- •Занятие 20. Взятие крови у животных. Получение плазмы, сыворотки, фибрина и дефибринированной крови. Определение скорости свертывания крови при различных температурных условиях.
- •Работа 2. Получение плазмы, сыворотки, фибрина и дифибринированной крови.
- •Работа 2. Определения вязкости крови.
- •Работа 3. Гемолиз. Осмотическая резистентность (устойчивость эритроцитов).
- •Работа I. Скорость оседания эритроцитов
- •1.Определение по методу Сали.
- •2.Определение с помощью эритрогемометра.
- •Занятие 23. Определение количества белка в сыворотке крови рефрактометрически. Получение кристаллогемина. Определение коэффициента ретракции кровяного сгустка
- •Работа 1. Определение количества белка в сыворотке крови рефрактометрически.
- •Работа 2. Получение кристаллов гемина
- •Работа 3. Определение коэффициента ретракции кровяного сгустка.
- •Занятие 24. Подсчет количества эритроцитов.
- •См. Занятие 22 работа 2.2.
- •Работа 2. Определение количества эритроцитов эритрогемометром.
- •Работа 3. Вычисление цветного показателя и содержания гемоглобина в одном эритроците.
- •Занятие 26. Подсчет количества лейкоцитов. Определение групп крови.
- •Работа 1. Подсчёт количества лейкоцитов
- •Работа 1 . Выведение лейкоцитарной формулы.
- •Занятие 29. Коллоквиум по физиологии крови.
Работа 2. Получение плазмы, сыворотки, фибрина и дифибринированной крови.
КРОВЬ - жидкая соединительная ткань, которая состоит из жидкой части - плазмы и находящихся в ней во взвешенном состоянии, форменных элементов - эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.
Получение плазмы.
Для получения плазмы кровь необходимо предохранить от свёртывания добавлением антикоагуляторов – веществ, препятствующих свертыванию крови (гепарин, лимонно-кислый натрий).
СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ КРОВЬ - кровь, предохраненная от свертывания. В пробирку или стеклянный цилиндр с антикоагулятором выпустить по 10 мл крови из яремной вены животного. Закрыв сосуд пальцем или пробкой, несколько раз перевернуть его для перемешивания крови.
1 способ. Цилиндр поставить в термостат кровь лошади - на 1 час, крупного рогатого скота - на 24…48 часов.
2 способ. Пробирку с взятой кровью поставить в центрифугу. Центрифугировать при 3000 об/мин в течение 20…30 минут.
Убедиться, что при стоянии или центрифугировании кровь расслаивается на плазму и форменные элементы (рис. 50).
1 – плазма; 2 – слой лейкоцитов; 3 - слой эритроцитов.
Рис. 50. Состав стабилизированной крови.
Получение сыворотки.
Если выпущенную в сосуд кровь не стабилизировать антикоагулятором, происходит ее свертывание и образуется сгусток, содержащий форменные элементы и выпавший в осадок белок фибриноген.
Сгусток постепенно уплотняется, стягивается и от него отделяется прозрачная желтоватого цвета жидкость – сыворотка (происходит процесс ретракции) (рис. 51).
1 - сыворотка крови; 2- сгусток крови.
Рис. 51. Ретракция кровяного сгустка.
СЫВОРОТКА - представляет собой плазму, лишенную белка фибриногена и других веществ, участвующих в свертывании крови.
1способ. В пробирку или цилиндр без антикоагулятора выпустить 10 мл крови животного и поставить ее в термостат при 38°С на несколько часов. Образование кровяного сгустка и частичная ретракция, т.е. его стягивание и самопроизвольное отделение сыворотки наступает у лошадей через 1…3часа, а полное отделение сгустка через 12…18 часов. У крупного рогатого скота ретракция протекает значительно медленнее. Из пробирки, с полной ретракцией сгустка, слить или отсосать сыворотку и сравнить ее с плазмой. Сыворотка имеет желтовато-соломенный цвет и более прозрачна, чем плазма.
