6. Патоморфология
Патоморфологическая картина при гриппе птицы также вариабельна, как и симптоматика, которой она во многом соответствует. При вскрытии павшей птицы отмечают отек мышц, подкожных тканей, области головы и шеи, скопление слизистых выделений в просвете трахеи, носовой и ротовой полостях, конъюнктивит, синусит, аэросаккулит, ларинготрахеит, интерстициальную пневмонию, энтерит, нефрит, кровоизлияния (на серозных покровах, слизистой оболочке преджелудков и кишечника, в нутряном жире, яичниках, лимфоидных тканях, тканях грудины), скопление кровянистой жидкости в брюшной полости.
При гистологическом исследовании в таких случаях чаще всего выявляют некротические изменения печени, селезенки, головного мозга, поджелудочной железы, лимфоидных тканей кишечника, бронхит, дегенерацию мышечного слоя клоаки, катаральное поражение пищеварительного тракта.
Иммуногистохимическими методами обнаруживают антиген ВГП в печени, селезенке, сердце, кишечнике, преджелудках, яйцепроводах, головном мозге, почках, поджелудочной железе, легких и трахее. Вирусный антиген локализуется преимущественно в эндотелии капилляров и паренхиматозных клетках.
7. Диагностика
Неспецифичность и вариабельность симптоматики и патоморфологических изменений у птицы при гриппе выдвигают на первый план при постановке диагноза вирусологическое исследование (это совсем не означает, что следует пренебрегать результатами клинического и патоморфологического исследований, а также данными эпизоотологического анализа).
При жизни от птицы для вирусологического исследования берут пробы фекалий, смывы со слизистых оболочек (клоаки, конъюнктивы, носа), выделения из глаз и носа, а от трупов — пораженные органы (трахею, легкие, кишечник, селезенку, почки, печень, головной мозг и сердце). Патологическим материалом заражают 8…11-дневных КЭ (по 5 на 1 пробу) в аллантоисную или амниотическую полости. Фильтрование и осветление центрифугированием суспензии патологического материала снижают риск гибели КЭ от посторонних причин и появление в них неспецифических гемагглютининов. Для ускорения экспертизы уже через сутки после инокуляции патологического материала можно собирать пробы аллантоисной жидкости для тестирования в реакции гемагглютинации. Однако более надежные результаты получают при исследовании погибших КЭ (различные штаммы ВГП вызывают такой эффект в течение 1…7 дней, что и определяет продолжительность периода инкубации КЭ). В конце этого срока аллантоисную жидкость повторно исследуют в РГА, а суспензию хорионаллантоисных оболочек после 3-кратного цикла замораживания-размораживания, осветления центрифугированием и обработки формалином или пропиолактоном — в РДП. Эти реакции, проводимые с референтными антисыворотками к разным подтипам ВГП, служат надежными средствами идентификации возбудителя. В последние годы с той же целью стали применять иммуноферментный анализ.
ВОЗ рекомендует пользоваться для экспресс-диагностики гриппа птиц перевиваемыми линиями клеток HeP-2, RDи MDCK[1]. С помощью иммуноферментного анализа и реакции иммунофлюоресценции, а также ПЦР удается диагностировать инфекцию ВГП в течение 1..2 суток после внесения патологического материала в культуры клеток. В более поздние сроки для этого применяют РГА.
Иммуноферментный анализ и ПЦР все шире применяют для тестирования патологического материала, взятого от птицы, подозреваемой в заражении ВГП.
После изоляции и идентификации ВГП важно определить является ли данный штамм слабо- или высоковирулентным. Традиционно с этой целью 4…8-недельным цыплятам внутривенно инокулируют аллантоисную жидкость зараженных агентом КЭ. За птицами ведут наблюдение в течение 10 дней. Если из 8 зараженных цыплят погибло не менее 6, то штамм ВГП считают высокопатогенным. Другим критерием этого служит индекс патогенности, который должен быть не менее 1,2 (этот показатель рассчитывают на основании оценки клинического состояния и случаев гибели цыплят, использованных для постановки биопробы).
Определение аминокислотного состава одного из участков молекулы гемагглютинина открывает еще большие возможности для оценки патогенности выделенных изолятов ВГП.
Следует отметить, что 2 подтипа ВПГ (H10N4 и H10N5), которые не вызывают заболевания или гибели птицы после интраназального заражения и не имеют характерной для высокопатогеннных подтипов ВГП аминокислотной последовательности гемагглютинина, после внутривенного введения убивают практически всех цыплят и имеют индекс патогенности выше 1,2. Причины данного феномена пока не известны.
При клиническом обследовании заболевшей птицы, вскрытии трупов, взятии патологического материала и проведении лабораторных исследований следует придерживаться мер безопасности, чтобы не заразиться ВГП.