Лейкоциты

Лейкоциты – высокоспециализированные белые клетки крови, отличающиеся характерной структурой, сложным внутриклеточным метаболизмом и обладающие в основном защитными функциями. Различные формы зрелых лейкоцитов отличаются по форме и структуре ядра, характеру цитоплазмы, ее грануляции, ядерно-цитоплазматическому соотношению. Эти признаки являются основными критериями при исследовании лейкоцитов в окрашенных мазках крови. Исследование числа лейкоцитов в крови – одно из самых распространенных в лабораторной практике.

Унифицированный метод подсчета лейкоцитов

в счетной камере

Принцип. Подсчет лейкоцитов под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной камеры в перерасчете на 1 мкл (или 1 литр по системе СИ), исходя из объема квадратов и разведения крови.

Реактивы. 3-5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный несколькими каплями метиленового синего (для окраски ядер лейкоцитов).

Оборудование. Микроскоп. Счетная камера Горяева.

Ход определения. Кровь разводят в 20 раз. Для этого в пробирку наливают 0,4 мл уксусной кислоты. Набирают 0,02 мл крови, кончик пипетки вытирают салфеткой и вводят содержимое на дно пробирки не смешивая. Затем промывают пипетку в верхнем слое уксусной кислоты и оставляют до момента исследования, но не более 2-4 часов.

Готовят счетную камеру так же, как и для подсчета эритроцитов, заполняют ее смесью лейкоцитов и производят подсчет по всей сетке камеры, используя правило Егорова. Для лучшего контрастирования затемняют поле зрения, опустив конденсор и закрыв диафрагму.

Р асчет количества лейкоцитов производят, исходя из разведения крови (20), числа сосчитанных квадратов (100), объема одного большого квадрата мм³.

,

где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови, а – число лейкоцитов в 100 больших квадратах.

Практически количество лейкоцитов рассчитывается:

Х = а•50.

Лейкоцитарная формула

Лейкоцитарную формулу (процентное соотношение различных видов лейкоцитов) подсчитывают в окрашенных мазках крови.

Унифицированный метод морфологического исследования форменных элементов крови с дифференцированным подсчетом лейкоцитарной формулы

Принцип. Микроскопия сухих фиксированных и окрашенных мазков крови с дифференцированием различных форм лейкоцитов (таб. 1).

Приготовление мазка. На обезжиренное и высушенное стекло наносят каплю крови, оставляют стекло в горизонтальном положении и размазывают каплю крови с помощью шлифованного стекла, держа его под углом 45 градусов. Подождав, пока капля крови расплывется по ребру, быстро проводят по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом травмируются форменные элементы крови. Мазки высушивают на воздухе и маркируют простым карандашом.

Высохший мазок должен быть равномерно тонким, желтоватого цвета, занимать почти всю длину стекла и оканчиваться «метелкой». Мазок фиксируют раствором эозинметиленового синего по Маю-Грюнвальду в течение 5-10 мин. Фиксированные мазки выкладывают на «рельсы» и наливают по 4 мл раствора краски Романовского-Гимза на один мазок, оставляют на 25-40 минут. Время окраски устанавливается опытным путем. По истечении времени окраски мазки промывают водопроводной водой и высушивают.

Реактивы. Иммерсионное масло. Диэтиловый эфир.

Оборудование. Микроскоп. 11-клавишный счетчик для подсчета форменных элементов.

Ход исследования. С помощью малого увеличения (объектив 8*) находят край мазка. Наносят иммерсионное масло, не меняя положения стекла, и переводят иммерсионный объектив 90* таким образом, чтобы он погрузился в масло. Работая микровинтом, устанавливают фокусное расстояние, дающее четкое изображение форменных элементов. Подсчет лейкоцитов проводят, соблюдая следующее правило: отступив 2-3 поля зрения от края мазка, затем 3-5 полей вдоль края мазка, далее 3-5 полей зрения под прямым углом к середине мазка и т.д. (рис. 1). Таким образом, стекло двигают по зигзагу и сосчитывают 100 клеток.

Рис. 1. Принцип перемещения мазка крови при подсчете форменных элементов под микроскопом

Таблица 1.

Характеристика различных видов лейкоцитов здоровых людей

Вид	Ядро	Цитоплазма	Зернистость, ее окраска, характер
Нейтрофилы а) палочкоядер-ные	Форма – узкое, вытянутое в виде палочки. Структура – неравномерно-крупно-глыбчатая. Окраска – темно-фиолетовая	Розовая	Обильная, мелкая, бледно-фиолетовая.
б) сегментоядер-ные	Узкое, из 3-5 сегментов. Структура неравномерная, крупноглыбчатая. Окраска темно-фиолетовая.	Розовая	Обильная, мелкая, бледно-фиолетовая.
Эозинофилы	Ядро несколько шире, чем у нейтрофила, состоит из 2-3 сегментов	Бледно-розовая	Обильная, занимает всю цитоплазму, крупная, розовая.
Базофилы	Форма неопределенная, иногда в виде листа растения. Структура неравномерная, крупно-глыбчатая. Окраска - фиолетовая.	Бледно-розовая, нередко с размытыми участками (растворенными гранулами).	Необильная, неравномерно-фиолетовая.
Лимфоциты	Форма округлая или бобовидная. Структура неравномерная, крупно-глыбчатая. Окраска - фиолетовая.	В виде узкого ободка, иногда широкая, голубая.	Изредка единичные фиолетовые гранулы.
Моноциты	Полиморфное, округлое, бобовидное, с вдавлениями. Структура равномерная, сетчатая. Окраска светло-фиолетовая.	Обильная бледно-голубая или сероватая.	Непостоянная, иногда мелкая, бледно-фиолетовая.