Часть 1. Испытание качества пептона (по схеме Кашинцевской биофабрики)

Биуретовая реакция: При добавлении 5 капель крепкой азотной кислоты к 10 мл профильтрованного прозрачного 1 % раствора пептона не должна образовываться муть, нерастворимая при нагревании до 100 º. К 1 мл 5% раствора пептона добав­ляют 2 мл 25% раствора едкого натра, смешивают, добавля­ют 3 капли 5% раствора медного купороса и взбалтывают; раствор дает красно-фиолетовую окраску.

Результаты:

На хлориды: при добавлении к 10 мл 5% раствора пептона двух капель азотной кислоты и 1 мл раствора азотнокислого серебра до­пускается появление слабой опалесценции.

Результаты:

На тяжелые металлы: 10 мл 5% водного раствора пептона подкисляют 1 мл разбавленной соляной кислоты и прибавляют равный объем свежеприготовленной сероводородной воды; при этом не должно получаться желтого осадка или темного окрашивания жидкости.

Результаты:

На зольность: сжигают 2 г испытуемого пептона до полного озоления; остаток не должен превышать 0,1 г.

Результаты:

На содержание влаги: навеску пептона в 1 г высушивают при 100º до постоянного веса; после последнего взвешивания потеря в весе не должна превышать 0,07 г.

Результаты:

На свободный индол: к 10 мл 5% раствора испытуемого пептона прибавляют 2—3 мл амилового алкоголя, 1 мл азотнокислого калия в разведении 1: 100 и 1 мл химически чистой серной кислоты; не должно получиться розового окрашивания спиртового слоя.

Результаты:

На цистиновую группу: к 5 мл 5 % раствора пептона добавляют 5 мл 16% раствора едкого натра и 5 капель 10% раствора азотнокислого или уксуснокислого свинца и ставят пробирку на кипящую баню на 10 минут, причем происходит потемнение жидкости или выпадает черный осадок.

Результаты:

Определение азота белков по Топштейн (100): к 25 мл перевара или 2% раствора пептона в мерной кол­бе на 50 мл добавляют 10 мл раствора буфера с рН = 4,7 и на­гревают на кипящей водяной бане. Если при нагревании не наблюдается свертывания белков, то, отметив отсутствие по­следних, раствор разбавляют по охлаждении водой до метки, взбалтывают и берут 20 мл этого раствора (что соответствует 10 мл исходного раствора) для определения азота альбумоз. Если же при нагревании раствора выпал осадок белка, то, разбавив его по охлаждении водой до метки, фильтруют раствор через сухой фильтр в колбу, отбрасывая первую порцию фильтрата. 2 мл фильтрата (1 мл исходного раствора) сжигают по Кьельдалю и определяют содержание азота; вычтя из общего азота азот фильтрата, находят азот белков.

Результаты:

Часть 2. Качественное исследование питательных сред

Биуретовая реакция: При добавлении 5 капель крепкой азотной кислоты к 10 мл профильтрованного прозрачного 1 % раствора пептона не должна образовываться муть, нерастворимая при нагревании до 100 º. К 1 мл 5% раствора пептона добав­ляют 2 мл 25% раствора едкого натра, смешивают, добавля­ют 3 капли 5% раствора медного купороса и взбалтывают; раствор дает красно-фиолетовую окраску.

При полном гидролизе белка наблюдают розовое окрашивание (пептоны) при наличии нерасщепленного белка - фиолетовое окрашивание. Биуретовая реакция присуща целой молекуле белка и продук­там его гидролиза (альбумозы, пептоны).

Результаты:

Ксаптонротеиновая реакция. К 5 мл перевара или пита­тельной среды добавляют 0,5-1 мл азотной кислоты, при этом обычно образуется осадок, который снова растворяется при нагревании (кипятят 2 минуты); жидкость и осадок окра­шиваются в желтый цвет. После охлаждения добавляют не­много аммиака или едкого натра; цвет раствора вместо желтого становится оранжевым. Реакция основана на содержании в белке бензольного ядра и указывает на присутствие в среде триптофана, тирозина или фенилаланина.

Результаты:

Реакция на свободный триптофан. Разводят исследуемый перевар 1:5, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, разливают по 5 мл в пробирки и добавляют в каждую из них несколько ка­пель бромной воды; появление красного окрашивания свиде­тельствует о наличии триптофана.

Результаты: