Работа 3. Определение коэффициента ретракции кровяного сгустка.

Кровь после свертывания обладает способностью сжиматься, с высвобождением сыворотки.

Ретракция – стягивание, сжатие кровяного сгустка с выделением сыворотки. Эта реакция и скорость ее определяется наличием в крови тромбоцитов, фибриногена, кальция и других солей в плазме, а также объемом крови и температурой окружающей среды. Для выполнения этой работы у животного в про­бирку с делениями набирают кровь, которая у лошадей и собак через 1…2 часа после свертывания начинает выделять сыворотку. Через сутки сыворотку отсасывают, определяют ее объем, отношение кото­рого к взятой крови будет называться коэффициентом ретракции, он в среднем равен 0.3…0.4:

К_{ретракции} = V_{сыворотки} / V_{взятой крови}

1

2

3

4

1 - аморфные, неправильной формы, окрашенные комочки не распавшегося гемоглобина; 2 - бесцветные, прозрачные, в форме снежинок кристаллы уксусно-кислого натрия; 3 - бесцветные, прозрачные, кубической формы кристаллы поваренной соли; 4 - окрашенные, призматаческой формы кристаллы Тейхмана-Гемина.

Рис. 57. Получение кристаллов гемина.

ВОПРОСЫ:

1. На чем основан метод определения общего белка в сыворотке крови.

2. Каково количество общего белка в плазме крови животных.

3. Как можно получить кристаллы гемина и каково его применение на практи­ке.

Занятие 24. Подсчет количества эритроцитов.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Овладеть методикой подсчета эритроцитов и опре­делить их количество, изучить основные функций эритроцитов.

Работа 1. Подсчёт количества эритроцитов.

Устройство смесителя для красных телец.

Меланжер или смеситель для эритроцитов имеет форму капилляра, кото­рый в верхней трети имеет шарообразное расширение. Выше это расши­рение опять переходит в капилляр с меткой 101, на который одевает­ся резиновая трубочка. На длинном отрезке капилляра имеются метки 0.5 и 1. Кровь надо набрать до метки 0.5, а разбавляющую жидкость (физиологический раствор) до метки 101, кровь разбавляется в 200 раз (рис. 58).

А — смеситель, Б — счетная камера (вид сверху), В — вид камеры сбоку, Д — рас­пределение эритроцитов на сетке счетной камеры под микроскопом.

Рис. 58. Камера для подсчета форменных элементов крови и смеситель для разбавления крови.

Устройство счетной камеры.

Счетная камера Горяева состоит из толстого предметного стекла с желобками, образующими три поперечно расположенные плоские пло­щадки. Средняя из них разделена желобком на две части. По обе стороны от желобка на стекле нанесены сетки. Сетка состоит из 100 больших не деленных квадратов и 25 больших, деленных на 16 маленьких квадратов.

Взятие крови и разбавление.

Кровь для подсчета эритроцитов берется у животного путем прокола ушной вены. Место прокола дезинфицируется. Первая выступившая кап­ля насухо удаляется, а для набирания крови в смеситель надо обра­зовать большую каплю. Перед уколом заранее приготавливают 0.9% раствор поваренной соли в небольшом стаканчике. На смеситель надо надеть резиновую трубочку, насосать точно до метки 0.5, ваткой удалить кровь с поверхности капилляра, из стаканчика, держа смеситель вер­тикально, набрать физиологический раствор до метки 101. Набрать кровь в смеситель до метки 0.5, а затем насосать физиологический раствор до метки 101, кровь разба­вили в 200 раз. Снять трубку со смесителя, оба конца смесителя закрыть пальцами и смеситель стряхивать 2…3 минуты.

Пробирочный метод разбавления.

В маленькую пробирку набрать пипеткой и вылить 4 мл физиологического раствора. Туда же добавить 0.02 мл крови. Хоро­шо перемешать.

Счисление эритроцитов.

К камере Горяева притирают покровное стекло до появления радужных колец. Под малым увеличением микроскопа рассматривает сетку и на­ходят 5 больших квадратов, деленных на 16 маленьких квадратов по диагонали сетки. Из смесителя выпустить первые 2 капли на ватку, а третьей каплей заправить сетку, касаясь края притертого покровного стек­ла.

Подсчет эритроцитов производить при малом увеличении (окуляр 15х, объектив 20х), конденсор опустить. Найдя левый верхний угол сетки, установить в поле зрения большой квадрат, деленный на 16 маленьких, и начинать считать. Считают все эритроциты, которые находятся внутри квадрата и лежащие на верхнем и левом ребре дан­ного квадрата. Эритроциты, лежащие на других гранях этого квадра­та не считают, они войдут в счет при переходе на соседние квадра­ты. Так сосчитать все эритроциты, находящиеся в 16 маленьких квад­ратах, Затем передвинуть камеру, чтобы в поле зрения был следую­щий большой квадрат, и так все 5 квадратов, деленных на 16 малень­ких.

К полученной сумме эритроцитов приписать 4 нуля, что будет соответствовать количеству эритроцитов в 1 мм³ крови, в миллионах.

По международной системе измерения общую сумму эритроцитов умножить на 10¹⁰, что будет соответствовать количеству эритроцитов в 1 л крови. Пример: в 80 малых квадратах подсчитали 700 эритроцитов, в 1 мм³ крови их будет 7000000, а в 1 л крови - 7 * I0¹² (СИ).

В среднем у крупного рогатого скота в 1 л крови содержится 5...7 * 10¹² эритроцитов. Коэффициент 10¹² называется «тера», и общий вид записи следующий: 5...7 Т/л (читается: тера на литр). У свиней в крови содержится 5...8 Т/л эритроцитов. У коз до 14 Т/л. У коз большое количество эритроцитов обусловлено тем, что они очень маленького размера, поэтому объем всех эритроцитов у коз такой же, как у других животных.

Содержание эритроцитов в крови лошадей зависит от их породы и хозяйственного использования (у лошадей шаговых пород - 6...8 Т/л, у рысистых - 8...10, а у верховых - до 11 Т/л).

У высокопродуктивных молочных коров уровень эритроцитов соответствует верхней границе нормы, у низкопродуктивных - нижней. У новорожденных животных количество эритроцитов в крови всегда больше, чем у взрослых. Так, у телят 1...6-месячного возраста содержание эритроцитов доходит до 8...10 Т/л и стабилизируется на уровне, свойственном взрослым животным, к 5...6 годам. У сам­цов в крови содержится больше эритроцитов, чем у самок.

ВОПРОСЫ:

1. Как разбавить кровь для подсчета эритроцитов.

2. Как и в каких квадратах сетки Горяева ведут счисление эритроцитов.

3. Каково содержание эритроцитов в крови различных видов сельскохозяйственных животных.

4. Перечислите и объясните функции эритроцитов в крови животных.

ЗАНЯТИЕ 25. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛОБИНА

И ЭРИТРОЦИТОВ ЭРИТРОГЕМОМЕТРОМ. ВЫЧИСЛЕНИЕ

ЦВЕТНОГО ПОКАЗАТЕЛЯ И СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА

В ОДНОМ ЭРИТРОЦИТЕ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Овладеть методикой определения эритроцитов с по­мощью эритрогемометра, определить содержание гемоглобина и эритроцитов с помощью эритрогемометра, овладеть методикой вычисления цветного показателя и содержания гемоглобина в одном эритроците.

Работа 1. Определение количества гемоглобина

эритрогемометром.