Лекции / ПромБТ_2020 4 Хроматография - аппаратура

Промышленная БИОТЕХНОЛОГИЯ

Лекция 4

Хроматография - аппаратура

Ерёмин Сергей Владимирович

+7(903)762-40-12, sirer@bk.ru

Элюенты для ВЭЖХ – общие требования

идеал – СЕЛЕКТИВНЫЕ, не вязкие, инертные,

стабильные, безопасные, не горючие... как вода!

Не должны портить анализ

o реагировать с аналитами – ацетон

o затруднять детектирование – бензол (UV)

Не должны портить «железо»

o реагировать с материалами прибора – Cl- и сталь SS316

oмеханически «убивать» оборудование – механические примеси недопустимы

o уменьшать время жизни колонки – не походящее pH

Портить вещество при препаративных разделениях

Элюенты для ВЭЖХ – общие требования

Выбор конкретных растворителей базируется на понимании принципов конкретного вида хроматографии, литературных данных и экспериментах.

Подготовка элюента включает в себя

1.Выбор источника растворителя (купить или?)

2.Дополнительная очистка (опционально)

3.Фильтрация – для водных растворов солей

4.Дегазация

Где взять растворитель?

Купить! (HPLC grade, Gradient grade...)

Купить и доочистить...

Получить в лаборатории – H2O

Где взять растворитель I

Только купить (HPLC grade, Gradient grade...) –

ацетонитрил

Основной метод очистки от УФ-поглощающих примесей – это низкотемпературная кристаллизация.

Температура плавления ацетонитрила -45ºС.

Где взять растворитель II

Купить и доочистить...

Можно почти все растворители, но требуется хорошая перегонная установка и, иногда, реагенты. Например – Al2O3 (фильтрация) LiAlH4 – перегонка эфиров.

Очистка ТГФ, эфира, диоксана требует осторожности – при перегонке возможен взрыв!

Где взять ВОДУ I

Купить правильную установку

Где взять ВОДУ II

Сделать самому...

1.Получить дистиллят (или би-)

2.Перегнать в стекле с KMnO4 + H2SO4(чуть)

3.Профильтровать через колонку C18...

(колонку предварительно промыть iPrOH, отбросить первые порции воды)

Фильтрация под вакуумом

Фильтрация под вакуумом

Рекомендуется применять исключительно для водных буферных растворов, приготовленных из твёрдых солей.

Для орг. растворителей смысла не имеет, поскольку их проще перегнать.

Для смесей растворителей с разной летучестью (особенно с водой) может изменить состав элюента.