- •Российский государственный аграрный университет – мсха имени к.А. Тимирязева (фгбоу во ргау - мсха имени к.А. Тимирязева)
- •Выпускная квалификационная работа
- •Аннотация
- •Содержание
- •Глава 1. Обзор литературы………………..………………….……………..9
- •Глава 2. Экспериментальная часть…………………….……………..24
- •Введение
- •Обзор литературы
- •Антимикробная активность фитонцидов пряностей
- •Происхождение, биологическое действие и фитохимический состав исследуемых пряно-ароматических растений
- •Куркума длинная (Curcuma longa l.)
- •Душица (Origanum vulgare l.)
- •Кмин тминовый (Cuminum Cuminum l.)
- •Перец красный (Capsicum annum l.)
- •Перец черный (Piper nigrum l.)
- •Перец душистый (Pimenta officinalis Lindl.)
- •Чабрец (Thymus serpyllum l.)
- •Тысячелистник обыкновенный (Achillea millefolium z)
- •Экспериментальная часть
- •Объекты и методы исследования
- •Объекты исследования
- •Методы исследования
- •Методика получения водно-спиртовых экстрактов пряно-ароматических растений и эфирных масел
- •Методы исследования антимикробной активности
- •Статистическая обработка экспериментальных данных
- •Результаты экспериментальной работы
- •Исследования противомикробной активности растительных экстрактов методом дззр (диаметр зоны задержки роста микроорганизмов)
- •Исследования противомикробной активности пряно-ароматических растительных экстрактов методом кое
- •Исследование противомикробной активности эфирных компонентов пряно-ароматических растений
- •Обобщение результатов и рекомендации
- •Охрана труда
- •Общие требования безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •Список использованных источников
Исследования противомикробной активности пряно-ароматических растительных экстрактов методом кое
Исследования противомикробной активности растительных экстрактов были продолжены методом КОЕ - определения колониеобразующих микробных клеток после воздействия экстрактов.
Результаты исследований активности экстрактов изучаемых растений против Staphylococcus aureus R. представлены на рис. 2.2.4.
В результате подсчетов выросших колоний стафилококка на питательной среде (метод КОЕ) обнаружено наибольшее подавление их роста экстрактами перца красного (Capsicum annum L) - полное отсутствие колоний (бактерицидное действие), а так же кмина тминового (Cuminum Cuminum L.), куркумы (Curcuma longa L.), тысячелистника обыкновенного (Achillea millefolium Z.). Таким образом, еще один метод подтверждает антибактериальное действие исследуемых пряно-ароматических растений.
На рисунке 2.2.4. наглядно демонстрируется степень активности экстрактов представленных растений в отношении Staphylococcus aureus R. Все растения подавляют рост колоний, проявляя либо бактериостатическую, либо бактерицидную активность.
Рисунок 2.2.4. Сравнительная активность пряно-ароматических растений в отношении Staphylococcus aureus R. в методе КОЕ.
Следующим этапом исследований явилось изучение возможности подавления роста микробных клеток Staphylococcus aureus R. разными концентрациями экстрактов растений в суспензиях, а так же влияния экстрактов этих растений, входящих в питательные среды. В таблице 2.2.5 представлены результаты отработки минимальных ингибирующих концентраций (МИК) растительных антимикробных веществ в отношении золотистого стафилококка.
Таблица 2.2.5
Влияние различных доз экстрактов растений на развитие Staphylococcus aureus R. (метод КОЕ-10,0 х 10⁸)
Объекты |
Разведения |
||||
|
Контроль без экст. |
1:1000 |
1:50 |
1:10 |
МПА+ экст. |
Тысячелистник обыкновенный (Achillea millefolium Z.) |
329,6±7,9 |
72,0±0,6 |
35,8±0,7 |
12,6±0,2 |
1,9±0,2 |
Тимьян (чабрец) (Thymus serpyllum L.) |
229,2±7,9 |
218±18,5 |
79,8±3,8 |
48,6±0, 9 |
4,7±0,2 |
Перец красный (Capsicum annum L) |
329,6±7,9 |
16,8±0,9 |
10,0±0,9 |
2,6±0,5 |
0,7±1,0 |
Перец черный (Piper nigrum L.) |
329,6±7,9 |
118,0±1 8,5 |
49,8±3,8 |
28,6±0,9 |
2,6±0,3
|
Перец душистый (Pimenta officinalis Lindl.) |
329,6±0,9 |
300,8± 0,3 |
201,0±15,7 |
107,0±8,7 |
45±0,9 |
Душица (Origanum vulgare L.) |
329,6±0,9 |
311± 0,08 |
257 ± 12 |
157 ± 0,4 |
29,8±0,9 |
Куркума (Curcuma longa L.) |
213,2±2,5 |
26,8±0 ,9 |
17±0,9 |
8,6±0,5 |
3,8±1,03 |
Кмин тминовый (зира, Cuminum Cuminum L.) |
158,4±1,3 |
50±0,6 |
15,8±0,5 |
3,6±0,2 |
1,7±0,2 |
Как видно из данных таблицы 2.2.5, в отношении экстрактов всех растений прослеживается зависимость воздействия на микробные клетки в зависимости от их дозы. Наибольший эффект наблюдается при введении экстракта в питательную среду МПА. Наибольший эффект ингибирования оказывают экстракты из растений перца красного (Capsicum annum L), куркумы (Curcuma longa L.), кмина тминового (зиры, Cuminum Cuminum L.), тысячелистника обыкновенного (Achillea millefolium Z.)
Установлено, что экстракты оказывают наибольшее влияние при их непосредственном присутствии в составе питательных сред для культивирования микроорганизмов. В этом случае можно говорить о влиянии экстрагируемых растительных компонентов на физиологический и биохимический статус микроорганизмов, а не только на поверхностные структуры микробных клеток.
Интересными оказались результаты экспериментов, посвященные изучению длительности воздействия препаратов на клетки или колониеобразующие единицы во времени. Наблюдалось ингибирующее действие антибиотиков и некоторых экстрактов из пряно-ароматических растений на рост Staphylococcus aureus R. в течение 4-6 суток после внесения их в среду. Ингибирование исследуемых микроорганизмов растительными компонентами продолжалось на протяжении всего времени наблюдения, тогда как по литературным данным длительность действия антибиотиков не превышает 3 суток /23, 28/.
дни
Рисунок 2.2.5. Динамика активности растительных экстрактов пряно-ароматических растений в отношении S. Aureus R.
Этот стабильно повторяющийся во многих экспериментах феномен свидетельствует об умеренном подавлении роста микроорганизмов, а также в длительной (пролонгированной) ингибирующей способности экстрактов пряно-ароматических растений.
Как видно из рисунка 2.2.5., на первые сутки эксперимента отмечена очень высокая ингибирующая активность экстрактов исследуемых растений. На 4 сутки эксперимента экстракты из представленных растений сохраняли высокую ингибирующую активность, что может быть объяснено их комплексным защитным действием за счет наличия в экстрактах компонентов, обладающих противомикробным действием.
