Методы исследования свертывания крови (коагуляционного гемостаза)

Коагуляционный гемостаз условно можно разделить на три фазы:

I фаза – образование протромбиназы;

II фаза – образование тромбина из протромбина;

III фаза – образование фибрина из фибриногена;

IV фаза - посткоагуляционная (ретракция и фибринолиз).

Показатели фаз:

I фаза – общее время свертывания крови по Ли-Уайту, время рекальцификации стабилизированной плазмы;

II фаза – протромбиновое время, протромбиновый индекс;

III фаза – количество фибриногена.

Определение времени свертывания крови по Ли-Уайту

Принцип. Определяют время свертывания цельной нестабилизированной венозной крови при 37С.

Реактивы. Не требуются.

Оборудование. Водяная баня. Секундомер.

Ход определения. Сухой иглой с широким просветом (без шприца) пунктируют вену. Выпустив первые капли крови на ватный тампон, набирают в пробирку 2 мл крови, с началом забора включают секундомер. Ставят пробирку в водяную баню. Через 2 минуты, а затем каждые 30 секунд пробирку наклоняют на 45 - 60 градусов. Отмечают время образования сгустка крови, выключают секундомер.

Нормальные величины – 5-10 минут. Удлинение времени свертывания крови до 15 минут и более наблюдается при недостаточности факторов, участвующих в процессе образования протромбиназы, дефиците протромбина и фибриногена, а также при наличии в крови ингибиторов свертывания, в частности гепарина.

Время рекальцификации стабилизированной плазмы

Принцип. Определяют время свертывания тромбоцитарной плазмы при добавлении к ней оптимального количества хлорида кальция.

Реактивы. 3,8% раствор цитрата натрия, 0,025 моль/л (0,277%) раствор хлорида кальция.

Оборудование. Водяная баня. Секундомеры.

Ход определения. В пробирку, установленную в водяной бане, наливают 0,2 мл раствора хлорида кальция и 0,1 мл 0,85% раствора хлорида натрия. Через 1 минуту в пробирку вводят 0, 1 мл плазмы, включают секундомер и отмечают время образования сгустка.

Нормальные величины – 60-120 сек. Укорочение указывает на гиперкоагуляцию, удлинение времени говорит о гипокоагуляции.

Определение протромбинового времени, индекса

Это вариант определения времени рекальцификации плазмы с добавлением тканевого тромбопластина. Результаты теста зависят от активности факторов VII и Х, включающихся в процесс свертывания крови на этапе тромбино- и фибринообразования.

Принцип. Определяют время свертывания плазмы при добавлении тромбопластина и хлорида кальция.

Реактивы. 3,8% раствор цитрата натрия, 0,025 моль/л раствор хлорида кальция, 1% суспензия тромбопластина.

Оборудование. Водяная баня. Секундомер.

Ход определения. В пробирку, стоящую на водяной бане, добавляют 0,1 мл плазмы, 0,1 мл тромбопластина и 0,1 мл раствора хлорида кальция 0,025 моль/л. Немедленно включают секундомер. Время образования сгустка соответствует протромбиновому времени исследуемой плазмы. Протромбиновый индекс рассчитывается по формуле:

ПИ_пл =А • 100 ,

В

где А – протромбиновое время плазмы здорового человека,

В - протромбиновое время исследуемой плазмы.

Нормальные величины

Протромбиновое время здорового человека – 12-20 сек.

Протромбиновый индекс – 95-105%.