1.14. Методы изучения нормальной микрофлоры

Для изучения нормальной микрофлоры применяют два метода; бактериоскопический и бактериологический.

Бактериоскопический метод. Имеет большое самостоятельное значение для тех биотопов организма человека, в которых обитает большое количество различных видов микроорганизмов (полость рта. кишечник, вагина). Он позволяет получить общее представление о составе микрофлоры (преобладание грам/+ или грам/- бактерий той или иной формы - кокки, диплококки, стрептококки, палочки, бациллы, стрептобациллы, фузиформные бактерии, наличие грибов и т.д.), а также выявить те микроорганизмы, которые не удается культивировать на питательных средах. Бактериологический метод. Применяют для биотопов с широким спектром микроорганизмов (полость рта, кишечник, вагина), выполняют с учетом данных бактериоскопии.

Основные принципы бактериологического исследования:

а) использование качественной (видовой состав) и количественной

(количественное соотношение разных видов) оценки микрофлоры; 6) первичный посев материала без предварительного обогащения, так как

обогащение нарушает количественные соотношения видов; в) использование большого набора различных питательных сред, подбор

условий культивирования (аэробные, анаэробные, атмосфера СО₂ и т.д.). Методы взятия материала для исследования:

1. Получение естественных экскретов {слюна, моча и т.д.).

2. Метод реплик; а) отпечатки на поверхности агаровой среды, б) отпечатки марлево-агаровыми пластинами.

3. Метод смывов увлажненным тампоном.

4. Аспирационный метод (из межзубных пространств, гингивальных карманов, из верхних и средних отделов дыхательных путей, аспирация на фильтры).

5. Введение зондов в кишечник.

6. Метод аппликаций - снятие микроорганизмов с помощью бумажных или тканевых пластинок определенной площади.

2. Частная микробиология

2.1. Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций

Пневмококк (Streptococcus pneumoniae) - грамположительный ланцетовидный диплококк, имеет полисахаридную капсулу. Культивируется на средах с белком при рН 7,6 (5% кровяной агар), образует мелкие (средние) уплощенные колонии с а-гемолизом. Лучше растет при насыщении воздуха СО . По типу К-антигена имеет 84 варианта. Чувствителен к химическим и физическим факторам, в частности, к солям желчи (лизис), оптохину, NaCI. К факторам патогенности пневмококка относят капсулу, гиалуронидазу, нейраминидазу, экзопротеазу IgA, О-пневмолизин, лейкоцидин. Патогенен для белых мышей. Пневмококк вызывает острые и хронические заболевания дыхательного тракта (гайморит, бронхит, пневмония), менингит, сепсис, гнойно-воспалительные заболевания, ползучую язву роговицы. Материал для диагностического исследования берут в зависимости от формы пневмококковой инфекции: например, при пневмонии- мокроту, при сепсисе -кровь, при гнойном заболевании-гной, при отите - отделяемое из слухового прохода и т.д. Материал важно забрать до начала этиотропного лечения.

Для обнаружения антител исследуют сыворотку крови.

С целью лабораторной диагностики применяют следующие методы.

I. Экспресс-методы (обнаружение возбудителя в патологическом материале):

1. Микроскопическое исследование- мазок из патологического материала с окраской по Граму. Обнаружение грамположительных капсульных диплококков.

2. Определение антигена капсулы в реакции "Набухание капсулы" (по Нейфельду - феномен увеличения размеров капсулы в присутствии поливалентной противокапсульной сыворотки). Последняя наносится на мазок исследуемого материала; учет с помощью фазовоконтрастного микроскопа.

3. Обнаружение антигена в сыворотке или ликворе (РСК, латекс-агглютинация, встречный иммуноэлектрофорез). Экспресс-методы чаще являются ориентировочными, так как:

а) не всегда обнаружение пневмококка свидетельствует о его этиологической роли (часто носительство);

б) возбудитель не обнаруживается с началом этиотропного лечения.