ФГОУ ВПО «Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Кафедра микробиологии

РЕФЕРАТ НА ТЕМУ

«Возбудитель эрлихиоза собак»

Выполнила:

Руководитель:

Бурлакова Г.И.

Москва, 2010.

План.

1. Введение………………………………………..………………………………...3

2. Общая характеристика риккетсий и место,

занимаемое Ehrlichia canis среди риккетсий…………………………………...4

3. Основные способы окраски E. canis…………………………………………..12

4. Лабораторная диагностика возбудителя эрлихиоза собак …..……………...15

5. Заключение……………………………………………………………………..19

6. Список источников………………………………………………………….…20

Введение.

Эрлихиоз собак – это трансмиссивная лихорадочная болезнь, возбудитель которой относится к обширной группе микроорганизмов – риккетсиям. Риккетсии названы в честь американского микробиолога Х.Т. Риккетса, открывшего возбудителей пятнистой лихорадки Скалистых гор и погибшего от сыпного тифа. Известно 12 видов риккетсий, относящихся к трем родам: Cowdria, Neorickettsia и Ehrlichia.

Род Ehrlichia включает мелких облигатных внутриклеточных бактерий, размножающихся в паразитиформных вакуолях гранулоцитов, моноцитов и реже других клеток. Они передаются горизонтальным путем через вектор (клещей, реже трематод). Заражение эрлихиями происходит при их попадании в кровь восприимчивого организма.

Бактериальные клетки эрлихий ограничены двухслойной мембраной, причем наружная мембрана у разных видов различается своей толщиной и складчатостью. В оболочке эрлихий недостаточно пептидогликана, поэтому она непрочная.

Эрлихии собак первыми стали известны человечеству из числа бактерий рода Ehrlichia: в 1935 году Донатьен и Лестоквард описали E. canis, а спустя 5 лет Гордон – Anaplasma phagocytophila. Процесс обнаружения новых видов бактерий рода Ehrlichia продолжается и в настоящее время. Он затруднен тем, что эрлихии не способны расти на искусственных питательных средах, в куриных эмбрионах и некоторые виды даже в культуре клеток. Лишь с внедрением в ветеринарную практику ПЦР и других молекулярных методов диагностики появилась реальная возможность идентификации и дифференциации различных видов, образующих данный род.

Эрлихий и анаплазм классифицируют по типу инвазируемых ими клеток крови – гранулоцитов, лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. В соответствии с этим называют вызываемые ими болезни «гранулоцитарным эрлихиохом», «моноцитарным эрлихиозом», «циклической тромбоцитопенией» и т.д. Но надо отметить, что некоторые эрлихии помимо основного клеточного типа могут инвазировать еще и другие клетки.

Общая характеристика риккетсий и место, занимаемое Ehrlichia canis среди риккетсий.

Основоположником современного учения о риккетсиях и риккетсиозах является известный бразильский исследователь профессор da Rocha-Lima, который в 1916 году впервые применил название «риккетсия» в отношении дифференцированного им у платяных вшей возбудителя эпидемического сыпного тифа. Предпосылкой для построения современного учения о риккетсиозах послужило обнаружение американским исследователем Ricketts в 1909 году в крови больных пятнистой лихорадкой Скалистых гор и в клещах-переносчиках возбудителя этого заболевания в виде своеобразных мельчайших образований. На протяжении 50-ти лет со времени того первого открытия авторами разных стран было описано свыше 30 разновидностей патогенных риккетсий, вызывающих то или иное заболевание у людей и животных при участии переносчиков их кровососущих членистоногих. Затем период накопления фактов сменился периодом их объединения и упорядочения в определенной системе. Процесс систематизации риккетсий и риккетсиозов продолжается и в настоящее время. В нашей стране вопросами изучения и систематизации риккетсий занимались такие исследователи, как Мошковский Ш.Д., Солитерман П.Л., Здродовский П.Ф., Голиневич Е.М. и др.

