2.7. Лабораторная диагностика холеры

Обследованию подлежат не только больные, но обязательно все люди в очаге для выявления скрытых форм и бактерионосителей. Забор материала проводится в условиях, обеспечивающих полную безопасность персонала и внешней среды, обязательно медицинским работником. Материал от больного берется индивидуально, от подозреваемых лиц - можно объединять по несколько проб.

Материал для исследования: испражнения, кусочки кишечника от трупов, пищевые продукты, вода, объекты внешней среды. Пересылка материала осуществляется медицинским работником в течение не более 3,5 часов в

системе стекло-впитывающий материал-металл с приложением

сопроводительного письма, в котором указаны паспортные данные больного,

предполагаемый диагноз, время взятия материала, и пометкой

"бактериологическое загрязнение".

Используют два метода: главный - бактериологический, дополнительный -

серологический.

Бактериологическая диагностика: проводят в специальных лабораториях

с соблюдением строгого противоэпидемического режима.

Методы диагностики: классический и ускоренный.

Классическое исследование: проводят поэтапно, через каждые 6 часов.

1-й этап:

а) посев материала для обогащения на 1% пептонную воду;

б) микроскопия материала (окраска по Граму и фуксином);

в) посев материала на щелочной агар и среду TCBS (тиосульфатцитрат-

бромтимоловый синий, сахароза). Посевы помещают в термостат;

2-й этап (через 6 часов):

а) вырастает пленка на пептонной воде, делают пересев на вторую пептонную воду для дальнейшего обогащения;

б) пересев из первой пептонной воды на щелочной агар и среду TCBS;

3-й этап (через 12 часов):

а) исследование роста на второй пептонной воде (аналогично первой);

б) изучение чашек первичного посева: - описание колоний (желтые на TCBS, прозрачные голубоватые на щелочном агаре; - микроскопия; -определение подвижности; - постановка РА на стекле с 0-1, Инаба и Огава сыворотками; - просмотр колоний в стереоскопическом микроскопе (голубоватый цвет); - пересев на двухсахарную лактозо-сахарозную среду. На этом этапе может быть дан предварительный ответ;

4-й этап (через 18 часов) - изучение выросшей культуры:

а) учет изменения лактозо-сахарозной среды (разложение сахарозы в столбике без газа);

б) мазок по Граму;

в) идентификация по ряду признаков:

- для постановки окончательного диагноза и отличия выделенных вибрионов от нехоленых: РА с сывороткой 0-1 (в пробирках); посев на триаду Сахаров Хейберга: сахарозу (+), маннозу (+) и арабинозу (-); определение чувствительности к холерным фагам С4 и Эльтор-2.

- для определения серовара: РА с сыворотками Огава и Инаба (в пробирках).

- для определения биовара холерного вибриона: чувствительность к бактериофагам (классический вибрион - к фагу С4, Эльтор - к фагу Эльтор-2; рост на среде с полимиксином; агглютинация куриных эритроцитов; лизис бараньих эритроцитов.

Три последних теста положительны для вибриона Эль-Тор. Длительность исследования: 36-48 часов в зависимости от скорости обогащения.

Ускоренное исследование подразделяется на ускоренный метод индикации микроба, антигена и ускоренную идентификацию.

1. Ускоренная индикация - поиск микроба непосредственно в материале или после подращивания в пептонной воде следующими методами:

а) микроскопия (по Граму и фуксином и на подвижность);

б) прямая РИФ;

в) р. иммобилизации под действием сыворотки 0-1;

г) РА растущих культур (материал засевается в 2 пробирки с пептонной водой, в одну из них добавляют диагностическую сыворотку, отмечается рост и одновременно склеивание микробов в пробирке с сывороткой);

д) проба с бактериофагами.

2. Поиск антигена в материале серологическими методами:

а) ИФА;

б) РОПГА;

в) РТПГА.

3. Ускоренная идентификация осуществляется на 3-м этапе бактериологического исследования путем изучения свойств выросших колоний (мазок по Граму, р. агглютинации с сывороткой 0-1, посев в малые объемы трех углеводов по Хейбергу, проба с бактериофагом).

Серологическая диагностика: чаще носит ретроспективный характер, помогает в неясных случаях, для выявления переболевших и вибриононосителей. Используют РА, РПГА, а также определение вибриоцидных антител. Рекомендуют использовать парные сыворотки. Положительный ответ получают при наличии высокого титра (в РА-1:180-1:3200) или при нарастании его в парных сыворотках.