Работа 1. Подсчёт количества лейкоцитов

Для подсчета количества лейкоцитов кровь следует развести жидкостью, ко­торая устранила бы эритроциты. Разбавляющими жидкостями для под­счета являются гипотонические растворы, гемолизирующие эритроциты. Дистиллированная вода гемолизирует эритроциты. Добавляемая уксус­ная кислота просветляет протоплазму лейкоцитов, вследствие чего ядра хорошо видны. Добавление краски (генцианвиолета), окрашивающей ядра способствуют различию их формы.

Состав жидкости Тюрка для разбавления:

Ледяная уксусная кислота - 3см³, 1% водный раствор генцианвиолета - 3 см³, дистиллированная вода - 300см³.

Разбавление крови с помощью смесителя.

Для разбавления лейкоцитов применяется смеситель, разбавляю­щий не в 200 раз, а только в 20, поэтому в смесителях для лейкоци­тов имеются метки: на капилляре цифры 0.5 и 1, выше расширения цифра 11 (рис. 59).

. Набрать в смеситель кровь до метки 0.5 и жид­кость Тюрка до метки 11. Перевести смеситель в горизонтальное по­ложение, снять резиновую трубочку, задать оба конца пальцами и встряхивать 1.5 минуты.

Разбавление крови пробирочным методом.

Разводят исследуемую кровь в 20 раз, для этого в сухую пробирку наливают 0.4 мл уксусной кислоты. Набирают 0.02 мл кро­ви. Кончик пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей, сле­дя за тем, чтобы из пипетки кровь не вылилась.

В - смеси­тель для эритроцитов, Г - сме­ситель для лейкоцитов.

Рис. 59.Смесители.

Выдувают кровь из пипетки на дно пробирки, тщательно перемешивают (повторно набирая и выдувая смесь крови с уксусной кислотой). Маркируют пробирку и оставляют до мо­мента счета (допускается счет лейкоцитов не более чем через 2…4 ч после взя­тия крови).

Счисление лейкоцитов.

Заправить счетную камеру разбавленной жидкостью, как в предыдущем случае, при подсчете эритроцитов. Сосчитать лейкоциты на площади 100 больших квадратов, сумму умножить на 50, что будет соответствовать количеству лейкоцитов в 1 мм³ крови.

По международной системе измерения общую сумму лейкоцитов умножить на 10⁶, что будет соответствовать количеству лейкоцитов в одном литре крови. Пример: в 100 больших квадратах подсчитали 140 лейкоцитов, в 1 мм³ крови их будет 7000 (140 * 50), а в одном литре крови 7 * 10⁹ (СИ).

У здоровых лошадей, крупного и мелкого рогатого скота в крови содержится 6…10 Г/л лейкоцитов (Г = 10⁹; читают: гига на литр); у свиней лейкоцитов больше – 8…16, а у птиц – 20…40 Г/л.

Работа 2. Определение групп крови.

Эритроциты крови одного животного могут склеиваться сывороткой другого. Происходит это при наличии в эритроцитах веществ которые склеиваются (агглютиногенов) и склеивающих веществ сыворотки (агглютининов).

РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ - склеивания сывороткой крови одного индивидуума эритроцитов другого, наступает при смешивании одноименных агглютининов и агглютиногенов, что может возникнуть при переливании несовместимой крови. Различают два вида агглютиногенов – А и В, и два вида агглютининов - ,.

Взять чистое предметное отекло, поместить его на белую бумагу. Во избежание ошибки сделать на стекле пометки для сывороток группы I(O), II(А), III(В) и IV (АВ), а затем ниже подписи нанести разными пипетками по 1…2 капли сыворотки всех трех групп.

Для прокалывания пальца человека используют скарификатор. Затем перенести кровь отдель­ными чистыми палочками в каждую каплю стандартной сыворотки. Можно переносить кровь углом чистого предметного стекла, причем каждой кап­ли сыворотки можно касаться только одним углом. Количество исследуе­мой крови должно быть значительно меньше количества сыворотки.

Каждую каплю крови тщательно размешать с сывороткой, пока смесь не будет иметь равномерную розовую окраску. За реакцией агглютинации наблюда­ют в течение 5 минут, периодически покачивая предметное стекло.

Если капля смеси остается гомогенной, равномерно окрашенной, то значит, что агглютинации нет. При агглютинации капля состоит из комочков красного цвета, разделенных прозрачной смесью плазмы и стандартной сыворотки. Для исключения «холодовой агглютинации» к капле сыворотки с кровью приливают каплю физиологического раствора комнатной температуры.

