2.Определение с помощью эритрогемометра.

Рабочий раствор для гемоглобина: 1 г углекислой соды, 1000 мл дистиллированной воды.

Разбавление крови для определения гемоглобина: пипеткой на 5 мл набирают рабочий раствор в количестве 5 мл, который наливают в чис­тую сухую пробирку и сюда же вводят 40 мм³ (0.04 мл.) исследуемой крови, взятой с соблюдением обычных правил.

Содержимое пробирки взболтать до равномерного перемешивания, перелить в кювет "Г" и поместить его в прибор на место установочного светофильтра "У". Вращением ручки счетного диска возвратить отклонившуюся стрелку амперметра в нулевое положение.

По шкале гемоглобина читают результат в грамм-процентах, затем переводят в СИ, умножая на 10 (г% * 10 = г/л).

ВОПРОСЫ:

1. Сколько мм в час СОЭ у КРС, сви­ней, лошадей и других видов животных.

2. Назовите факторы, определяющие СОЭ, методику ее определения.

3. Дайте понятие гемоглобина и его функциям.

4. Перечислите виды соединения гемоглобина с газами.

5. Назовите методы определения гемоглобина и объясните их принцип.

Занятие 23. Определение количества белка в сыворотке крови рефрактометрически. Получение кристаллогемина. Определение коэффициента ретракции кровяного сгустка

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Овладеть методикой определения общего белка в сыворотке крови, научиться определять количество общего белка в сыворотке крови раз­ных сельскохозяйственных животных, получить кристаллы гемина, определить коэффициент ретракции кровяного сгустка.

Работа 1. Определение количества белка в сыворотке крови рефрактометрически.

Одним из методов определения белка в сыворотке крови является рефрактометрический. Принцип рефрактометрии заключается в том, что луч света, проходя из одной среды в другую, меняет направление - преломляется.

Степень рефракции, коэффициент преломления раствора, обусловлена количеством, величиной, физическим состоянием раство­ренных в ней частиц, а также температурой внешней среды.

Определение коэффициента преломления в сыворотке крови производится в специ­альных приборах - рефрактометрах.

Перед началом исследования устанавливается нулевая точка прибора пря помощи дистиллированной воды. Для этого на полированную поверхность измерительной призмы наносят 2…3 кап­ли дистиллированной воды. Закрывают камеру - линию лупы шкалы устанавливают на деление 1.333. Границу светотени подводят ключом так, чтобы она точно проходила через точку пересечения визирных линий. Температура раствора должна быть 20°С.

После установления нулевой точки приподнимают верхнюю половину камеры, вытирают обе призмы фильтровальной бумагой досуха. Затем на поверхность призмы наносят 2…3 капли сыворотки крови и быстро закрывают камеру, наносить раствор нужно осторожно, чтобы не повредить полированную поверхность призмы. Зеркалом направляют свет в окно камеры, винтом устанавли­вают границу светотени на точке пересечения визирных линий.

Затем на шкале производят отсчет показания рефракции и по специальной таблице определяют содержание белка в сыворотке крови (табл. 15.).

Работа 2. Получение кристаллов гемина

На предметное стекло нанести высушенную кровь, прибавить кристаллик поваренной соли, растереть и смешать. Добавить 3 капли ледяной уксусной кислоты. Препарат накрыть покровным стеклом и осторожно нагреть до кипения, но не кипятить.

При этом образуется соляная кислота, которая разлагает гемоглобин. Про­дукт распада гемоглобина - гематин, соединяется с избытком кислоты, и получается соляно-кислый гематин или гемин. Часто кристаллы перекрещиваются друг сдругом. Под микроскопом можно видеть (рис.57).

У разных видов животных кристаллы гемина различны по форме, т.к. разная структура гемоглобина. Эту реакцию ставят для обнаружения следов крови, т.е. она доказывает, что это действительно кровь.

Таблица 15 Шкала для определения содержания общего белка

в сыворотке крови.

Степень рефракции	Содержание общего белка. %	Степень рефракции	Содержание общего белка. %	Степень рефракции	Содержание общего белка. %
1.3410	3.00	1.3450	5.25	1.3491	7.63
1.3411	3.03	1.3451	5.31	1.3492	7.69
1.34I2	3.06	1.3452	5.37	1.3493	7.74
1.3413	3.10	1.3453	5.42	1.3494	7.79
1.3414	3.15	1.3454	5.49	1.3495	7.87
1.3415	3.2	1.3455	5.54	1.3496	7.92
1.3416	3.27	1.3456	5.61	1.3497	7.98
1.3417	3.32	1.3457	5.66	1.3498	8.04
1.3418	3.39	1.3458	5.71	1.3499	8.09
1.3419	3.44	1.3459	5.76	1.3500	8.17
1.3420	3.52	1.3460	5.83	1.3501	8.21
1.3421	3.55	1.3461	5.89	1.3502	8.28
1.3422	3.62	1.3462	5.94	1.3503	8.33
1.3423	3.68	1.3463	6.01	1.3504	8.39
1.3424	3.74	1.3464	6.06	1.3505	8.45
1.3425	3.79	1.3465	6.12	1.3506	8.50
1.3426	3.85	1.3466	6.18	1.3507	8.56
1.3427	3.92	1.3467	6.24	1.3508	8.62
1.3428	3.97	1.3468	6.29	1.3509	8.69
1.3429	4.02	1.3469	6.36	1.3510	8.74
1.3430	4.09	1.3470	6.42	1.3511	8.80
1.3431	4.17	1.3471	6.48	1.3512	8.86
1.3432	4.20	1.3472	6.58	1.3513	8.91
1.3433	4.26	1.3473	6.61	1.3514	8.96
1.3434	4.32	1.3474	6.63	1.3515	9.03
1.3435	4.38	1.3476	6.77	1.3516	9.08
1.3436	4.43	1.3477	6.82	1.3517	9.14

Продолжение таблицы 15

1.3437	4.49	1.3478	6.88	1.3518	9.20
1.3438	4.51	1.3479	6.94	1.3519	9.27
1.3439	4.61	1.3480	7.00	1.3520	9.32
1.3440	4.68	1.3481	7.06	1.3521	9.38
1.3441	4.73	1.3482	7.11	1.3522	9.49
1.3442	4.78	1.3483	7.15	1.3523	9.50
1.3443	4.83	1.3484	7.22	1.3524	9.55
1.3444	4.90	1.3485	7.28	1.3525	9.62
1.3445	4.95	1.3486	7.33	1.3526	9.67
1.3446	5.00	1.3487	7.40	1.3527	9.73
1.3447	5.07	1.3488	7.46	1.3528	9.79
1.3448	5.12	1.3489	7.51	1.3529	9.84
1.3449	5.18	1.3490	7.59	1.3530	9.90