ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ ИМ. К.И. СКРЯБИНА»

Кафедра микробиологии и иммунологии

Возбудитель дизентерии свиней, его биологические свойства. Лабораторная диагностика и иммунитет при дизентерии.

Москва, 2004

Дизентерия свиней (Dysenteria suum) – инфекционная болезнь, характеризующаяся дифтерически-геморрагическим поносом и некротическим поражением толстого отдела кишечника. Восприимчивы свиньи всех пород и возрастов, но чаще болеет молодняк в возрасте 1-6 месяцев. Заражение происходит алиментарным путем.

Последовательность клинических признаков варьирует, что позволяет выделить сверхострое течение, при котором больные через 10-12 ч погибают, а также острое (геморрагический колит), подострое (диарея при нормальном аппетите) и хроническое – перемежающиеся поносы и запоры, истощение и появление на коже экзематозных поражений.

История открытия

Болезнь под названием «дизентерия свиней» впервые описали в 1921 г. C.P. Doyle и др. в США. В последующие годы ее регистрировали почти во всех странах мира. Однако в течение 50 лет, несмотря на интенсивные исследования, этиологию дизентерии свиней не удалось установить и болезнь описывали под различными названиями (вибриоз, балантидиоз, спирохетоз, геморрагический энтерит, дифтерический и поверхностный некротический колит, кровавый понос и др.). Окончательно этиология прояснилась лишь в 70-е гг., когда Харрисон и Глок (1972), а также Лончаревич (1973) выделили от больных животных спирохету Treponema hyodysenteriae.

Таксономической положение возбудителя

Семейство: Spirochaetaceae.

Род: Treponema.

Вид: T. hyodysenteriae.

Морфология

Treponema hyodysenteria – грамотрицательная спирохета. При микроскопии в темном поле трепонемы имеют форму подвижных нитей с ровными, правильно расположенными завитками и острыми концами. Размеры: (7-20)x(0,3-0,4) мкм. Морфологически различают три формы трепонем свиней: крупные – длиной до 20 мкм и 8-12 завитками, средние – 8-12 мкм с 6-8 завитками и малые – до 8 мкм с 3-4 завитками. Спор и капсул не образуют. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями.

Культуральные свойства

Возбудитель – анаэроб, оптимальная температура 36-38 C (при 25 и 30 C не растет), pH 7,4-7,6.

Культивируется на специальных средах. К ним относятся:

• Плотные: трипсин-агар с 5 % цитратной крови крупного рогатого скота; соевый агар с 5 % крови крупного рогатого скота;

• Жидкие: триптический соевый бульон с 10 % сыворотки крови плода коровы и спектиномицина (400 мг/л); МПБ (pH 7,4-7,6) с кусочками мелко нарезанной печени коровы, 50 % асцитической жидкости и 1:5000 аскорбиновой кислоты.

Посевы культивируют в анаэробных условиях 4-8 дней. На дне чашки с трипсин-агаром и 5 % крови через 72 часа развивается неправильной формы размером 3-4 мм зона B-гемолиза, в центре которой на поверхности агара редко встречаются мелкие прозрачные колонии или нежная пленка со следами эрозии.

Биохимические свойства

Патогенные для свиней культуры не ферментируют фруктозу, утилизируют пируват, при сбраживании глюкозы образуют водород, углекислоту, ацетат, бутират; нитрат не восстанавливают.

Факторы патогенности

Гемолитические свойства, могут продуцировать эндотоксины.

Патогенез

Попав в организм свиней алиментарным путем, Tr. hyodysenteria достигает толстого кишечника, где фиксируется на слизистой оболочке. Здесь часть бактерий погибает, из них освобождаются вазомоторные субстанции, сенсибилизирующие слизистую оболочку толстого кишечника и повышающие ее проницаемость. Это способствует проникновению возбудителя в подслизистую ткань. Размножение микробов идет одновременно с их разрушением и освобождением токсических продуктов, под действием которых происходят морфологические и физиологические нарушения функции кишечника, что приводит к развитию дисбактериоза. Некротические и воспалительные процессы часто усиливаются другими бактериями (F. necrophorum, Bacteroides fragilis и др.).

Устойчивость. Являясь строгим анаэробом, возбудитель вне организма имеет незначительную устойчивость. В фекальных массах при 0 C сохраняется до 48 дней, при 10 C – до 38, при 20 C – до 12 дней, в замороженном патматериале – не менее 2 месяцев. При возникновении анаэробных условий в навозной жиже возбудитель может не только длительно сохраняться, но и накапливаться.

