Литература

1. Промышленная микробиология / под. ред. Н.С. Егорова.  М.: Высшая школа, 1989. – 503 с.

2. Березовский, В.М. Химия витаминов / В.М. Березовский.  М.: Наука, 1973. – 489 с.

3. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильников, Г.И. Переверзева.  М.: Колос, 1993. – 321 с.

4. Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии / А.И. Нетрусов [и др.]. – М.: Академия, 2005. – 608 с.

Практическая работа №5 Тема: Клонирование дрожжей (1 пассаж)

Теоретическое обоснование работы

Хотя дрожжи и не так разнообразны по своему метаболизму, как бактерии, различные виды дрожжей могут катаболизировать разные соединения углерода и азота и образовывать различные конечные продукты (рисунок 6).

Из соединений углерода дрожжи, как правило, лучше всего используют гексозы. Некоторые виды хорошо растут на средах с пентозами. Из полисахаридов чаще всего утилизируют инулин и крахмал. Известны дрожжи, растущие на средах с углеводородами и некоторыми спиртами, в том числе метанолом и этанолом, а также органическими кислотами и другими углеродными cyбстратами.

В качестве источника азота дрожжи используют обычно соли аммония, аминокислоты, небольшие пептиды, реже нитраты и нитриты. Некоторые виды нуждаются в одном или более витаминах (чаще в биотине и тиамине), другие способны все необходимые для роста витамины синтезировать сами.

Рисунок 1 – Общая схема метаболизма дрожжей

Большинство дрожжей растет в границах рН от 3,0 до 8,0, оптимальные значения рН от 3,5 до 6,5. Общий диапазон температур для роста дрожжей широкий: от 0 (даже минус 7 °С) до 4850 °С. Оптимальная температура для роста большинства видов 2830 °С, но некоторые расы дрожжей, например, используемые в пивоварении, имеют более низкий температурный оптимум. Известны облигатно психрофильные дрожжи, не растущие при температуре выше 1820 °С. Многие дрожжи  факультативные анаэробы. В условиях анаэробиоза они получают энергию в результате сбраживания углеводов, а в присутствии молекулярного кислорода  за счет аэробного дыхания.

Порядок выполнения лабораторной работы

Посев клеток на проверенную среду

1. Подготовка посевного материала дрожжей

2. Посев клеток на проверенную среду

В колбу помещаем дрожжи, закрываем герметично корковой пробкой, в центр которой с помощью иголки для шприца вставлена пластиковая трубочка, другой конец последней опускаем в стакан, куда через трубочку выходит образующийся СО₂. Заполненную установку ставим в термостат с температурой 37 С. Ежедневно колба взвешивается до тех пор, пока вес не перестанет меняться.

3. Определение экономического коэффициента по приросту биомассы дрожжей

Расчет экономического коэффициента по приросту биомассы дрожжей провести по формуле:

Y_X/S = X/S, (1)

где X – прирост биомассы дрожжей после культивирования, г;

S – убыль сахаров в культуральной жидкости в результате культивирования дрожжей, г.