• Определение групп крови моноклональными антителами
Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые получают с помощью гибридомной, биотехнологии.
Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует специфические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, характерна для опухолевой клетки и присущей лимфоциту способностью синтезировать антитела.
Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, применяемые для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.
•Техника проведения.
•Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После перемешивания компонентов наблюдают за реакцией агглютинации в течение 2-3 минут. Оценка результатов очень проста.
•Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выделить три основные группы ошибок: ошибки, связанные с низким качеством реагентов; технические ошибки; ошибки, связанные с особенностями.
•Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыворотке,
условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подобное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.
Явление панагглютинации и аутоагглютинации
наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности проводить при температуре 37° С, они исчезают.
Нужно строго помнить, что во всех случаях нечеткого или сомнительногскрезультата следует провести повторное определение групп крови при помощи стандартных сывороток других серий, а также перекрестным способом.
Гемолитическая болезнь плода/новорождённого (ГБП/ГБН) — заболевание, характеризующееся гемолизом эритроцитов и/или угнетением гемопоэза под влиянием АТ, образующихся у матери к Аг эритроцитов плода, взаимно проникающих через плацентарный барьер, проявляющееся анемией, увеличением числа бластных форм эритроцитов, часто билирубина в крови плода/новорождённого. При резус-несовместимости кровь матери — резус- отрицательная, а у плода — резус-положительная. Выявление у женщин с резус-отрицательной кровью антирезус-АТ указывает на сенсибилизацию к Аг системы резус.
•Изоиммунизация может также развиться и в результате несовместимости крови матери и плода по другим системам эритроцитарных Аг, например, системе АВ0, когда у матери 0 (I) группа крови, а у плода любая другая. Аг А и В плода могут проникать во время беременности в кровоток матери, приводя к выработке иммунных α- и β-АТ соответственно и развитию у плода реакции «Аг-АТ» (Аα, Вβ). Групповая несовместимость крови матери и плода, хотя и встречается чаще, чем несовместимость по другим системам Аг, но ГБП и ГБН при этом протекают легче и, как правило, не требуют интенсивной терапии.
Изосерологическая несовместимость
крови матери и плода по Rh.
Rh- антиген, представляющий белок (протеин), содержащийся в эритроцитах человека. РазновидностейRhмного, наиболее известны : С,Д,Е и др, выявлены сочетания этих разновидностей с другими - получается новый а/г. Самым опасным в планеRh- конфликта является разновидность Д гемолитическая болезнь плода и н/р. Разновидность Д - у 85% всех людей. На 1 тыс. родов встречается 170Rh”-“ женщин и у 100 из них будетRh”+” плод. 15% всех браков имеютRh-конфликт (РК).
•Этиология и патогенез РК: развивается только если у материRh”-“ кровь, а у плодаRh”+”(унаследован от отца). Через плаценту в кровь матери поступают эритроциты плода, содержащиеRh, который является а/г. Это ведёт к выработке в организме матери антирезус-а/т, которые обратно через плаценту поступают в кровь плода. Происходит реакция а/г-а/т, ведущая к гемолизу эритроцитов и гемолитической болезни плода. Развивается анемия, накапливается много непрямого Бн, который является токсичным для всех ферментных, метаболических и обменных процессов в организме нарушение всех видов обмена, развивается тканевая гипоксия. Бн имеет сродство и накапливается в жировой ткани ганглиозных ядер головного мозга- билирубиновое пропитывание ядер -ядерная желтуха. В условиях тканевой гипоксии активируется ПОЛ, а продукты пероксидации повреждают мембраны-повышение проницаемости мембран сосудов выпотевание жидкости из сосудов в ткани универсальный отёк (анасарка). Анемия у плода-сердечная
недостаточность застой по БКК гепатоспленомегалия; в печени формируется очаг экстрамедуллярного кроветворения-печёночная недостаточность, нарушение синтеза белков (в т.ч. и факторов свёртывания).
•Пути сенсибилизации женщины к Rh :
•В/м или в/в введение крови или её препаратов (несовместимой).
•Беременность, закончившаяся абортом не ранее 7-8 нед беременности. Дифференциация Rhплода происходит к 7-8 нед беременности.
•Роды - большое количество а/г поступает в кровь матери (с каждыми родами сенсибилизация увеличивается на 10 %. При первой беременности может не быть РК, так как количество а/г небольшое и иммунный ответ незначительный, но при повторной беременности даже незначительное поступление а/г вызывает ГБ плода.
•Ведение Rh-отрицательных женщин в женской консультации:
•Определение Rhотца, еслиRh-отрицательный, то ведём как обычную беременную, еслиRh-положительный :
•определение зиготности крови отца (определить Rhродителей отца: если у родителейRh”+”, то 100% у плодаRh”+”, если отец гетерозиготен - 50%;
•собрать акушерский и гемотрансфузионный анамнез;
•кровь на титр а/т (не реже 1 раза в месяц, если титр а/тотрицательный, то надо в 28 нед беременности ввести антиRh-Д- -глобулин (1 доза) и после родов (если у н/рRh”+”)
вновь повторяют введение; если есть титр а/т, то вести беременную как с иммунизацией;