2.10. Лабораторная диагностика газовой гангрены

Газовая гангрена - полиэтиологическая травматическая раневая инфекция, которая проявляется омертвением тканей и газообразованием в них, интенсивным отеком и выраженной токсемией.

Возбудители: грам/+ спороносные палочки рода Clostridium. Основные возбудители: CL.perfringens (серовар A), CL.novyi (серовар A), CL.septicum, CL.histolyticum, CL.sordelli. Ведущий возбудитель - CL.perfringens. Материал для исследования: раневое отделяемое, некротизированная ткань, кровь.

Микроскопический метод исследования: материал плотный измельчают, центрифугируют и из осадка готовят препараты с окраской по Граму и по Гинса-Бурри. Можно поставить пробу на подвижность (придавленная капля). Возбудители газовой гангрены подвижные (кроме Cl.perfringens), не имеют капсулы (кроме Cl.perfringens), спорообразования в животном организме не происходит.

Бактериологический метод исследования:

1-й этап: обработанный материал е нативном состоянии и после 10-20-минутного прогревания при 80°С засевают на питательные среды (Китт-Тароцци, обезжиренное молоко, Вильсон-Блера, агар Цейсслера). Жидкие среды регенерируют (кипятят) и заливают вазелиновым маслом. Чашки выращивают в анаэростате. Посевы просматривают ежедневно в течение 7 дней.

2-й этап - изучение роста на средах: наиболее характерны изменения сред при росте Cl.perfringens. Помутнение и образование пузырьков газа на среде Китт-Тароцци наступает через 6 часов, молоко свертывается через 2-3 часа. К этому же времени наступает почернение с разрывами среды Вильсон-Блера. Другие возбудители указанные среды изменяют позже и менее типично.

На среде Цейсслера (через 24-48 часов) Cl.perfringens образуют серые крупные дисковидные колонии с зоной гемолиза. На среде Вильсон-Блера - колонии черного цвета. Из отдельных колоний делают мазки по Граму и их отсевают на среду Китт-Тароцци (для накопления чистой культуры).

Можно выделять культуру и другими методами (метод Фортнера, Вейнберга, трубочки Вейона).

3-й этап - изучение выделенной культуры:

а) мазок по Граму;

б) мазок по Ожешко;

в) проба на подвижность;

г) определение ферментативных свойств (в том числе лецитиназной активности);

д) реакция нейтрализации на белых мышах для определения типа токсина; е) антибиотикограмма.

Биологический метод исследования: заражают подкожно морских свинок суспензией материала. Животные погибают при картине экспериментальной газовой гангрены (местный отек с газообразованием, расплавление подкожно-жировой клетчатки). Посевом органов можно выделить культуру.

Экспресс-метод диагностики проводится с использованием: а) данных микроскопии препаратов; б) реакции иммунофлюоресценции; в) учета роста на средах с посевом нативного материала через 3-6 часов (для определения Cl.perfringens); г) определения антигена в материале методом встречного иммуноэлектрофореза или иммуноферментным методом. Бактерии рода Clostridium (главным образом CL. perfringens типа А) могут вызывать клостридиальные гастроэнтериты и некротические энтериты. Микробиологический диагноз устанавливают изоляцией культуры клостридий из испражнений, рвотных масс, остатков пищевых продуктов по такой же схеме, что и при анаэробной газовой инфекции с учетом массивности содержания бактерий в материале. В фильтрате материала определяют (пробой нейтрализации) экзотоксин, при септической форме возбудитель выделяют из крови.