- •Общая микробиология Занятие №1. Тема: вводное занятие.
- •2. Микробиологическая лаборатория.
- •3. Методы микробиологических исследований.
- •1. Микроскопический (бактериоскопический, вирусоскопический).
- •2. Культуральный (бактериологический, вирусологический, микологический, протозоологический методы).
- •3. Биологический (экспериментальный).
- •4. Иммунобиологический (серологический).
- •5. Аллергологический (аллергический).
- •6. Молекулярно-генетический (молекулярно-биологический).
- •4. Строение микроскопа. Особенности микроскопии в иммерсионной системе.
- •Занятие №2. Тема: бактериоскопический метод исследования. Морфология микроорганизмов.
- •2. Морфология микроорганизмов.
- •1. Шаровидные формы бактерий (кокки)
- •2. Палочковидные формы бактерий
- •3. Извитые формы бактерий
- •3. Размеры микроорганизмов.
- •4. Полиморфизм микроорганизмов.
- •Занятие №3. Тема: бактериоскопический метод исследования. Микроскопия окрашенных и неокрашенных микроорганизмов.
- •2. Исследование микробов на подвижность.
- •1. Приготовление препарата «раздавленная капля»
- •2. Приготовление препарата «висячая капля»
- •3. Техника приготовления мазков.
- •1. Техника приготовления мазков-препаратов
- •2. Техника приготовления мазков-отпечатков
- •2. Метод пешкова (метод окраски спор)
- •Занятие №4. Тема: бактериологический метод исследования. Культивирование микроорганизмов.
- •2. Питательные среды и методы стерилизации.
- •2. Посев (пересев) бактерий в пробирку со скошенной плотной:
- •3. Посев (пересев) бактерий в пробирку уколом с плотной средой (агаром или желатином)
- •4. Посев (пересев) бактерий в чашку петри с плотной средой:
- •4. Культивирование аэробов.
- •I. Механические методы (механические методы разобщения микробных клеток):
- •1. Метод пастера.
- •2. Метод коха.
- •3. Метод дригальского.
- •4. Метод истощающего штриха.
- •II. Термический метод.
- •III. Химические методы.
- •1. Метод выделения микроорганизмов с помощью кислот, щелочей, спирта.
- •2. Метод обогащения.
- •3. Методы с применением антибиотиков.
- •IV. Биологический метод.
- •3. Метод культивирования в жидких средах под слоем масла.
- •4. Использование редуцирующих и окисляющих веществ.
- •5. Метод виньяля-виона.
- •6. Метод с использованием специальных приборов и аппаратов (анаэростат и эксикатор).
- •Занятие №5. Тема: бактериологический метод исследования. Биохимические свойства микроорганизмов.
- •3. Сахаролитические свойства микроорганизмов.
- •1. Обнаружение сахаролитической активности на средах гисса.
- •2. Обнаружение сахаролитической активности на других средах.
- •4. Протеолитические свойства микроорганизмов.
- •1. Обнаружение протеалитической активности на мясо-пептонной желатине (мпж).
- •2. Обнаружение протеолитической активности на молоке.
- •5. Редуцирующие свойства микроорганизмов.
- •1. Определение редуцирующих свойств на молоке с метиленовым синим.
- •2. Определение редуцирующих свойств на лакмусовом молоке.
- •6. Гемолитические свойства микроорганизмов.
- •1. Определение гемолитических свойств на кровяном агаре.
- •Занятие №6. Коллоквиум
- •Специальная микробиология Занятие № 7. Тема: микробиология молока и молочнокислых продуктов.
- •Микрофлора молока
- •1. Молочные стрептококки:
- •2. Молочные палочки:
- •Микрофлора молочнокислых продуктов
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочнокислых продуктов.
- •3. Обнаружение возбудителей туберкулеза и бруцеллеза в молоке и молочнокислых продуктах.
- •Занятие № 8. Тема: микробиология кормов.
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование кормов.
- •3. Обнаружение возбудителей ботулизма в кормах. Микотоксикозы.
- •4. Консервирование кормов.
- •Занятие № 9. Тема: микробиология мяса, кожевенно-мехового сырья и яиц.
- •Микрофлора мяса
- •Микрофлора кож-мех сырья
- •Микрофлора яиц
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование мяса, кожевенно-мехового сырья и яиц. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •3. Обнаружение возбудителей сибирской язвы в мясе и кожевенно-меховом сырье.
