Радиоиммунологический анализ (риа)

В качестве метки используются радиактивные изотопы (¹³¹I, ¹²⁵ I, или ³ H и ¹⁴ C).

В зависимости от техники постановки выделяют два способа РИА:

1) техника «жидкая фаза» (классический РИА).

Недостаток этой техники постановки – необходимость специального разделения свободного и связанного меченного антигенов (или антител).

2)техника «твёрдая фаза»

АГ или АТ известной специфичности связываются на сорбентах (твёрдой фазе) – стенках полистироловой лунке или пластиковой пробирки. На иммобилизованный АГ (АТ) последовательно сорбируются остальные компоненты ИК.

В зависимости от характера реакции различают следующие методы:

1) Конкурентный метод – метод, основанный на конкуренции антигенов (определяемого и меченного) за присоединение с адсорбированными на сорбенте антителами или антител (определяемого и меченного) за присоединение с адсорбированными на сорбенте антигенами.

Компоненты реакции:

а) определяемый АГ (исследуемый материал – кровь, мокрота и др.) или АТ (сыворотка крови);

б) идентичный к исследуемому АГ-у антиген или исследуемому АТ-у антитело, меченые радиоизотопом;

в) специфические АТ-ла или АГ-ны известной концентрации, связанные на сорбенте;

г) стандартный АГ или АТ (контрольный);

д) буферный раствор.

Сначала в реакцию вводят исследуемый АГ (или АТ). Происходит образование комплекса АГ-АТ на поверхности сорбента. Сорбент отмывают, затем вводят меченый АГ (или АТ). Чем больше содержание исследуемого АГ (или АТ), тем меньше меченного АГ (или АТ) связывается с АТ-м (АГ-м) на поверхности сорбента. Концентрацию меченного АГ (или АТ) определяют измерением радиоактивности реакции с помощью счетчиков. Величина радиоактивности реакции будет обратно пропорциональной количеству АГ (АТ) в исследуемой пробе.

2) Неконкурентный метод.

Компоненты реакции:

а) определяемый АГ;

б) специфические АТ-а известной концентрации, связанные на сорбенте;

в) идентичные к связанному антителу антитела, меченые радиоизотопом;

г) стандартный АГ;

д) буферный раствор.

К связанным АТ добавляют исследуемый АГ. В процессе инкубации на сорбенте образуются комплексы АГ-АТ. Сорбент отмывают от свободных компонентов и добавляют меченые АТ, которые связываются со свободными валентностями АГ-на в составе комплекса. Величина радиоактивности пропорциональна концентрации исследуемого АГ.

3) «Сэндвич-метод» (непрямой метод) – наиболее распространённый метод.

Компоненты:

а) исследуемая сыворотка (или исследуемый АГ);

б) АГ-ы, связанные на сорбенте (или АТ-ла, связанные на сорбенте при определении АГ).

в) диагностические АТ против иммуноглобулинов, меченные радиоизотопами;

г) контрольные сыворотки (или АГ-ы)

д) буферные растворы

Исследуемые АТ-а (или АГ-ы) реагируют с твёрдофазными АГ-ми (АТ-ми), после чего инкубат удаляется и в реакцию вводят меченые антиглобулиновые АТ, которые связываются со специфическими комплексами АГ- АТ на поверхности сорбента. Величина радиоактивности реакции прямо пропорциональна количеству исследуемого АТ (или АГ).

Достоинства РИА:

1. высокая специфичность и чувствительность

2. простота техники постановки

3. точность количественной оценки результатов.

4. легко поддаётся автоматизации

Недостаток: использование радиоактивных изотопов.