Вариант 23

1. Фермент сукцинатдегидрогеназа входит в состав группы ферментов, катализирующих реакции цикла Кребса. Он катализирует отщепление двух атомов водорода от сукцината. Сукцинаидегидрогеназа ингибируется малонатом и оксалоацетатом.

Определите тип ингибирования и константу диссоциации комплекса фермент-ингибитор в обоих случаях всеми известными методами, используя данные таблицы. Концентрация ингибитора [I]=0.002 М. Какой из ингибиторов в большей степени ингибирует сукцинатдегидрогеназу?

Концентрация субстрата, ммоль	Скорость образования продукта в отсутствие ингибитора, ммоль/мин	Скорость образования продукта в присутствие малоната, ммоль/мин	Скорость образования продукта в присутствие оксалоацетата, ммоль/мин
1	4.95	3.29	1.8
1.11	–	3.63	–
1.25	–	3.95	–
1.46	–	4.49	–
1.67	–	5.17	–
2.00	8.12	–	3.39
2.09	–	6.0	–
3.00	10.66	–	4.65
4.00	12.33	–	6.23
5.00	14.14	–	7.35
6.00	14.88	–	7.95
7.00	15.59	–	9.19
8.00	16.29	–	9.76
9.00	17.17	–	9.98
10.0	17.14	–	10.78

2. Изучалась кинетика ингибирования цитохром С–оксидазы. В качестве ингибитора использовались соли синильной кислоты. Скорости реакции окисления цитохрома-С при двух концентрациях субстрата приведены в таблице. Методом Диксона определить константу ингибирования и тип ингибирования.

Концентрация ингибитора, моль/л	Скорость реакции, усл. единицы
	S1	S2
0.2	5.05	4.26
0.4	3.35	2.88
0.6	2.52	2.08
0.8	1.97	1.67
1	1.64	1.39

Вариант 24

1. Измеряли кинетику ферментативной реакции в зависимости от концентрации субстрата в присутствии или в отсутствие ингибитора (I). Получены следующие данные:

[S]104, М	Скорость реакции, мкмоль/мин
	Без ингибитора	С ингибитором
0.3	10.37	4.05
0.5	14.5	6.4
1.0	22.5	11.3
3.0	33,8	22,6
9.0	40,5	33,8

а) Чему равны V_MAX и K_M в отсутствие ингибитора? В присутствии его?

б) К какому типу ингибирования относится данный случай?

в) Чему равна константа связывания ингибитора?

г) Если [S] = 110^-5 М и [I] = 210^-3 M, то какова доля молекул фермента, связавших субстрат? Связавших ингибитор?

д) Если [S] = 310^-5 М, то какова доля молекул фермента, связавших субстрат в присутствии 210^-3 M ингибитора и в отсутствие его? Сравните соотношение полученных величин с соотношением скоростей реакции при тех же условиях.

2. При изучении кинетики гидролиза пептидного субстрата, катализируемого карбоксипептидазой В, был обнаружен дезактивирующий эффект добавок ингибитора. Исходя из данных таблицы, рассчитать значения кинетических параметров реакции

Влияние ингибитора на кинетику гидролиза гиппурил-L-аргинина, катализируемого карбоксипептидазой В. Условия опыта: рН 8,0; 23С; трис-ацетатный буфер (0,025 М); [Е]₀=1,2110^-4 мг/мл

[ингибитор], М	[S]0104, M	v105, Mмин
0,1	10,0 1,5 1,0 0,67 0,50	2,15 1,333 1,111 0,889 0,72
0,04	10,0 1,5 1,0 0,67 0,50	3,0 1,47 1,29 1,053 0,877
0,025	10,0 1,5 1,0 0,67 0,50	3,37 2,247 1,821 1,449 1,115
0	10,0 1,5 1,0 0,67 0,50	5,263 3,135 2,639 2,105 1,739