Вариант 5
1. Показано, что -амилаза действует на крахмал и декстрины с высокими молекулярными массами примерно в 100 раз эффективнее, чем на меньшие декстрины, образующиеся в результате гидролиза. Швиммер (1950) исследовал ряд аспектов кинетики действия -амилазы, в том числе влияние продуктов гидролиза на скорость декстринизации ферментом растворимого крахмала. Полученные им результаты приведены в таблице:
Ингибитор |
Концентрация ингибитора, Мг/мл |
Концентрация субстрата, Мг/мл |
|||
11,52 |
5,76 |
2,88 |
1,44 |
||
Относительные скорости гидролиза |
|||||
Нет |
0,00 |
103 |
83 |
58 |
39 |
Мальтоза |
6,35 |
90 |
77 |
50 |
35 |
12,70 |
76 |
59 |
41 |
29 |
|
25,40 |
68 |
56 |
38 |
26 |
|
Предельный Декстрин |
6,68 |
92 |
75 |
51 |
31 |
13,35 |
82.5 |
56 |
38 |
22 |
|
26,70 |
71 |
47 |
29 |
16.5 |
|
Определить тип ингибирования и константу ингибирования всеми известными методами.
2. Фермент E расщепляет субстрат S с образованием продукта В. Соединения С и D ингибируют реакцию. Концентрации выражены в ммоль/л, начальные скорости реакций—в мкмоль/мг А, превращенного за 1 мин в 1 мл раствора. На основании этой информации сделайте заключение о типе ингибирования, вызываемом соединениями С и D и рассчитайте константы ингибирования для ингибиторов С и D.
[C], мМ |
Начальная скорость |
[D],мМ |
Начальная скорость |
||
[S]1=0,1мМ |
[S]2=0,2мМ |
[S]1=0,2 мМ |
[S]2=0,01 мМ |
||
0,26 |
19,4 |
33,7 |
0,26 |
24,6 |
15,5 |
5,3 |
14,0 |
25,5 |
5,3 |
20,0 |
14,3 |
8,7 |
11,7 |
21,9 |
8,7 |
17,8 |
12,9 |
9,9 |
11,1 |
20,8 |
9,9 |
17 |
12,1 |
11,0 |
10,6 |
20,0 |
11,0 |
16,4 |
11,8 |
Вариант 6
1. Выведите уравнение зависимости начальной скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата в присутствии неконкурентного ингибитора. Глутаматдегидрогеназа катализирует следующую реакцию:
За ходом реакции можно следить по увеличению поглощения при 340 нм. При изучении влияния салицилата натрия на приведенную выше реакцию были получены следующие данные:
Концентрация глутамата, мМ |
∆А340/мин |
|
В отсутствие ингибитора |
В присутствии 40 мМ салицилата |
|
1,5 |
0,20 |
0,08 |
2,0 |
0,24 |
0,10 |
3,0 |
0,29 |
0,12 |
4,0 |
0,33 |
0,13 |
8,0 |
0,4 |
0,16 |
16,0 |
0,45 |
0,18 |
Покажите графически, что ингибирование является конкурентным всеми известными методами. Определите Km для фермента и KI (константу диссоциации комплекса фермент-ингибитор).
2. Декарбоксилирование глиоксилата митохондриями ингибируется малонатом. При кинетическом исследовании были получены следующие результаты:
Концентрация глиоксилата, мМ |
Скорость выделения СО2 (условные единицы) |
||
в отсутствие малоната |
при концентрации малоната 1,26 мМ |
при концентрации малоната 1,96 мМ |
|
1,00 |
2,85 |
2,17 |
1,76 |
0,75 |
2,45 |
1,84 |
1,47 |
0,60 |
2,10 |
1,44 |
1,25 |
0,50 |
1,84 |
1,32 |
1,07 |
0,40 |
1,60 |
1,10 |
- |
0,33 |
1,40 |
- |
- |
0,25 |
1,11 |
- |
0,56 |
Определить тип ингибирования, и константу ингибирования всеми известными методами.