2.2.2. Идентификация молочнокислых бактерий

Каждый новый штамм микроорганизмов должен быть достаточно изучен для получения полного набора данных о свойствах чистой культуры данного микроорганизма.

Идентификация микроорганизма включает описание самого штамма и сравнение его с ранее классифицированными микроорганизмами. Поэтому микроорганизм может быть идентифицирован, то есть, определен как идентичный конкретному таксону только в том случае, если этот таксон уже известен. Микроорганизмы, которые ранее не были выделены, должны быть идентифицированы вначале как новые и затем классифицированы в рамках существующей таксономии и названы согласно Международному кодексу номенклатуры бактерий (http: // www. bacterio. cict. fr).

Молочнокислые бактерии, встречающиеся в различных естественных источниках, находятся в ассоциациях с другими микроорганизмами. Поэтому при выделении их идентифицируют различными способами.

Идентификация неизвестного микроорганизма представляет собой процесс последовательного его отождествления с той или иной большой группой микробов, характеризующихся общими свойствами, затем с семейством в пределах группы, далее с тем или иным родом в пределах установленного семейства, и на конечном этапе исследуемый микроорганизм отождествляют (идентифицируют) по совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, патогенных свойств с каким-либо видом в пределах рода (В.Н. Кисленко, 2005).

Для идентификации молочнокислых бактерий наиболее широкое распространение получили два метода: а) метод, основанный на изучении морфологических, культуральных и физиолого-биохимических свойств культур; б) серологический метод.

2.2.2.1. Культуральные свойства изучаемых штаммов

Культуральные признаки микроорганизмов определяются характером их роста на питательных средах. Они являются важными диагностическими признаками, так как постоянны для каждого вида бактерий.

Изучение культуральных или макроморфологических свойств отобранных штаммов молочнокислых микроорганизмов проводили на плотной питательной среде – агаре MRS.

В ходе изучения культуральных свойств определяли диаметр колонии в миллиметрах, описывали их форму (точечная, круглая, корневидная и т.д.); характер контура края (ровный, волнистый, бахромчатый и т.д.); поверхность (гладкая, морщинистая, шероховатая, извилистая); рельеф (плоский, выпуклый, плосковыпуклый); цвет (белый, молочный, кремовый); структуру (однородная, неоднородная, зернистая и т.д.) и консистенция (пастообразная, вязкая, волокнистая и т.д.).

Изучали также характер роста бактерий на жидких питательных средах (придонный, пристеночный или поверхностный, или же рост с равномерным помутнением среды).

Поверхностный рост бактерий характеризуется образованием пленки на поверхности среды, которая может быть тонкой, в виде едва заметного налета; хорошо видимой влажной плотной или плотной сухой. Такой рост характерен для бактерий с аэробным типом дыхания.

Придонный рост микроорганизмов присущ анаэробным микроорганизмам и характеризуется образованием осадка на дне пробирки с жидкой питательной средой. Осадок может быть обильным или же незначительным, крошковидным или гомогенным, волокнистым или хлопьевидным, по консистенции – пастообразным, вязким или слизистым. Рост с равномерным помутнением среды характерен для факультативных анаэробов.

При пристеночном росте сама питательная среда остается прозрачной, а бактерии образуют хлопья или плотные конгломераты, которые прикрепляются к внутренней поверхности стенок пробирки и, в зависимости от типа бактерий, снимаются легко или с трудом.

Рост на плотных питательных средах (культуру уколом бактериологической иглы засевают в пробирки с высоким столбиком агара) позволяет выявить отношение микроорганизмов к кислороду.

После культивирования отмечают характер роста: рост на поверхности среды характерен для микроорганизмов, относящихся к аэробам; если рост только в глубине или на дне столбика агара, микроорганизмы относятся к облегатным анаэробам.

Равномерный рост по всему ходу укола указывает, что выросшие микроорганизмы – факультативные анаэробы, рост на некотором расстоянии от поверхности характерен для микроаэрофилов.

Полученные результаты при изучении культуральных свойств отобранных штаммов микроорганизмов приведены в таблице 4.

Таблица 4. Характеристика колоний штаммов изучаемых микроорганизмов

№ штамма	Характеристика колоний
	размер	форма	характер контура края	рельеф	поверх ность	цвет	структура	консистенция
1	2	3	4	5	6	7	8	9
ГМЗ-1	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	выпуклый	гладкая, блестящая	белый	однородная	пастообразная
ГМЗ-2	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	плоский	гладкая, блестящая	бесцветный	однородная	пастообразная
ГМЗ-3	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	плоский	гладкая, блестящая	бесцветный	однородная	пастообразная
МБЕ-4	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	плоский	гладкая, блестящая	бесцветный	однородная	мазиобразная
МБЕ-5	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	выпуклый	гладкая, блестящая	бесцветный	зернистая	пастообразная
МБЕ-6	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	выпуклый	гладкая, блестящая	белый	однородная	пастообразная
МД-7	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	плоский	гладкая, блестящая	белый	однородная	пастообразная
МД-8	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	плоский	гладкая, блестящая	бесцветный	однородная	мазиобразная
МД-9	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	выпуклый	гладкая, блестящая	белый	однородная	пастообразная
МД-10	до 1мм (точечные)	круглая	ровный	выпуклый	гладкая, блестящая	белый	однородная	пастообразная

Данные таблицы 4 свидетельствуют о том, что размер колоний молочнокислых бактерий мелкий, точечный, форма круглая, характер контура края – ровный, рельеф – плоский у штаммов ГМЗ-2, ГМЗ-3, МБЕ-4, МД-7, МД-8; выпуклый – ГМЗ-1, МБЕ-5, МБЕ-6, МД-9, МД-10; поверхность – гладкая, блестящая; цвет – белый у штаммов - ГМЗ-1, МБЕ-6, МБЕ-7, МД-9, МД-10 и бесцветный у штаммов – ГМЗ-2, ГМЗ-3, МБЕ-4, МБЕ-5, МД-8; структура – однородная, за исключением штамма МБЕ-5– зернистая; консистенция пастообразная у всех штаммов, за исключением штаммов МБЕ-4 и МД-8 – мазеобразная.

При изучении характера роста лактобактерий, как на плотной, так и в жидких питательных средах мы наблюдали равномерный рост. Полученные сведения указывают, что изучаемые штаммы микроорганизмов – факультативные анаэробы.