Определениегруппыкровипосистемеав0спомощьюмоноклональныхат

Для определения групповой принадлежности крови применяют также стандартные реагенты — моноклональные АТ (цоликлоны анти-А и анти-В).

Цоликлоны анти-А и анти-В выпускают в лиофилизированной форме в ампулах по 50 доз. Кроме АТ, реагент содержит краситель (розовый — для цоликлонов анти-А, синий — для цоликлонов анти-В). После растворения цоликлоны переносят в прилагаемые к набору флаконы.

Определение групп крови цоликлонами анти-А и анти-В имеет ряд преимуществ по сравнению с определением изогемагглютинирующими сыворотками: обеспечиваются более высокие качество агглютинации, достоверность и надёжность результатов, исключается возможность панагглютинации, заметно упрощается процедура определения и сокращаются сроки реакции (наступает уже в первые 1–2 с).

Техника

На планшет наносят по одной капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А и анти-В. Рядом с этими каплями наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. Стандартные реагенты и капли крови смешивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин (табл. 24‑10).

Таблица 24–10. Определение группы крови системы AB0 с помощью моноклональных АТ

Группакрови	МоноклональныеАТ
	Цоликлонанти-А	Цоликлонанти-B
0(I)	–	–
А(II)	+	–
В(III)	–	+
AB(IV)	+	+

Примечание. + — наличие агглютинации, — — отсутствие агглютинации.

 Отсутствии агглютинации и с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе 0(I).

 Наличие агглютинации с цоликлоном анти-А, и отсутствие с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II).

 Наличие агглютинации с цоликлоном анти-В, и отсутствие с цоликлоном анти-А указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III).

 Наличие агглютинации в обеих луночках (как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В) указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе АВ(IV).

При подозрении на спонтанную агглютинацию у больных с группой крови AB(IV) проводят контрольное исследование, где вместо цоликлонов анти-А и анти-В используют изотонический раствор хлорида натрия. Реакция агглютинации должна быть отрицательной.

Лейкоциты

Лейкоциты — ядерные клетки шаровидной формы (см. рис 24–1 и 24–2). В цитоплазме лейкоцитов находятся гранулы. В зависимости от типа гранул, лейкоциты подразделяют на гранулоциты (зернистые) и агранулоциты (незернистые).

 Гранулоциты(нейтрофилы, эозинофилы, базофилы) содержат специфические (вторичные) и азурофильные (лизосомы) гранулы.

 Агранулоциты(моноциты, лимфоциты) содержат только азурофильные гранулы.

 Ядро. Гранулоциты имеют дольчатое ядро разнообразной формы, отсюда их коллективное название —полиморфноядерныелейкоциты. Лимфоциты и моноциты имеют недольчатое ядро, это —мононуклеарныелейкоциты.

 Подвижность. Лейкоциты используют кровоток как средство пассивного транспорта. Лейкоциты имеют сократительные белки (актин, миозин) и способны к активному перемещению, что позволяет им выходить из кровеносных сосудов, проникая между эндотелиальными клетками (диапедез) и разрушая секретируемыми ими ферментами базальную мембрану эндотелия. Направленную миграцию лейкоцитов (хемокинез, хемотаксис) контролируют различные вещества (в том числе хемоаттрактанты).

 Функции. Лейкоциты участвуют в защитных реакциях, уничтожая микроорганизмы, захватывая инородные частицы и продукты распада тканей, осуществляя реакции гуморального и клеточного иммунитета.

Числолейкоцитоввкрови. В 1 л крови взрослого здорового человека содержится 3,8–9,810⁹лейкоцитов. Изменяющаяся потребность в отдельных типах лейкоцитов отражается в увеличении (лейкоцитоз) или уменьшении (лейкопения) количества лейкоцитов в единице объёма циркулирующей крови. Например, при острых бактериальных инфекциях в крови увеличивается число нейтрофилов (нейтрофильныйлейкоцитоз). При вирусных и хронических инфекциях происходит увеличение числа лимфоцитов (лимфоцитоз), при паразитарных инфекциях наблюдаетсяэозинофилия.

Определениеколичествалейкоцитов

В пробирку наливают 0,4 мл раствора Тюрка. Капиллярной пипеткой набирают из свежей капли 0,02 мл крови, осторожно выдувают её в пробирку с реактивом и ополаскивают им пипетку. Смесь хорошо перемешивают. Концом круглой стеклянной палочки отбирают каплю разведённой крови и наносят на край шлифованного стекла камеры Горяева. Подсчёт лейкоцитов ведут в 100 больших квадратах, собранных вместе по четыре. При этом используют малое увеличение микроскопа. Полученное значение умножают на 25, при этом получают количество лейкоцитов в 1 мкл периферической крови.

 Физиологическийлейкоцитоз— состояние, характеризующееся увеличением числа лейкоцитов в единице объёма крови выше нормы (>910⁹/л). Среди физиологических лейкоцитозов выделяют функциональные и защитно-приспособительные.

 Функциональныйлейкоцитозобусловлен выполнением организмом определённой функции (например, лейкоцитоз во время беременности, увеличение числа лейкоцитов в крови после приёма пищи или после длительной физической работы).

