Скрининг по активности
Протеазыбелка
. Молочный агар.
Ingredients Gms /
Litre
Skim milk powder 28.0
Casein hydrolysate 5.0
Yeast extract |
2.5 |
Agar |
15.0 |
Final pH ( at 25°C) 7.0±0.2
Скрининг по активности
белка
ДНКазный агар
Formula / Liter
Enzymatic Digest of
Casein .................. |
|
15 g |
Enzymatic Digest of Animal |
||
Tissue......... |
5 g |
|
Sodium |
|
5 g |
Chloride .................................... |
|
|
Deoxyribonucleic |
2 g |
|
Acid ........................... |
|
|
Test Procedure |
|
|
1. Inoculate plates
Agar.................................................
...... 15 g
2 Incubate plates at 35 ± 2°C for Final pH: 7.3 ± 0.2 at 25°C
18 – 24 hours and up to 48 hours.
3.Flood plates with 1 N HCl.
4.Observe for clearing around the spot or streak.
Скрининг по активности
зы. Агар со спиртовымбелкасиним (spirit blue a
триглице |
глицер |
жирн |
ые |
||
рид |
ин |
кисло |
Спиртовой синий – это |
Spirit blue |
ты |
|
||
индикатор изменяющий |
|
|
цвет со светло лилового |
|
|
на ярко синий в кислой |
|
|
|
среде |
|
+ СУБСТРАТ (ЛИПАЗНЫЙ РЕАГЕН |
|||
ВАЯ СРЕДА (1000 мл) |
||||||
|
Ingredients |
Gms / |
|
|
The lipase reagents recommended as |
|
|
Litre |
|
|
|
the lipid source are cotton seed meal, |
|
|
Casein enzymic hydrolysate |
|
|
cream, olive oil etc. A satisfactory |
|
|
|
10.00 |
5.00 |
|
|
emulsion can be prepared by dissolving |
|
|
Yeast extract |
|
|
1 ml polysorbate 80 in 400 ml warm |
|
|
|
Spirit blue |
0.15 |
|
|
distilled water, adding 100 ml cotton |
|
|
Agar |
17.00 |
|
|
seed or olive oil and agitating |
|
Скрининг по активности
Амилазы. Гидролизбелка крахмала.
КРАХМАЛ
амилопектин
амилоза
Негидролизованный крахмал взаимодействует с йодом (используют раствор Люголя: KI + I2 → KI3), формируя
окрашенный комплекс.
Если крахмал гидролизован, то формируются прозрачные зоны.
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ У ПРО- и ЭУКАРИОТ
Транскрипция и трансляция мРНК прокариот
Транскрипция, процессинг и трансляция мРНК 
эукариот
БИБЛИОТЕКИ кДНК
Обратная транскриптаза (reverse transcriptase) или ревертаза – фермент синтезирующий ДНК по РНК матрице, т.е. осуществляющий
РАЗМЕР ГЕНОМОВ, ЕМКОСТЬ ВЕКТОРОВ И
ПРЕДСТАВИТЕЛЬНОСТЬ БИБЛИОТЕК
Емкость типичного плазмидного вектора около 5000-
6000 пн.
Количество клонов в представительной генетический
библиотеке:
p – вероятность присутствия последовательно x – средний размер вставки
y – размер гаплоидного генома
То есть для создания представительной библиотеки
геном надоСЛЕДОВАперекрытьТЕЛЬНОне менее: 3 раз.
Геном |
Размер, тнп |
Клонов |
Чашек |
|
Фаг М13 |
7,5 |
тпн |
5 |
1 |
Фаг |
45 |
тпн |
27 |
1 |
E.coli |
4 000 |
тпн |
2400 |
3 |
Человек |
3 000 000 |
тпн |
1 800 000 |
2 000 |
ВЕКТОРЫ ДЛЯ КЛОНИРОВАНИЯ
КРУПНЫХ ФРАГМЕНТОВ ДНК В КЛЕТКАХ E.
Векторы наcoliоснове ДНК фага λ
головка
хвостовой
отросток
Фаговые частицы
Фаг λ (фаг лямбда) |
|
— умеренный |
|
бактериофаг, |
ДНК фага λ – 48,5 тпн |
который заражает |
Литический и лизогенный пути развития
фага λ
Литический циклЛизогенный цикл
Репликация ДНК фага λ
3’
5’
3’ 5’
праймер
3’
5’
Репликация по типу катящегося кольца
COS-сайт
---GGGGCGGCGACCTC---
---CCCCGCCGCTGGAG---