2.2.Технология приготовления питательных сред для культивирования микроорганизмов.

В зависимости от вида культивируемого микроорганизма используют соответствующие питательные среды, которые, прежде всего, отличаются между собой по консистенции: плотные, жидкие и полужидкие. По используемому сырью среды также подразделяются на среды животного и растительного происхождения, а также комбинированные.

Питательные среды должны быть стерильными и, как отмечалось выше, создавать оптимальные условия для жизнедеятельности микроорганизма. Наиболее широко в микробиологическом синтезе используются питательные среды на основе мясо-пептонного бульона (МПБ), мясо-пептонного агара (МПА), мясо-пептонно-печеночного агара (МППА). Однако, в связи с высокой стоимостью мяса, достаточно распространены другие виды сырья животного, растительного происхождения, а также отходы микробиологической промышленности.

Перед употреблением, независимо от происхождения, все белковое сырье проходит стадию гидролиза. Рассмотрим процесс приготовления гидролизата на основе перевара Хоттингера. Мясо крупного рогатого скота средней упитанности, полученное от 2-3 летних животных, освобождают от жира, фасций, сухожилий и измельчают на мясорубке. В реакторе подогревают водопроводную воду до температуры 60-65С. Полученный фарш добавляют в воду в соотношении 1,0:1,5. При постоянно включенной мешалке в реактор добавляют двууглекислый натр, снижают температуру до 45С и добавляют протеолитический фермент – панкреатин. В качестве этого фермента на практике чаше всего используют поджелудочную железу, которую также в виде фарша добавляют в раствор в количестве 30-40% и оставляют для гидролиза на 5-6 суток. Для обеспечения сохранности раствора в него добавляют консервант – хлороформ 1-2%-ной концентрации. Во время гидролиза температура поддерживается в пределах 42С. Готовый гидролизат должен иметь следующие показатели:

- активная кислотность (рН) - 6.0-6.5;

- содержание аминного азота, мг% - 600-800;

- содержание пептона, % - 2-3.

При наличии данных показателей питательная среда на основе гидролизата Хоттингера обеспечивает достаточно высокое накопление биомассы бактерий.

В ряде случаев проводят химический гидролиз белков: кислотный (реже щелочной) и, как наиболее щадящий, аммиачный. Не исключается, в зависимости от назначения среды, использование комбинированного способа проведения гидролиза, когда одновременно применяются протеолитические ферменты и химические реагенты.

По такой же схеме ведется гидролиз других видов белоксодержащего сырья. Основное требование к применяемому способу: максимальное накопление свободных аминокислот и недопущение их разрушения.

При изготовлении производственных питательных сред необходимо тщательно соблюдать требования технологических инструкций и прописей, так как это является залогом достижения конечной цели в необходимых объемах и с высоким качеством.

В производстве биопрепаратов в качестве основы используется перевар Хоттингера с различными добавками, соотношение которых варьирует в зависимости от вида культивируемого микроорганизма.

Среда для культивирования листерий:

• перевар Хоттингера;

• бактопептон, % - 1;

• натрий хлористый,% - 0,3;

• Na₂HPO₄ ·12 H₂O, % - 0,5;

• KH₂PO₄,% - 0,3;

- гидролизат печени, % - 2;

- лимоннокислый натр, мг - 400;

- магний сернокислый, мг - 100;

- железо лимоннокислое, мг - 50.

Готовая среда должна иметь следующие показатели:

- активная кислотность, рН - 7,4-7,6;

- содержание аминного азота, мг% - 200-220;

- содержание пептона, % - 1-2;

- содержание триптофана, мг% - 80-100.

Среда для культивирования сальмонелл:

-перевар Хоттингера;

- бактопептон,% - 0,5;

- хлористый натр,% - 0,3;

- Nа₂HPO₄, % - 0,5.

Готовая среда должна иметь следующие показатели:

- активная кислотность, рН - 7,8-8,0;

- содержание аминного азота, мг% - 200-220;

- содержание пептона, % - 0,5;

- хлористого натра, % - 0,3.

Питательная среда для культивирования пастерелл:

• перевар Хоттингера;

• бактопептон, % - 0,5;

• желатин,% - 0,5;

• агар-агар, % - 0,1;

• KH2PO4, % - 0,1;

• Na₂HPO₄·12H₂O, % - 0,3;

• NaCl, % - 0,3.

Готовая среда должна иметь следующие показатели:

- активная кислотность, рН - 8,0;

- содержание аминного азота, мг% - 180-200;

- содержание пептона,% - 0,5.

Среда для культивирования коли-бактерий:

• перевар Хоттингера;

• пептон, % - 0,5;

• хлористый натр, % - 0,3;

• Na₂HPO₄·12 H₂O, % - 0,5.

Готовая среда должна иметь следующие показатели:

- активная кислотность, рН - 8,0;

- содержание аминного азота, мг% - 200;

- содержание пептона,% -0,5.

Среда для культивирования бифидо-бактерий (КД-5):

• дрожжевой автолизат;

• гидролизат казеина триптический, мл/л - 350;

• натр хлористый, % - 0,5;

• L-цистин, % - 0,01;

• агар микробиологический, % - 0,07-0,2.

Готовая среда должна иметь следующие показатели:

- активная кислотность, рН - 8,5.