Демидюк
Илья
Валерьевич
(499) 196-1853 duk@img.ras.ru
ЛИТЕРАТУРА
Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия. // Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2006 (2 издание).
САЙТ-НАПРАВЛЕННЫЙ МУТАГЕНЕЗ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПЦР
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Использование не полностью комплементарных праймеров позволяет получить продукт с мутацией
TAG
CCAC AACGC AATGTСCCTGGTGCAATTGCGCTTGCA
мутация 
ПЦР
Мегапраймерная схема
|
R1 |
|
R2 |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
ПЦР1
|
R1 |
|
R2 |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
R1 ПЦР2 |
мегапраймер |
R2 |
Клонирование
ПЦР с достройкой перекрывания (overlap extension PCR)
R1 R2
ПЦР1
R1 R2
ПЦР2
|
|
Достройка |
||
|
|
перекрывания |
||
|
R1 |
|
|
R2 |
|
|
|||
ПЦР3Амплификация
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
R1 |
R2 |
Клонирование
Вопросы для
самоподготовки
• Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
• Принцип модификации ДНК с использованием ПЦР.
• Мегапраймерная схема сайт- направленного мутагенеза с помощью ПЦР.
• Схема сайт-направленного мутагенеза с использованием ПЦР с достройкой перекрывания.
СОЗДАНИЕ И СКРИНИНГ БИБЛИОТЕК ГЕНОВ
Библиотека генов, геномная библиотека – набор клонированных фрагментов ДНК, в совокупности составляющих индивидуальный геном