Риккетсий относят к бактериям, с которыми они составляют сходство по структуре, составу, характеру обмена и способу размножения. Однако риккетсии занимают среди бактерий обособленное положение, которое определяется рядом признаков:

- риккетсии являются облигатными внутриклеточными паразитами, в отличие от бактерий они не способны к росту на обычных, неклеточных питательных средах;

• их биология связана с паразитизмом у членистоногих;

• вызываемые риккетсиями заболевания характеризуются особенностями клиники и эпидемиологии.

Здродовский и Голиневич в 1942-1944 годах изучали микроструктуру риккетсий на риккетсии Провачека при помощи окрашивания мазков крови по Романовскому. Это способ окраски позволил выявить 4 морфологических типа риккетсий и наличие в них дифференциально окрашенных хроматиновых зерен.

1. Кокковидные риккетсии (тип а) имеют вид очень мелких овоидов или эллипсоидов, диаметром около 0,5 мкм, часто образуют диплоформы в виде гантелей, изредка цепочки и округлые конгломераты. Могут быть однозернистыми или гомогенными. Характерны для риккетсиозов в стадии максимальной инфекции.

2. Палочковидные (короткие палочковидные, тип b) риккетсии, в виде нежных коротких палочек диаметром около 1-1,5 мкм, двузернистые образования с полюсно расположенными зернами, связанными бледноокрашенной протоплазмой. Характерны для риккетсиозов в стадии, предшествующей максимальной инфекции.

3. Бациллярные (длинные палочковидные, тип с) риккетсии, в виде удлиненных и обычно изогнутых палочек размером до 3-4 мкм, двузернистые или 3-4-зернистые образования с полюсно расположенными зернами. Характерны для начального периода риккетсиозов.

4. Нитевидные (мицеллярные, тип d) риккетсии, в виде длинных, нередко гигантских, причудливо изогнутых нитей, напоминающих крупные спириллы размером до 40 мкм и больше, многозернистые, с равномерным распределением зерен. Характерны для ранних фаз риккетсиозов, чаще встречаются в легких.

Исследователи делают вывод, что однозернистые овоиды типа а являются простейшей формой риккетсий, которые способны к воспроизведению себе подобных овоидов. В ряде случаев размножающиеся овоиды не разделяются, а дочерние особи остаются непрерывно связанными протоплазмой, в результате возникает формы b и с. Эти формы также способны к самостоятельному размножению с воспроизведением себе подобных биполярных форм. Форма d образуется в результате неразделения при размножении форм b и с. таким образом, весь плеоморфизм риккетсий морфологически можно определить как результат роста с разделением или без разделения их на образующиеся дочерние особи при способности этого паразита к воспроизводству многоклеточных мицеллярных образований.¹

В настоящее время выделяют порядок Rickettsiales, который включает 2 семейства – Rickettsiaceae и Anaplasmataceae. Нет однозначного мнения, к какому из этих семейств относится род Ehrlichia. Так, одни авторы относят этот род к семейству Anaplasmataceae², другие, ссылаясь на определитель Берджи, к Rickettsiaceae³.

Классификация. Согласно определителю Берджи, Ehrlichia canis, возбудитель эрлихиоза собак, классифицируется следующим образом:

отдел - Gracilicutes

секция 9 – риккетсии и хламидии

порядок - Rickettsiales

семейство - Rickettsiaceae

род - Ehrlichia

вид – E. canis

Морфология и цикл развития. E. canis – мелкая (1-3 мкм), грамотрицательная, кокковидная бактерия, паразитирующая в циркулирующих макрофагах и моноцитах собак. Вектором являются клещи, у которых E. canis паразитирует в гемоцитах, клетках среднего отдела кишечника и в слюнных железах. В этих клетках все стадии развития бактерии проходят в ограниченной мембраной паразитоформной вакуоли. Морфогенез возбудителя складывается из превращения элементарного тельца овальной или кокковидной формы (0,4 мкм) в инициальное тельце неопределенной формы размером 1-2 мкм с последующей трансформацией в морулу - колонию микроорганизмов, которую называют также тельцем-включением (2-4 мкм). Цикл завершается распадом морулы на элементарные тельца.

