Определение рН раствора
Значение рН раствора аскорбиновой кислоты позволяет проконтролировать выбор марки стекла для ампулирования раствора, соблюдение режима стерилизации и наличие в растворе натрия гидрокарбоната. Определение рН раствора проводят потенциометрическим методом. В соответствии с требованиями ФСП значение рН испытуемого раствора должно быть 5,7–7,0.
Заключение: рН раствора 6,5, что соответствует требованиям ФСП.
Испытание на подлинность
ФСП рекомендует для установления подлинности аскорбиновой кислоты УФ-спектрофотометрический метод. Для этого готовят 0,001% растворы испытуемого препарата и субстанции аскорбиновой кислоты в фосфатном буферном растворе с рН 7. Снимают УФ-спектры растворов в области от 230 до 300 нм. Они должны быть идентичными и иметь максимум поглощения при 265±2 нм.
Дополнительно проводят аналитические реакции аскорбиновой кислоты. За счет ен-диольной группировки она легко окисляется в дегидроаскорбиновую кислоту. Восстанавливающие свойства аскорбиновой кислоты подтверждают реакциями с растворами серебра нитрата и 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия.
К 1 мл препарата прибавляют 0,5 мл раствора раствора серебра нитрата; выпадает темно-серый осадок.
0,2 мл препарата разбавляют 10 мл воды и прибавляют по каплям раствор натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолята; синяя окраска последней исчезает
Заключение: результаты реакций положительные; УФ-спектры испытуемого препарата и субстанции аскорбиновой кислоты идентичны.
Испытание на стерильность
Нарушение санитарно-гигиенических условий производства и режима стерилизации может привести к загрязнению инъекционных растворов микрофлорой, которая может вызвать инфицирование организма больного. Поэтому инъекционные растворы подлежат контролю на стерильность в соответствии с требованиями ОФС 42-0066-07 «Стерильность», изложенной в ГФ Х11.
Испытание на пирогенность
Во избежание пирогенной реакции инъекционный раствор аскорбиновой кислоты подвергается испытанию на пирогенность. Испытание проводят биологическим методом на кроликах по методике, изложенной в ОФС 42-0061-07 «Пирогенность» ГФ Х11.
Количественное определение
Содержание аскорбиновой кислоты в лекарственном препарате позволяет выбрать титриметрический метод. Из всех возможных методов предпочтительными являются окислительно-восстановительные методы. Исключается алкалиметрия, так как определению будет мешать присутствующий в растворе натрия гидрокарбонат. Согласно требованиям ФСП, содержание аскорбиновой кислоты определяют йодатометрическим методом в присутствии формальдегида, который связывает натрия сульфит и тем самым предотвращает протекание побочной реакции взаимодействия титранта с натрия сульфитом.
Вспомогательная реакция:
Основная реакция:
Избыточная капля титрованного раствора калия йодата реагирует с калия йодидом в кислой среде с выделением свободного йода, который образует с крахмалом комплекс синего цвета.
Расчет навески:
1/z = ½
Э =
=
= 88,06 г/моль
Т =
=
= 0,008806 г/мл
Анализ лекарственных препаратов чаще всего выполняется в полумикроварианте, поэтому расход титранта должен быть 5–10 мл.
Q = Т · V = 0,008806 · 10 = 0,088 г
Делают пересчет на раствор аскорбиновой кислоты:
5 г – 100 мл
0,088 г – Х мл Х = 1,8 мл
С позиции метрологии следует отмерить 2 мл пипеткой вместимостью 2 мл. По методике, изложенной в ФСП, берут для титрования 5 мл препарата. Следовательно, на титрование израсходуется не 10 мл, а больше, что можно подтвердить расчетами.
В 5 мл лекарственного препарата содержится аскорбиновой кислоты:
5 г – 100 мл
Х г – 5 мл Х = 0,25 г
На титрование 0,25 г аскорбиновой кислоты пойдет 0,1 М раствора калия йодата:
V =
= 28,4 мл
Как видно из расчетов, анализ лекарственного препарата по ФСП выполняется в макроварианте, что не противоречит требованиям и правилам титриметрии. Поэтому методика, изложенная в ФСП, является научно обоснованной.
Методика: к 5 мл раствора препарата прибавляют 0,25 мл 1% раствора формальдегида, 4 мл 2% раствора хлороводородной кислоты, 0,5 мл 1% раствора калия йодида, 2 мл раствора крахмала и титруют 0,1 М раствором калия йодата до появления стойкого светло-синего окрашивания.
Содержание аскорбиновой кислоты в 1 мл препарата вычисляют по формуле:
Х = , где
Т – титр титрованного раствора по определяемому веществу;
V – объем титрованного раствора, пошедший на титрование;
К – поправочный коэффициент титрованного раствора;
Q – объем лекарственного препарата, взятый на титрование.
Полученный результат сравнивают с допустимыми пределами, указанными в ФСП (0,0475–0,0525 г в 1 мл препарата).
После завершения анализа делают общее заключение о соответствии или несоответствии раствора аскорбиновой кислоты в ампулах требованиям ФСП.