Литература

1. Промышленная микробиология / под. ред. Н.С. Егорова.  М.: Высшая школа, 1989. – 503 с.

2. Березовский, В.М. Химия витаминов / В.М. Березовский.  М.: Наука, 1973. – 489 с.

3. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильников, Г.И. Переверзева.  М.: Колос, 1993. – 321 с.

4. Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии / А.И. Нетрусов [и др.]. – М.: Академия, 2005. – 608 с.

5. Драк, А.И. Получение эргостерина без коагуляции дрожжевой массы / А.И. Драк, Г.И. Аксенович, В.В. Высоцкий, Я.С. Мелляр // Химико-фармацевтический журнал. – 1989.  № 6. – С. 4143.

6. Бабьева, И.П. Биология дрожжей / И.П. Бабьева, И.Ю. Чернов. – М.: Товарищество научных изданий КМК, 2004. – 221 с.

Практическая работа №6

Тема: Клонирование дрожжей (2 пассаж)

Теоретическое обоснование работы

В процессе роста дрожжи образуют множество первичных и вторичных метаболитов, имеющих практическую ценность. Основными продуктами являются эргостерин, этанол и СО₂, другие синтезируются как побочные соединения при катаболизме углеводов, обмене аминокислот и пр. Хотя эти соединения обычно накапливаются в культуральной среде в очень незначительных количествах и трудно идентифицируются, они могут иметь большое практическое значение, например, для пищевой промышленности, так как от их состава зависит качество пищевого продукта, получаемого с помощью дрожжей. Такие соединения называют органолептическими.

Обязательные побочные продукты метаболизма дрожжей  высшие спирты (сивушные масла). Механизм синтеза высших спиртов связан с образованием алифатических аминокислот (валин, лейцин, изолейцин). Он включает удаление с аминокислот и их предшественников ами­ногрупп (трансаминирование), образующаяся аминокислота декарбоксилируется и восстанавливается до спирта.

Чаще всего встречаются спирты: пропиловый, изоамиловый, бутиловый, изобутиловый. Летучие жирные кислоты, такие как уксусная, пропионовая, масляная, изомасляная, изовалериановая  обычные минорные продукты метаболизма дрожжей. Большое практическое значение имеют выделяемые дрожжами альдегиды и кетоны, особенно ацетоин и диацетил:

Исходным соединением для синтеза ацетоина и диацетила является пируват. При декарбоксилировании пирувата образуется ацетальдегид, который конденсируется с другой молекулой пирувата с образованием ацетомолочной кислоты. Декарбоксилирование ацетолактата дает ацетоин, обратимо окисляющийся до диацетила. С ацетолактата начинается также путь биосинтеза валина и пантотеновой кислоты, поэтому ацетоин и диацетил считают побочными продуктами синтеза этих соединений. Эти и другие соединения сильно влияют на вкус спиртных напитков  вина и пива.

Среди других побочных продуктов большое значение имеют также длинноцепочечные жирные кислоты, эфиры и меркаптаны.

Оценка прироста биомассы дрожжей

Культуральную жидкость разделяем на центрифуге (10 минут, 2000 об/мин) на жидкую часть и осадок биомассы дрожжей, который затем взвешиваем. По разнице начальной и конечной массы дрожжей 100%-ной влажности (если исходная влажность дрожжей отличалась от 100 %, предварительно сделать пересчет массы) определяем прирост биомассы дрожжей в процессе их аэробного культивирования (X).