3. Метод культивирования в жидких средах под слоем масла.

Техника постановки: после посева поверх питательной среды в пробирке наливают слой стерильного масла (вазелинового).

Примеры: среда Китта-Тароцци; культивирование в средах Гисса под слоем масла (чтобы выяснить, ферментирует ли микроб углевод в анаэробных условиях).

4. Использование редуцирующих и окисляющих веществ.

Эти вещества добавляют в питательную среду.

Редуцирующими (связывающими) веществами являются: кусочки животных тканей (печени, кожи, сердца, костного мозга), кусочки растительных тканей, кусочки ваты, тиогликолят натрия, солянокислый цистеин. Они связывают токсичные для анаэробов перекисные соединения.

Окисляющими веществами (антиоксидантами) является глюкоза.

Примеры сред: Китта-Тароци (ЭППБ – это ЭПБ с добавлением 0,5-1 % агара свежеваренных кусочков печени и глюкозы).

Сверху среду покрывают стерильным вазелином или парафиновым маслом.

Перед посевом эту среду прогревают. Рост будет осуществляться в течение 3-5 дней.

5. Метод виньяля-виона.

Техника постановки. При этом методе используют специальные стеклянные трубочки длинною 30 см, диаметром 3-6 мм (трубки Виньяля).

1) Один конец трубочки вытягивается под пламенем горелки в виде капилляра. На втором конце делают претяжку и помещают в нее кусочек стерильной ваты.

2) Охлаждают сахарозный или глюкозо-кровяной агар до 50°С.

3) Производят посев пат материала, перемешивают и насасывают расплавленную среду с пат материалом в стеклянную трубочку.

4) Капилляр запаивают, трубочку помещают в термостат.

5) Через 3-4 дня в толще трубочки появляется рост в виде колоний. В стерильных условиях трубочку вскрывают, извлекают колонии бак петлей.

6. Метод с использованием специальных приборов и аппаратов (анаэростат и эксикатор).

Эти приборы производят механическое удаление воздуха из сосудов при выращивании анаэробных микроорганизмов (создают вакуум).

Анаэростат представляет собой герметично закрываемую цилиндрическую ёмкость, в которой отсутствует кислород (этого добиваются откачкой воздуха или химическими методами). Ёмкость и крышка выполнены из оптически прозрачной пластмассы или из металла. В крышку вмонтирован вакуумметр и вентиль для присоединения вакуумного насоса и внешней системы источника газа. При выращивании анаэробов, доводят t° до 37°, помещают в анаэростат пробирки или чашки Петри, засеянные анаэробами, дверцу анаэростата герметически закрывают и вакуум-насосом доводят разрежение до определенной степени.

7. МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ В АТМОСФЕРЕ ИНЕРТНОГО ГАЗА, ДИОКСИДА УГЛЕРОДА, АЗОТА.

II. ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Сущность методов: основаны на применении различных химических веществ (углеродистая сода и гидросульфид Na, пирогаллол и 10% NaOH). В результате взаимодействия веществ происходит химическая реакция с активным поглощением О₂ воздуха.

1. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРОСТОГО ХИМИЧЕСКОГО ЭКСИКАТОРА.

Техника постановки. В стеклянную емкость на специальную подставку помещают чашку Петри, пробирки с посевами, предварительно на одну кладут кусочек ваты, смоченной 96° спиртом. Затем ватку поджигают, закрывают ее быстро крышкой. В процессе горения спирта, О₂ сгорит. Сам эксикатор помещают в термостат.

2. МЕТОД АРИСТОВСКОГО.

Техника постановки. В 2 крышки от чашки Петри насыпают порошок углекислой соды, на который насыпают гидросульфид Na. К этим веществам добавляют немного воды. Одну крышку ставят на дно анаэростата, эксикатора, далее помещают посевы, над которыми ставят 2-ю крышку с химическим веществом, прибор закрывают, ставят в термостат.

III. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

1. МЕТОД ФОРТНЕРА.

Сущность метода: заключается в том, что при совместном культивировании анаэробов и аэробов в чашке Петри на агаре, создаются анаэробные условия за счет того, что аэробы растут первыми и поглощают О₂, имеющийся в чашке.

Техника постановки:

1) Берут чашку Петри с агаром, в стерильных условиях по центру чашки стерильным скальпелем вырезают полоску среды (шириной 1 см).

2) На одну сторону высевают колонии аэробов, на другую – анаэробов.

3) Чашку закрывают, а ее края заливают парафином, чашку ставят в термостат и через 3-4 дня.

После того, как аэробы использовали весь кислород для своего роста, в чашке начинается рост колоний анаэробов.

2. БИОПРОБА НА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ.

Проводится заражение животных и последующее выделение анаэробов из их трупного материала.

IV. КОМБИНИРОВАННЫЙ МЕТОД

Сущность метода: этот метод основан на использовании химических, физических и биологических методов.

1. МЕТОД ЦЕЙСЛЕРА.

Сущность метода: берут 3 чашки Петри (колбы) с глюкозо-кровяным агаром, в 1-ю чашку наносят каплю иссл материала, затем шпателем (бак петлей) материал размазываю по поверхности. Далее не обрабатывая петлю с остатками материала делают посев на 2-ю чашку. Посев помещают в эксикатор и культивируют. Посев рассматривают через 3-4 дня.