Тема 1. Гематологические исследования
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
Научить основным приемам подготовки методик и организации гематологического исследования.
Освоить приемы забора крови у человека в лабораторных условиях.
Передать студентам навыки работы с камерой Горяева, изготовления мазков крови, чтения гемограммы.
Научить студентов определять некоторые факторы свертывающей системы крови пробирочным методом.
Ознакомить их с методикой электрокоагулографии.
Студенты должны знать:
1. Физиологию системы крови.
Забор крови
Кровь составляет внутреннюю среду организма. Функции ее разнообразны, состав очень сложен, но условно кровь можно разделить на две фракции – плазму и взвешенные в ней форменные элементы. Соотношение между форменными элементами и плазмой (гематокритное число) зависит от функционального состояния организма и меняется при некоторых заболеваниях. Для исследования на общий клинический анализ кровь берут из пальца, обычно утром натощак, до физической нагрузки и каких-либо процедур. Кисть руки кладут на стол, ее четвертый палец обрабатывают спиртом, затем просушивают сухой ваткой. Удерживая между большим и указательным пальцами четвертый палец исследуемого, стерильным скарификатором прокалывают мякоть фаланги пальца. Кровь из ранки должна вытекать без надавливания. Первую каплю снимают ваткой, вторую берут для исследования. После забора крови на ранку накладывают ватку, смоченную спиртом.
Определение содержания гемоглобина
Гемоглобин – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеидам. Он обеспечивает ткани кислородом. Наличие железа, соединенного с протопорфирином, придает гемоглобину (а, следовательно, эритроцитам и крови в целом) красный цвет. Присоединение к гему какого-либо химического вещества сопровождается изменением окраски, на чём основано определение концентрации гемоглобина. Для измерения этого показателя предложено много методов. Наибольшее распространение получили колориметрические, основанные на колориметрии производных гемоглобина. Самым простым и широко распространенным из них является колориметрия солянокислого гематина, или метод Сали. Он очень прост, быстро выполним, но недостаточо точен.
Метод Сали
В градуированную пробирку гемометра Сали пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты до нижней мерки. В специальный капилляр набирают 0,02 мл крови и, обтерев его кончик ваткой, вводят кровь осторожно на дно пробирки так, чтобы верхний слой остался светлым. Осторожно промывают капилляр раствором соляной кислоты, находящимся над кровью. Затем, встряхивая пробирку, перемешивают кровь с соляной кислотой и оставляют на пять минут. За это время успевает образоваться солянокислый гематин. Теперь, постепенно добавляя дистиллированную воду, доводят цвет солянокислого гематина до цвета стандартного раствора. Цифра на шкале пробирки на уровне мениска указывает содержание Нb в г%. Чтобы перевести г% в г/л, необходимо г% умножить на 10.
Унифицированный гемоглобинцианидный метод
Этот метод дает более точные результаты содержания Нb.
Гемоглобин окисляют в метгемоглобин железосинеродистым калием (красная кровяная соль), образовавшийся цианметгемоглобин определяют колориметрически.
Реактивы. 1.Трансформирующий раствор.
Оборудование. Фотоэлектроколориметр (ФЭК-56М, КФК-2 или др.).
Ход определения. В пробирку с 5 мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл крови. Содержимое тщательно перемешивают и оставляют на 10 минут. Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы трансформирующего раствора.
Р
асчет
содержания гемоглобина производят по
формуле:
где Еоp – экстинция опытной пробы; Еst – экстинция стандартного раствора; С – концентрация гемоглобинцианида в стандартном растворе, мг%; К – коэффициент разведения крови; 0,01 – коэффициент для перерасчета мг/100 мл в г/1000 мл.