5 Вопрос: Реакция нейтрализации.

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т.е. их нейтрализацией. Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген- антитело животным или в чувствительные тест- объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест- объектов повреждающего действия м/о или их антигенов и токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген- антитело.

6 Вопрос: Реакции с участием комплемента.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента комплексом антиген- антитело.

К реакциям с участием комплемента относятся: реакция связывания комплемента (РСК), радиального гемолиза, иммунного прилипания.

Реакция связывания комплемента (рск)

Эту реакцию часто применяют при диагностике инфекций, вызванных спирохетами, риккетсиями и вирусами.

Компоненты реакции:

1) Основная система- антиген, антитело, комплемент.

2) Индикаторная система- эритроциты барана, гемолитическая сыворотка.

Если антиген и антитело подходят друг другу, то образуется комплекс антиген- антитело, который связывает комплемент. Если же антиген и антитело не подходят друг другу, то комплемент остается свободным и связывается с гемолитической сывороткой, вызывая гемолиз эритроцитов.

Положительный результат реакции, подтверждающий первоначальный диагноз- отсутствие гемолиза, отрицательный результат- наличие гемолиза.

Реакция радиального гемолиза

Ставят в лунках геля из агара. После внесения в лунки геля гемолитической сыворотки вокруг них в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза. Таким образом можно определить активность комплемента и гемолитической сыворотки, а также антитела в сыворотке крови у больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом.

Реакция иммунного прилипания

Основана на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой. При положительном результате происходит соединение и агглютинация эритроцитов и тромбоцитов.

7 Вопрос: Реакции с использованием меченых антител или антигенов.

1) Реакция иммунофлюоресценции-РИФ (метод Кунса)- основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, мечеными флюорохромами, способны светиться в УФ- лучах люминесцентного микроскопа (прямой метод)

Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Различают три основных разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс- диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител.

2) Иммуноферментный анализ (ИФА)_- выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом- меткой.

После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат и хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и его продукты деградации вызывают химическую модификацию хромогена. При этом хромоген меняет свой цвет- интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Наиболее распространен метод твердофазный ИФА, когда один из компонентов реакции (антиген или антитела) сорбирован на твердом носителе, например, в лунках микропанелей из полистирола. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, для определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в очень небольших количествах.

3) Радиоиммунологический анализ (РИА)_ высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген- антитело с применением антигенов или антител, меченых радионуклидом.

РИА применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в очень небольших количествах.

4) Иммуноблоттинг- высокочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Используют для диагностики ВИЧ и других инфекций.