромбоцитарного гемостаза играют производные арахидоновой кислоты — простагландин I2 (PgI2), или простациклин, и ТхА2. При сохранении целости эндотелиального покрова действие Pgl преобладает над ТхА2, благодаря чему в сосудистом русле не наблюдается адгезии и агрегации тромбоцитов. При повреждении эндотелия в месте травмы синтез Pgl не проис­ходит, и тогда проявляется влияние ТхА2, приводящее к образованию тромбоцитарной пробки.

Функции тромбоцитов: кровяные пластинки препятствуют внезапной потере крови ,мгновенно закупоривая место повреждения кровеносных сосудов вначале временной, а затем постоянной тромбоцитарной пробкой. Установлена также антипаразитарная активность тромбоцитов. При инфицировании организма человека шистосомами , трематодами они оказывают на них цитотоксический эффект и поражают их.

Структура тромбоцитов:( 150-300х109/л.)

красные кровяные пластинки, не имеющие ядра, не делятся.У них выделяют несколько зон-периферическую, зона золя- геля, внутриклеточных органелл. На наружной поверхности периферической зоны располагается покров толщиной до 50 нм, содержащий плазматические факторы свертывания крови, энзимы, рецепторы ,необходимые для активации тромбоцитов, их адгезии(приклеиванию к субэндотелию) и агрегации(приклеиванию др к др.).

Периферическая зона . Мембрана содержит "мембранный фосфолипидный фактор 3"-"фосфолипидную матрицу", формирующую активные коагуляционные комплексы с плазменными факторами свертывания крови. Мембрана богата арахидоновой кислотой, из которой фосфолипаза А2 образует свободную арахидоновую кислоту для синтеза простагландинов. В липидный бислой мембраны тромбоцита "встроены" гликопротеины 1(субъединицы 1а,1b, 1c), 2( субъединицы 2a, 2b), 3(субъединицы 3a,3b), 4,5,6, которые обусловливают адгезивные и агрегационные функции тромбоцитов. Зона золя-геля гиалоплазмы прилегает к нижнему краю периферической зоны тромбоцита и отделяет зону внутриклеточных органелл.В этой зоне вдоль края клетки располагается сократительный аппарат тромбоцита-краевое кольцо микротрубочек, контактирующее с микрофиламентом. Зона плотных и альфа-гранул 1-го и 2-го типа .Плотные гранулы содержат АДФ, АТФ, кальций , серотонин , норадреналин и адреналин. Кальций участвует в регуляции адгезии, сокращения, секреции тромбоцитов, активации его фосфолипаз и продукции в мембране тромбоцитов простагландинов, необходимых для образования тромбоксана А2.Альфа -гранулы 1-го типа содержат и секретируют антигепариновый фактор тромбоцитов 4, тромбоцитарный ростовой фактор, тромбоспондин. Альфа -гранулы 2-го типа содержат лизосомальные энзимы(кислые гидролазы). После адгезии или агрегации большая часть гранул в тромбоците исчезает. Данный феномен получил название "реакции освобождения гранул". Он имеет место поле активации тромбоцитов тромбоксаном А2, АДФ, адреналином, тромбином, протеолитическими энзимами , бактериальными эндотоксинами, коллагеном.