Для определения групп крови отметить, в каких каплях стандартной сыворотки произошла или нет агглютинация. Сыворотки группы I(O) и IV(АВ) являются контролем.

Если агглютинация не произошла в сыворотках ни одной из групп, то исследуемая кровь будет I группы.

Если агглютинация произошла в сыворотках I() иIII() групп, то исследуемая кровь -II группы.

Если агглютинация произошла в сыворотках I() иII() групп, то исследуемая кровь –III группы.

Если агглютинация произошла в сыворотках I(),II() иIII() групп, то исследуемая кровь -IV группы. В сыворотке IV (0), группы агглютинации не происходит, так как там не содержатся агглютинины.

Около 45 % населения имеют 1 группу, 35 % - 2 группу, 15 % - 3 группу, 6 % - 4 группу. В эритроцитах 85 % людей содержится антиген – резус – фактор. Занесите таблицу (табл. 16.) в тетрадь.

Таблица 16 Схема определения групп крови.

Агглютиногены в эритроцитах групп крови	Агглютинины в плазме (сыворотке)
	I()	II()	III()	IV(0)
I (0)	-	-	-	-
II (А)	+	-	+	-
III (В)	+	+	-	-
IV (АВ)	+	+	+	-

Работа 3. Определение рН-фактора (по стандартно-универсальному реагенту анти-резус в пробирке без подогрева).

На дно химической сухой пробирки вносят одну каплю стандартного реагента анти-резус и одну каплю исследуемой крови.

Содержимое пробирки необходимо перемещать, слегка встряхивая, и медленно наклонять почти горизонтально, чтобы капля как можно больше растеклась по пробирке, при этом реакция будет белее выраженной. Поворачивать пробирку нужно не менее трёх минут, за тем в пробирку добавить 5 мл физиологического раствора и перемешать не взбалтывая. Провести оценку результатов. Наличие крупных хлопьев на фоне просветлённой жидкости указывает на рН(+). Если в пробирке гомогенное окрашивание жидкости и при встряхивании образуются перламутровые волны, то это рН(-).

ВОПРОСЫ;

1. Назовите функции лейкоцитов.

2. Расскажите методику подсчета лейкоцитов.

3. Дайте характеристика групп крови у человека.

4. Какие существуют группы крови у животных.

5. Как определить группу крови у человека.

ЗАНЯТИЕ 27. ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ОКРАСКА МАЗКОВ КРОВИ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Освоить методику приготовления мазков крови, приготовить и окрасить мазок крови.

Работа 1. Приготовление и окраска мазков крови.

Для получения правильных мазков (тонких, равномерных, доста­точно длинных) крови необходимо иметь чистые, хорошо обезжиренные предметные стекла. Обезжиривают стекла смесью спирта и эфира. Предметное стекло зажать между большим и средним пальцами левой руки. На стекло (со стороны среднего пальца) нанести каплю крови.

В правую руку взять шлифованное стекло, кра­ем коснуться капли крови (угол наклона 45…50°) и дать возможность распределиться крови между двумя стеклами. Затем легким скользя­щим движением растянуть каплю по поверхности предметного стекла.

Полученный, таким образом, мазок высушить на воздухе и написать на нем кличку или номер животного.

Существует много методов окраски мазков, мы воспользуемся окраской по Романовскому в модификации Филлипсона.

Реактивы: 1 часть готовой краски Романовского и 3 части этилового спирта. Компоненты тщательно смешивают. Краска сразу же готова к употреблению Дистиллированная вода нейтральной реакции. Приготовленный краситель наливают на нефикси­рованный мазок, покрывая его полностью, и через 1…2 минуты, не сли­вая красителя, прибавляют к нему по каплям дистиллированную воду. Например: 5 капель краски + 4 капли воды. Следят за тем, чтобы вода при соединении с краской не сливалась с мазка. Через 15 минут краситель смывают водой и мазок высушивают.

Хорошим мазком считается такой, в котором кровь располагает­ся на стекле в виде равномерной, не выходящей за край стекла, тон­кой полоски.

ВОПРОСЫ:

1. Как приготовить мазок крови.

2. Как осуществляется фиксация мазков и их окраска.

ЗАНЯТИЕ 28. ВЫВЕДЕНИЕ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ФОРМУЛЫ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Ознакомиться с формами гранулоцитов и агранулоцитов в крови сельскохозяйственных животных, вывести лейкоцитарную формулу у здорового животного.