Для дезинфекции применяют 4 %-ный (70^oС) раствор гидроокиси натрия и 2 %-ный раствор формальдегида. Возбудитель чувствителен к осарсолу, спирамицину и тилозину, а также мышьяковистым и нитроимидазольным препаратам.

Лабораторная диагностика дизентерии свиней основана на эпизоотологических данных и результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии (основной метод), а также выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и ферментативным свойствам.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют фекалии, для посмертной – слизистую оболочку большой ободочной кишки, которую соскабливают после удаления из кишечника содержимого и промывания водой. От трупов материал берут не позднее чем через 2 ч после гибели животного, материал должен быть исследован в течение 2-4 ч, а при хранении на холоде – 6-8 ч. Из материала готовят суспензию.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Поскольку культивирование возбудителя весьма трудоемко, микроскопическое исследование – это основной метод диагностики, доступный практическим лабораториям. Поступивший материал исследуют методом темнопольной, фазово-контрастной или обычной световой микроскопии.

При темнопольной микроскопии препарат «раздавленная капля» исследуют в водной иммерсии с объективом x40 и окулярами x7 или x10. Возбудитель в этом случае виден как спиралевидная клетка с 3-12 правильными витками размером (7-9)x(0,3-0,4) мкм, движущаяся змеевидно-поступательно. При температуре 22 C наблюдают изгибание и скользящее движение клетки, а при 37-42 C клетка движется поступательно. У большинства больных дизентерией свиней в препарате «раздавленная капля» в одном поле зрения обнаруживают 5-10 спирохет и более.

В окрашенных по Граму препаратах видны грамотрицательные извитые клетки со строением, типичным для спирохет. Клетки возбудителя хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе, фуксином Пфейффера. Разработан также прямой вариант реакции иммунофлюоресценции.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Для первичной изоляции используют селективные среды, например следующие.

Кровяной агар со спектомицином: к перевару Хоттингера добавляют 0,001 % резазурина (индикатор ОКВП), 0,5 % хлорида натрия, 0,25 % глюкозы, 1 % пептона, 2 % агара, кипятят, пропускают через среду азот или оксид углерода (IV) в течение 10-15 минут, устанавливают pH 7,0-7,2, вносят 0,05 % гидрохлорида цистеина. Среду автоклавируют при 110 C 30 минут, охлаждают до 40-45 C, пропуская при этом через среду стерильный обескислороженный газ, после чего вносят 10 % дефибринированной крови барана (или крупного рогатого скота) и 400 мкг/мл спектомицина. Среду разливают в атмосфере оксида углерода (IV).

Культивируют также в жидкой или полужидкой среде, содержащей сердечно-мозговую вытяжку и 10% эмбриональной телячьей или кроличьей сыворотки. На кровяном агаре через 48-96 ч инкубирования при 38 C вырастают плоские просвечивающие колонии диаметром 0,5-3 мм с зоной бета-гемолиза. В полужидком сывороточном агаре возбудитель растет в виде беловатого диффузного облачка ближе к поверхности среды.

После изучения морфологии и культуральных свойств у выделенных бактерий исследуют ферментативную активность.

Биопроба. Трепонемы хорошо размножаются в организме кролика и накапливаются в тестикулах. Фильтрат материала от больных свиней вводят кроликам внутрибрюшинно в дозе 5-7 мл. Через 7-10 дней берут пунктат и микроскопируют. При обнаружении трепонем кроликов убивают и подвергают исследованию (микроскопия, выделение культур).

Серологическая и аллергическая диагностики не применяются.

Иммунитет

У переболевших дизентерией свиней иммунитет не формируется. Обнаруживают лишь сывороточные антитела к Tr. hyodysenteria и некоторую степень резистентности к реинфекции.

Биопрепараты для специфической профилактики и терапии не разработаны.

Список источников:

• http://vetfac.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/micro/dizent.htm

• Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.А. Радчук, Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев и др.; Под ред. Н.А. Радчука. – М.: Агропромиздат, 1991.

• Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.: Колос, 2001.

• Эпизоотология и инфекционные болезни. / А.А. Конопаткин, Б.Т. Артемов, И.А. Бакулов и др. Под ред. А.А. Конопаткина. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: «Колос», 1993.