 Защитно‑приспособительныйлейкоцитозразвивается при воспалительных процессах, повреждении клеток и тканей (например, после инфарктов или инсультов, травмы мягких тканей), стресс‑реакции.

 Патологическийлейкоцитознаблюдается при лейкозах. Эта разновидность лейкоцитоза, развивающаяся за счёт увеличения числа лейкоцитов опухолевой природы, не имеет адаптивного значения для организма. Лейкозные лейкоциты характеризуются нарушением функциональной активности лейкоцитов: снижена их способность синтезировать и высвобождать цитокины и низка их фагоцитарная активность. В связи с этим у пациентов с лейкозами снижена эффективность реакций иммунитета, нередко развиваются аллергические реакции и болезни иммунной аутоагрессии.

Механизмыразвитиялейкоцитозов. Развитие лейкоцитозов является следствием стимуляции лейкопоэза и выхода лейкоцитов из гемопоэтической ткани в периферическую кровь, перераспределения лейкоцитов в сосудистом русле, а также опухолевой активации лейкопоэза при лейкозах и гематосаркомах, гемоконцентрации в результате повторной рвоты, диареи, полиурии.

 Регенераторныйлейкоцитоз(истинный, или абсолютный лейкоцитоз) происходит при повышении уровня и/или активности гуморальных стимуляторов лейкопоэза (например, колониестимулирующих факторов). В результате увеличивается число пролиферирующих клеток лейкопоэтической ткани, сочетающееся, как правило, с дифференцировкой их в зрелые лейкоциты. Именно это наблюдается, например, при воспалительных реакциях и развитии аллергических процессов.

 Ложныйлейкоцитоз(относительный, или перераспределительный лейкоцитоз) наблюдается при перераспределении лейкоцитов в сосудистом русле. Перераспределительный лейкоцитоз носит временный характер и не сопровождается увеличением числа молодых форм лейкоцитов. Перераспределительный лейкоцитоз:

 характеризуетсяскоплением большого числа зрелых лейкоцитов в каком‑либо регионе организма, отсутствием признаков гиперплазии лейкопоэтической ткани, сохранением общего числа лейкоцитов в крови в пределах нормального диапазона.

 можетнаблюдатьсяпосле значительной физической нагрузки («миогенный лейкоцитоз»), при травматическом, гемотрансфузионном, анафилактическом шоке (увеличивается число лейкоцитов в крови микрососудов лёгких, печени, стенок кишечника).

 Лейкопения— состояние, характеризующиеся уменьшением количества лейкоцитов в единице объёма крови ниже нормы (<410⁹/л). Различают первичные (врождённые или наследственные) и вторичные (приобретённые, вследствие радиационного поражения, отравлений, применений ЛС) лейкопении.

Значениелейкопении. При выраженной лейкопении происходит снижение сопротивляемости организма (противоинфекционной, а также противоопухолевой). Это обусловлено тем, что лейкоциты участвуют в реализации гуморального и клеточного звеньев иммунитета, а также фагоцитарной реакции. При лейкопениях часто наблюдается бактериальное и вирусное инфицирование организма с развитием ринитов, бронхитов, плевритов, воспаления лёгких, конъюнктивитов и других форм инфекционной патологии.

 Причиныприобретённыхлейкопений

 Ионизирующая радиация

 Химические вещества (бензол, горчичный газ), инсектициды

 ЛС (могут привести к нейтропении и даже агранулоцитозу): нестероидные противовоспалительные препараты, антиметаболиты (метотрексат, фторурацил, цитарабин), сульфаниламиды, барбитураты; диакарб, левамизол, тиамазол (мерказолил), хлорамфеникол (левомицетин), изониазид, метициллин, триметоприм, хингамин, алкилирующие вещества (циклофосфамид [циклофосфан]), противоопухолевые антибиотики (доксорубицин).

 Болезни иммунной аутоагрессии (например, системная красная волчанка), генерализованные инфекции (брюшной тиф, паратиф, грипп, корь, риккетсиозы, гепатиты), кахексия.

Лейкоцитарнаяформула— процентное содержание в периферической крови отдельных форм лейкоцитов. Подсчёт лейкоцитарной формулы крайне важен для клинической практики, поскольку именно лейкоциты раньше и быстрее других элементов крови реагируют на внешние и внутренние изменения (в частности на воспаление).

 Увеличениесверх нормы числа отдельных видов лейкоцитов обозначают терминами нейтрофилия (нейтрофилёз), базофилия, эозинофилия (эозинофилёз), лимфоцитоз, моноцитоз.

 Уменьшениениже нормального диапазона отдельных разновидностей лейкоцитов обозначают как нейтропения, эозинопения, лимфопения (лимфоцитопения), моноцитопения.

 Агранулоцитоз — отсутствие или значительное снижение абсолютного числа всех видов зернистых лейкоцитов: гранулоцитов (нейтрофилов, эозинофилов и базофилов). Это состояние сочетается, как правило, с лейкопенией.

 Термин «базопения» не употребляют, так как и в норме базофилы могут отсутствовать в периферической крови.