Снаружи бактерия покрыта наружной и внутренней мембранами, причем наружная мембрана у эрлихий, в отличие от других представителей семейства риккетсий, не имеет утолщенных участков. В клеточной оболочке эрлихий не обнаружено большого количества пептидогликанов.

Неподвижны, спор и капсул не образуют, ядерное вещество расположено диффузно в виде гранул, в цитоплазме находится нуклеоид, имеющий гранулярную структуру, обнаружены

Тинкториальные свойства. Способность окрашиваться анилиновыми красителями у E. canis та же, что и у других представителей порядка Rickettsiales. По Граму окрашиваются в красный цвет. Как кокковидные риккетсии, E. canis по Романовскому-Гимзе окрашивается в различные оттенки голубого цвета, причем внутри дифференцируются хроматиновые включения с обычным для хроматина красноватым оттенком. По Здродовскому риккетсии в мазках крови окрашиваются в рубиново-красный цвет, а клеточные элементы клетки-хозяина – в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвета.⁴

Культуральные свойства. Возбудитель E. canis не растет на искусственных питательных средах, но размножается в культурах клеток. Для его репродукции используют первичные культуры моноцитов и макрофагов собаки, эпителия человека и ряд других культур клеток. Возбудитель может быть также изолирован культивированием лейкоцитов, взятых от подозреваемых в заражении животных.

Поддерживающая среда для зараженных возбудителем культур клеток должна содержать не менее 10% сыворотки крови плода коровы и глютамин. Оптимальная температура инкубации инфицированных E. canis культур составляет 34-37⁰С.

Также для культивирования моноцитов собак используют среду Игла с добавлением 20% сыворотки крови собаки при температуре 37⁰С.⁵

Биохимические свойства. Как и другие эрлихии, E. canis является облигатным аэробом, неспособным ферментировать углеводы и нуждающимся во внешнем источнике АТФ. Максимальную метаболическую активность он проявляет в кислой среде.

Бактерия проявляет высокую чувствительность к доксициклину, окситетрациклину, миноциклину, хлорамфениколу, байтрилу и, в меньшей степени, к аминогликозидам. Налидиксовая кислота и эритромицин не оказывают выраженного бактерицидного или ингибирующего действия на E. canis.

Геном E. canis мало изучен, его размер равен приблизительно 1 млн. пар оснований. В нем установлено наличие 5 генов, кодирующих синтез наружного мембранного протеина.

Распространение инфекции зависит от ареала обитания ее вектора. Впервые эрлихиоз собак диагностировали в 1935 году в Алжире. В настоящее время эту инфекцию регистрируют в основном в тропических и субтропических районах: Израиле, Египте, Зимбабве, Кении, Сенегале, береге Слоновой Кости, Тунисе, ЮАР, Коста Рике, Португалии, Италии, Индии и Шри-Ланке, Таиланде, Вьетнаме, Китае, Японии, Венесуэлле, Бразилии, Пуэрто Рико, Чили, Канаде и в 50 штатах США, а также в Австралии. В связи с изменением ареала распространения вектора инфекции в последние годы ее стали выявлять в отдельных районах Швейцарии.⁶ При серологическом исследовании собак в Швейцарии с различными видами эрлихий было выявлено наличие антител у 17,7% животных (Egenvall, Bonnett, 2000).⁷

Работы по обнаружению эрлихиозной инфекции у животных на территории нашей страны только начинают проводиться. Так, в 2009 году проводилось исследование по выявлению эрлихиоза у собак в г. Ростове. В весенне-летний период 2009 года в ветеринарные клиники г. Ростова поступили 2384 собаки с острыми лихорадочными заболеваниями, возникшими после присасывания клещей. Из них у 47 животных методом ПЦР был установлен диагноз эрлихиоз. Для исключения других сезонных инфекционных и инвазионных заболеваний были проведены дополнительные исследования с соответствующими диагностикумами.⁸

