Лабораторная работа №1 Тема: Приготовление жидкой питательной среды для микробов. Мясная вода, мясо-пептонный бульон, перевар по Хоттингеру.

Белковой основой всех сред является питательный бульон. В зависимости от состава среды остальные ингредиенты добавляются к питательному бульону.

Существуют два способа приготовления основного питательного бульона:

1. на мясной воде с добавлением готового пептона, который представляет собой смесь разнообразных частиц распада белка, не свернувшихся при нагревании (частицы альбумозы, пептоны, пептиды и незначительное количество аминокислот). Это так называемый мясо-пептонный бульон

2. на переварах, продуктах гидролиза исходного сырья при по­мощи ферментов (трипсина - бульон Хоттингера, пепсина - бульон Мартена) или кислот; среды этой группы богаче аминокислотами.

От азотистого состава мясо-пептонных сред и от степени расщепле­ния белка в мясных и прочих гидролизатах зависит содержание в среде общего и аминного азота. Отношение количества аминного азота к ко­личеству общего выражает степень расщепления общего азота. Обычно эта величина выражается в процентах. При изготовлении питательных сред необходимо определять количество общего и аминного азота как основных показателей качества.

Для хорошего роста большинства микробов необходимо содержание в 100 мл бульона не менее 250—300 мг общего азота при наличии в этом количестве аминоазота (аминокислот) в среднем в пределах 25—30%. Принимая во внимание, что для приготовления питательного бульона полуфабрикаты разводят в несколько раз, необходимо доводить гидро­лиз основного сырья (мяса, казеина и прочих субстратов) до максималь­ного накопления общего азота.

Полуфабрикаты и основные питательные среды из них

Мясная вода. Мясо, очищенное от жира и сухожилий, про­пускают через мясорубку и заливают двойным количеством холодной водопроводной воды, т. е. на 1 кг мяса берут 2 л воды. При желании уменьшить объем мясной воды (для хранения) можно мясо и воду взять и отношении 1:1. Такую концентрированную мясную воду в дальнейшем для приготовления бульона надо развести в 2 раза. Если мясо низкого качества, то последующего разведения не требуется. Мясную воду вместе с мясом ставят на огонь и кипятят в течение 1 часа. Накипь снимают шумовкой до начала кипения. Настаивание мясной воды с мясом про­должительное время до кипячения не рекомендуется во избежание размно­жения бактерий. Лишь в тех случаях, когда требуется сброженная мяс­ная вода, целесообразно настаивать мясную воду на мясе в течение 18—20 часов. Развивающиеся бактерии в той или другой степени сбра­живают содержащийся в мясе гликоген. По окончании кипения дают мясной воде немного отстояться, фильтруют ее через полотно или фильтровальную бумагу, доливают водопроводной водой до первоначального объема, разливают по бутылям и стерилизуют при давлении в 1 атм. (120 °) 30 минут. После стерилизации на стенках бутыли и на дне полу­чается осадок из свернувшихся белков. Поэтому перед приготовлением бульона мясную воду снова фильтруют. Мясная вода (мясной экстракт) содержит минеральные вещества, белки, углеводы, витамины.