Вариант 3

Концентрация субстрата, мМоль	Скорость реакции i> реакции
	без ингибитора	0,0001 М муцинат
1	32,0	3,5
2	43,6	6,5
3	50,4	9,0
4	53,0	11,8
5	56,5	14
10	62,1	24

1 -Глюкуронидаза имеет оптимум активности при рН 3,4 и ингибируется муциновой кислотой. При изучении зависимости скорости реакции от концентрации субстрата в присутствии и в отсутствие муциновой кислоты (0,0001 М) были получены приведенные ниже данные. Субстратом служил фенолфталеинглюкуронид; скорость реакции выражали в микрограммах фенолфталеина, освобождаемого за 60 мин при 37 °С. Определите тип ингибирования и константу диссоциации комплекса фермент—ингибитор всеми известными методами.

2. Имея достаточно чистый фермент (в растворе), какие кинетические исследования следует провести, чтобы охарактеризовать фермент?

Фермент Х расщепляет субстрат А с образованием продукта В. Соединения С и D ингибируют реакцию. В рассматриваемом ниже эксперименте под действием определенного (постоянного) количества Х происходит превращение А в В в присутствии С или D. Концентрации выражены в мкмоль/мл, начальные скорости реакций—в мкмолях А, превращенного за 1 мин в 1 мл раствора. На основании этой информации сделайте мотивированное заключение о типе ингибирования, вызываемом С и D и рассчитайте константы ингибирования для обоих ингибиторов.

[C], мкМ	Скорость		[D],мкМ	Скорость
	[A]=8мкМ	[A]=24мкМ		[A]=8мкМ	[A]=24мкМ
0	5,0	10,0	0	5,0	10,0
1,0	3,4	—	1,0	2,3	—
2,5	2,3	4,5	2,5	1,3	5,4
4,0	—	3,6	4,0	—	4,2
5,0	1,6	3,1	5,0	0,7	3,5
7,0	1,2	2,4	7,0	0,6	2,7

Вариант 4

1. Из приведенных данных для ферментативной реакции определите тип ингибирования. Вычислите величину K_m для фермента и величину константы диссоциации фермент-ингибиторго комплекса K_I и величину V_max всеми известными методами. Концентрация ингибитора [I]=5ммоль/л.

Концентрация субстрата, мМ	2,0	3,0	4,0	10,0	15,0
Скорость образования продукта в отсутствие ингибитора, мгмин-1	138	177	212	324	380
Скорость образования продукта в присутствие ингибитора, мгмин-1	88	121	149	257	313

2. Цитрат-оксалоацетат-лиаза (цитратаза или цитридесмолаза) - фермент из Aerobakter aerogenes, катализирует реакцию: цитрат → оксалоацетат + ацетат. В качестве кофактора необходим магний. За ходом реакции можно следить, определяя образование кетокислоты. В опытах по исследованию влияния ионов кальция были получены приведенные ниже данные; в течение опытов образование кетокислоты во времени происходило линейно. Состав реакционной смеси: фосфатный буфер (рН 7,0), фермент и цитрат; ионы магния и кальция - в указанных концентрациях.

1. Концентрация Mg²⁺ в реакционной смеси 8,35 мМ, продолжительность инкубации 100 с.

Количество СаСl2 (0,025 M), добавленное к 3 мл реакционной смеси, мл	0	0,1	0,2	0,3	0,4
Количество образовавшейся кетокислоты, мкмоль/л	1155	905	675	615	540

2. Концентрация Mg²⁺ в реакционной смеси 2,88 мМ, продолжительность инкубации 120 с.

Количество СаСl2 (0,025 M), добавленное к 3 мл реакционной смеси, мл	0	0,1	0,2	0,3	0,4
Количество образовавшейся кетокислоты, мкмоль/л	1015	670	480	370	316

3. Концентрация Mg²⁺ в реакционной смеси 0,96 мМ, продолжительность инкубации 120 с.

Количество СаСl2 (0,025 M), добавленное к 3 мл реакционной смеси, мл	0	0,1	0,2	0,3	0,4
Количество образовавшейся кетокислоты, мкмоль/л	596	320	176	136	120

4. Концентрация Mg²⁺ в реакционной смеси 0,32 М, продолжительность инкубации 210 с.

Количество СаСl2 (0,025 M), добавленное к 3 мл реакционной смеси, мл	0	0,1	0,2	0,3
Количество образовавшейся кетокислоты, мкмоль/л	520	250	125	105

Используя эти данные, определите а) константу Михаэлиса цитрат-оксалоацетат-лиазы для Mg²⁺, б) тип ингибирования, вызываемого Са²⁺, в) константу диссоциации комплекса фермент-ингибитор всеми известными методами.