2 способ получения сыворотки. При выделении из крови фибриногена механическим путем, получают кровь, которая содержит все составные части, кроме белка фибриногена - ДЕФИБРИНИРОВАННУЮ КРОВЬ, т. е. эта кровь теряет способность к свертыванию. Состав дефибринированной крови (рис.52).
1 - сыворотка; 2- слой лейкоцитов; 3- слой эритроцитов.
Рис. 52. Состав дефибринированной крови.
Получение дефибринированной крови.
Дефибринированную кровь разлить в центрифужные пробирки и центрифугировать при 3000 об/мин в течение 10…15 минут. Форменные элементы оседают на дно. Сверху окажется сыворотка. Иногда она приобретает красноватый оттенок, вследствие разрушений эритроцитов из дефибринированной крови.
Получение фибрина.
Положить в стеклянную колбочку 10…12 стеклянных бусинок и выпустить в нее из сосуда животного 20…30 мл крови. Взбалтывать кровь вращательными движениями в течение 10…15 минут. Фибриноген, выпадающий в осадок в виде волокнистых нитей фибрина, оседает на шариках. Затем профильтровать содержимое колбы через 2 слоя марли. Фильтрат представляет собой дефибринированную кровь,а осевшие на шариках "метелки" - нити фибрина - отмыть от форменных элементов водой. Фибрин имеет вид белого волокнистого вещества.
Работа 3. Определение скорости свёртывания крови
при разных температурных условиях.
СВЕРТЫВАНИЕ крови - сложный биологический процесс, протекающий при участии солей кальция, витамина К, ферментов тромбопластина, промбина и других компонентов плазмы (рис. 53).
Нанести по одной капле крови, вытекающей из надрезанного уха животного, на три предметных стекла. Одно стекло поместить в термостат при +40оС, другое стекло положить на стол (при комнатной температуре), третье - на снег.
Через каждую минуту наклонять стекла с кровью и повторять до тех пор, пока кровь не свернется. Определить скорость свертывания крови у различных животных.
Данные записать в тетрадь, проанализировать.
ВОПРОСЫ:
1. Где, у животных, берут большое и малое количество крови для анализа.
2. Что такое плазма и как ее получить.
3. Дайте понятие сыворотке, какие есть способы ее получения.
4. Что такое дефибринированная кровь и каков ее состав.
5. В чем заключается механизм свертывания крови, и, какие факторы влияют на него.
Рис. 53. Классическая схема свертывания крови Шмидта - Моравица.
ЗАНЯТИЕ 21. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМНОГО СООТНОШЕНИЯ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ И ПЛАЗМЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЯЗКОСТИ КРОВИ. ГЕМОЛИЗ. ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ
(УСТОЙЧИВОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ).
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Определить соотношение форменных элементов и плазмы в крови животных, вязкость крови, проследить за явлением гемолиза эритроцитов под влиянием повреждающих факторов с разным механизмом действия, определить осмотическую устойчивость эритроцитов разных видов животных.
Работа 1. Определение объёмного соотношения форменных
элементов и плазмы (показатель гематокрита).
Форменные элементы – 35…45%., плазма составляет 60…65% общего объема крови. Это соотношение изменяется в зависимости от вида, возраста, породы животных, функционального состояния, а также при некоторых заболеваниях.
ПОКАЗАТЕЛЬ ГЕМАТОКРИТА – показывает общий обьем форменных элементов в 100 объемах крови. Показатель гематокрита используется при вычислении ряда других важных характеристик крови (среднего объема эритроцитов, среднеклеточной концентрации гемоглобина и пр.).
Набрать через узкий конец капиллярной трубочки гематокрита стабилизированную кровь животного. Трубки затянуть резинками и поставить в центрифугу. Центрифугировать 8…10 мин при 3000 об/мин. Извлечь капилляры. Форменные элементы располагаются в одной стороне капилляра, а плазма в другой. По показателям капилляров взять среднее из двух, определить относительный объем форменных элементов и плазмы, выразив их в процентах.