26. Инсулин. Видовая специфичность. Выбор лидерной последовательности аминокислот. Методы выделения и очистки полупродуктов.

В настоящее время используют следующие препараты инсулина:

говяжий,

свиной,

смешанный (говяже-свиной),

человеческий (полусинтетический и биосинтетический).

Инсулин, выделяемый из поджелудочной железы свиней, отличается от инсулина чаловека на 1 аминокислотный остаток. Инсулин КРС- на 3. Это означает,что при введении их человеку он получает белок иной видоспецифичности. Следовательно, существует определенный % случаев проявления аллергии. Также при парентеральном введением может наблюдаться болезненность.

Кроме того, предшественник инсулина при его биосинтезе в животной ткани- проинсулин, содержит еще одну полипептидную цепь- пептид С. Позднее эта цепь отделяется от завершенной формы гормона, однако при выделении инсулина из животных клеток от примеси проинсулина избавиться трудно. Как раз в пептиде С видовые различия аминокислотной последовательности гораздо более велики,т.е побочные эффекты инсулина животного происхождения в значительной степени обусловлены «чужим» пептидом.

1. Известен способ выделения и очистки инсулина животного происхождения, который заключается в том, что раствор инсулина, полученный в результате превращения свиного инсулина под действием карбоксипептидазы Y в инсулин человека, подвергают гель-хроматографии и лиофилизуют. Затем осуществляют анионообменную хроматографию при pH 7, 5, элюируют инсулин в градиенте концентрации соли, обессоливают и лиофилизуют и получают инсулин человека с чистотой 90 96% Способ не обеспечивает достаточно высокую чистоту целевого продукта. Кроме того, используемая в способе гель-хроматография имеет хорошее разрешение только при невысоких нагрузках на сорбент.

2. Известен способ выделения и очистки инсулина, согласно которому раствор инсулина, полученный в результате ферментативной обработки его генно-инженерного предшественника (проинсулина), подвергают хроматографии на колонке с ионообменником, а затем обращенно-фазовой (C-8 или C-18) ВЭЖХ с последующей гель-хроматографией. Способ позволяет получать инсулин высокой степени чистоты более 97,5%

26. Интерфероны. Классификация. Видоспецифичность интерферонов. Синтез различных классов интерферона человека. Производство рекомбинантных образцов интерферона.

К числу используемых в качестве ЛС видоспецифических белков относятся- интерфероны- факторы врожденного иммунитета, открытые в свое время как белки, вырабатываемы клетками, зараженными вирусами. Они индуцируют локальные и системные противовирусные реакции в других клетках и, соответственно, используются как противовирусные препараты. Потенциально, интерфероны представяют интерес и как противоопухолевые агенты.

Их принято делить на 3 группы- альфа, бетта,гамма.

До недавнего времени интерфероны из человеческих клеток были доступны лишь в малых количествах. Как мед препарат использовался лейкоцитарный интерферон- кровь из родильных домов. В настоящее время ген лейкоцитарного интерферона получен химическим синтезом. Затем был включен в плазмиды, которые были введены в клетки кишечной палочки и дрожжей. Ген интерферона из фибробластов человека был клонирован в клетках кишечной палочки. Ведется работа по созданию методами генной инженерии гибридных интерферонов с большей противораковой активностью, чем у природных. Это относится к получению гибридов между интерферонами альфа1 и альфа2.