III. Химические методы.
Сущность методов: методы выделения чистых культур с помощью химических веществ используется при изолировании культур микроорганизмов, устойчивых к определенным химическим веществам.
1. Метод выделения микроорганизмов с помощью кислот, щелочей, спирта.
Сущность метода: при воздействии на смесь микробов кислотами (щелочами, спиртами), выживают только устойчивые к действию этих химических веществ. При последующих высевах на плотную среду выжившие бактерии прорастают, формируя колонии.
Применяют для выделения чистых культур бактерий, устойчивых к действию кислот, щелочей и спирта (возбудители туберкулеза).
Техника постановки: исследуемый материал перед посевом заливают 15 % раствором кислоты (щелочи) и выдерживают в термостате в течение 3-4 часов. После нейтрализации кислоты (или щелочи) обработанный материал высевают на плотную среду и получают изолированные колонии бактерии.
2. Метод обогащения.
Сущность метода: заключаются во внесении в питательную среду определенных веществ, которые стимулируют рост только определенных групп микроорганизмов.
Такие среды часто применяют для выделения чистых культур микроорганизмов из материалов, в которых мало выделяемых микроорганизмов, но содержится большое количество сопутствующей микрофлоры (БГКП – бактерий группы кишечной палочки, сальмонелл).
Техника постановки: для увеличения численности выделяемого вида микроорганизмов вначале делают посев исследуемого материала в накопительные питательные среды (они содержат вещества, стимулирующие его рост и угнетающие или задерживающие размножение сопутствующей микрофлоры).
Примеры накопительных питательных сред: среды обогащения Кауфмана, Мюллера (для выделения сальмонелл); среда Кесслера (для выделения бактерий группы кишечной палочки).
3. Методы с применением антибиотиков.
Сущность метода: методы основаны на культивировании микроорганизмов на питательных средах, содержащих антибиотики, задерживающие рост одних микроорганизмов и не влияющие на рост других. В итоге вырастают не чувствительные к антибиотикам микробы.
IV. Биологический метод.
Сущность метода: заключается в заражении лабораторных животных (биопробе) и выделении чистой культуры. Метод основан на избирательной способности организма животного противостоять микробам различных видов, что выражается в быстрой скорости размножения микробов определенного вида при попадании его в кровь и внутренние органы, откуда его и выделяют. В то же время другие виды микробов погибают под воздействием защитных факторов организма. Таким образом, выделяют, например, чистую культуру пневмококков из белых мышей, палочки туляремии из морских свинок и т. д.
Метод используется для выделения патогенных микроорганизмов.
Техника постановки: заражают лабораторных животных, выдерживают их в течение определенного времени, вскрывают павшее (убитое) животное, из внутренних органов делают посевы на специальные среды, на которых вырастают чистые культуры выделяемых микробов.
5. Культивирование анаэробов.
Анаэробы – это микроорганизмы, для жизнедеятельности которых не нужен О2 воздуха (для некоторых даже губителен).
I. ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Сущность методов: основаны на физическом удалении воздуха, ограничении его поступления, или замены воздуха специализированной газовой смесью.
1. ПОСЕВ МАТЕРИАЛА В ГЛУБИНУ ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД.
Техника постановки: посев производят путем укола бак иглой (петлей), смоченной исследуемым материалом в пробирку со столбиком плотной среды (с высоким столбиком агара) или в расплавленную плотную или полужидкую питательную среду. После посева такую пробирку помещают в специальные приборы и ставят в термостат. В данном случае рост должен происходить в нижних слоях агара.
2. МЕТОД КОХА.
Сущность метода: для выделения анаэробных микроорганизмов по методу Коха необходимо ограничить доступ кислорода к культуре.
Техника постановки:
1) Посевной материал перемешивают с агаризированной средой. Ватную пробку заменяют резиновой или заливают поверхность агара смесью парафина и вазелинового масла (1:1).
2) После посева такую пробирку помещают в специальные приборы и ставят в термостат.
3) Чтобы извлечь выросшие колонии анаэробных микроорганизмов, пробирки слегка нагревают, быстро вращая над пламенем горелки. Агар, прилегающий к стенкам, расплавляется, и столбик легко выскальзывает в подготовленную чашку Петри. Далее столбик с агаром разрезают стерильным скальпелем, колонии извлекают стерильной петлей или стерильной капиллярной рубкой и переносят в жидкую среду.