Согласно информации московской ветеринарной клиники «Центр», в 2008 году в Москве впервые был поставлен диагноз «моноцитарный эрлихиоз» собаке, никогда не выезжавшей за пределы города.⁹ К апрелю 2009 года в данной клинике было обследовано на эрлихиоз 18 собак, из них у 4-х был обнаружен возбудитель E. canis. Для обнаружения возбудителя применяли метод определения антител к E. canis, используя иммунохроматографический тест «Хема-медика» (Франция).¹⁰

Источниками инфекции в дикой природе служат волки, шакалы, лисицы. Среди восприимчивых животных E. canis циркулирует посредством вектора, в качестве которых служат иксодовые клещи. Вектор заражается при сосании крови инфицированных животных, гемоцитами возбудитель переносится в слюнные железы, где активно размножается. В последующем при нападении на здоровую собаку клещ заражает ее через содержащую E. canis слюну. Возбудитель сохраняет свою жизнеспособность в организме клеща на протяжении 5 месяцев, что позволяет заразившимся осенью клещам перезимовывать и передавать инфекцию собакам уже ранней весной. Не исключена возможность заражения при переливании крови от больного животного здоровому, поэтому в эндемичных по эрлихиозу районах существует необходимость тщательного обследования на эту инфекцию всех животных-доноров с учетом того, что возможно ее хроническое протекание.

Возбудитель способен вызвать инфекцию у собак разных пород, возраста и пола. Предполагается наличие генетической предрасположенности к восприимчивости у собак некоторых пород: доберман, грейхаунд, немецкая овчарка, гончая – у них заболевание протекает значительно тяжелее и чаще завершается летальным исходом.

На тяжесть течения болезни могут оказывать влияние патогенность штамма возбудителя, его заражающая доза, иммунное состояние организма животного и наличие конкурентных переносимых клещами, а также вторичных инфекционных и инвазионных болезней.

В организме возбудитель, помимо клеток крови, обнаруживается в костном мозге и в селезенке, а также в других паренхиматозных органах – везде, куда происходят кровоизлияния.

Иммунитет нестерильный, возбудителя обнаруживают в крови более года. Антитела IgM и IgA к E. canis у собак выявляют на 7-й день, на 21-й день появляются иммуноглобулины класса IgG.¹¹

Основной мишенью для специфических антител служат антигены E. canis с мМас 21-160 кД, причем наиболее высок титр антител к протеинам агента с мМас 27-30 кД. Мажорный поверхностный протеин E. canis с мМас 30 кД вызывает интенсивный гуморальный иммунный ответ у собак и дает перекрестные реакции с наружными мембранными протеинами эрлихий других видов.

Штаммы возбудителя проявляют антигенную гетерогенность, иммунитет штаммоспецифичен: резистентность к повторному заражению гомологичным штаммом возбудителя выше, чем резистентность к гетерологичному штамму.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют кровь из вены и клещей, собранных с животных. В ряде случаев возникают нарушения функции воспроизводства, в том числе аборт, рождение нежизнеспособных щенков, продолжительная течка с обильным выделением крови. В таких случаях в лабораторию отправляют абортированный плод или выделения из влагалища.

У погибших животных отмечают геморрагии в подкожной клетчатке и большинстве внутренних органов, из которых более всего поражаются костный мозг (обычно при хроническом течении заболевания), селезенка, легкие, центральная нервная система (кровоизлияния в головной мозг), сердце, желудок, кишечный тракт и урогенитальные пути. Патологический материал для лабораторной диагностики отбирают именно из этих органов.

Биопрепараты. Специфического лечения и мер профилактики не разработано.