Ульяновская Государственная сельскохозяйственная академия

Управление ветеринарии администрации области

ФГУ ЦГСЭН в Ульяновской области

ВИРУС ГРИППА

( ГРИПП КУР и ГРИПП ЧЕЛОВЕКА)

справочное пособие для врачей

Ульяновск – 2006г

Подготовка к осуществлена:

1. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия.

2. Управление ветеринарии администрации Ульяновской области.

3. ФГУ ЦГСЭН в Ульяновской области.

Составители:

зав. кафедрой микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ветеринарно-санитарной экспертизы УГСХА, д б н, профессор Васильев Д.А., доцент кафедры, к в н Козин А.И.

начальник управления ветеринарии администрации Ульяновской области Сафронычев А.В.,

главный государственный санитарный врач по Ульяновской области к б н Меркулов А.В.,

зав. отделом ООИ , к м н Нафеев А.А.,

Таксономическое положение вируса гриппа по классификации и номенклатуре вирусов позвоночных приводимых в последнем Седьмом Докладе Международного комитета по таксономии вирусов (2000).

Классификация вирусов семейства Orthomyxoviridae.

Таксономическая структура семейства.

Семейство: Orthomyxoviridae.

Род: Influenzavirus A

Influenzavirus В

Influenzavirus C

Thogotovirus.

Характеристика вириона семейства.

Морфология.

Вирион сферический (диаметр 80-120 нм) или плеоморфный, встречаются также нитевидные (филаментозные) формы до нескольких мкм в длину. Имеется липопротеидная оболочка, в состав которой входят 1-3 вирусных гликопротеина и 1-2 негликозилированных протеина. На поверхности имеются спайкоподобные выступы (отростки) длиной 10-14 нм и диаметром 4-6 нм. Нуклеокапсид сегментирован, имеет спиральную сииметрию, длина 150-130 нм, с петлями на одном конце.

Mr (вирион) 250 x 10⁶; плавучая плотность в сахарозе 1,19 г/см³; S_20w 700-800S (для нефиламентозных частиц).

Геном.

РНК односпиральная, линейная, с негативной полярностью, сегментированная. Размер генома 10,0-14,6 kb. Представители разных родов имеют в своем составе разное количество сегментов: 8 cегментов – Influenza A virus (FLUAV) и Influenza В virus (FLUBV), 7 сегментов – Influenza C virus (FLUCV) и Dhori virus (DHOV), 6 сегментов – Thogoto virus (THOV). Длина сегментов 900-2350 нуклеотидов. Сегменты имеют консервативные и частично комплементарные 5’- и 3’-концевые сиквенсы с промоторной активностью. Могут встречаться дефектные вирусные РНК (более короткие, иногда химерные).

Другие вирусные компоненты.

Структурными протеинами, встречающимися у вирусов всех родов, являются: три полимеразных протеина (например, РА, РВ₁, РВ₂ – у FLUAV); нуклеокапсидный протеин (NP), обладающей групповой специфичностью и ассоциированный с каждым сегментом геномной РНК в форме рибонуклеопротеина; гемагглютинин (НА, HEF или GP) – интегративный мембранный гликопротеин 1-го типа, участвующий в прикреплении вируса, слиянии оболочек и в нейтрализации; негликозилированный мембранный матриксный протеин (М₁ или М). НА FLUAV ацилирован и имеет несколько N-связанных гликанов. Кроме гемагглютинирующей активности и способности к слиянию, HEF FLUCV обладает эстеразной активностью, функционирующий как рецептор-разрушающий энзим. GP THOV отличается от протеинов инфлюэнцавирусов, но проявляет гомологию по сиквенсу с бакуловирусным поверхностным гликопротеином. В зависимости от рода вирусы могут иметь интегративный оболочечный гликопротеин 2-го типа (нейраминидаза, NA) и интегративный мембранный протеин 3-го типа (М₂, NB или CM₂), который может быть гликозилированным и функционировать как ионный тоннель. Кроме того, вирусами могут быть кодированы 2 неструктурных протеина (NS₁ и NS₂). Вирусные энзимы, также различающиеся у представителей разных родов, представлены транскриптазой (РВ₁ у инфлюенцавирусов А, В, С и тоготовирусов), эндонуклеазой (РВ₂ у вирусов гриппа А, В, С) и рецептор-разрушающим энзимом (нейраминидаза у FLUAV и FLUBV или 9-О-ацетилнейраминилэстераза в случае протеина HEF FLUCV).

Липиды оболочки вириона, имеющие происхождение от клеточной плазматической мембраны составляют 18-37% веса частицы.

Углеводы в составе гликопротеинов, гликолипидов и мукополисахаридов составляют около 5% веса частицы.

Организация генома и репликация.

Геном кодирует до 10 протеинов (Mr 14-96 х 10³). Пять крупных геномных сегментов кодируют по одному протеину, тогда как более мелкие сегменты часто кодируют дополнительные продукты за счет сплайсинга или бицистронных мРНК. Обычно 3 самых крупных сегмента геномной РНК кодируют протеины Р, четвертый и пятый сегменты кодируют протеины НА (HEF или GP) и NP. В зависимости от вируса мелкие сегменты кодируют протеин NA (FLUAV NA и FLUBV NA, NB: 6-й сегмент), мембранные протеины (FLUAV М₁ и М₂, FLUВV М₁ и ВМ₂: 7-й сегмент; FLUСV М₁ и СМ₂, и DHOV М₁: 6-й сегмент) и протеины NS (FLUAV и FLUВV NS₁ и NS₂: 8-й сегмент; FLUСV NS₁ и NS₂: 7-й сегмент; предполагаемый 7-й сегмент DHOV – неизвестно). Реассортация генов может происходить при смешанной инфекции, обусловленной вирусами одного рода.

Проникновение вируса в клетку происходит при участии НА (HEF, GP) посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза. Рецепторной детерминантой для инфлюэнцавирусов является сиаловая кислота, связанная с гликопротеинами или гликолипидами. В эндосомах происходит слияние вирусной и клеточной мембран. У инфлюэнцавирусов слияние (и инфекционность) зависит от расщепления вирусного НА (FLUAV и FLUВV: НА₁ и НА₂; FLUСV: HEF₁ и HEF₂). Активность данного протеина зависит от посттрансляционного разрезания клеточными протеазами. Помимо других факторов возможность разрезания обусловлена количеством основных аминокислот по сайту разрезания. Они образуют гидрофобные аминоконцевые молекулы НА₂. У тоготовирусов нет необходимости в разрезании GP. Интегративные мембранные протеины мигрируют через аппарат Гольджи к определенным участкам плазматической мембраны. Новые вирионы образуются при почковании, которому предшествует ассоциация матриксных протеинов и вирусных нуклеокапсидов с участками плазматической мембраны, содержащей вирусные оболочечные протеины. Почкование происходит с поверхности апикальной части поляризованных клеток.

Вирусные нуклеокапсиды транспортируются в ядро клетки, где вирионный транскриптазный комплекс синтезирует мРНК. У инфлюэнцавирусов синтез мРНК праймируется кэпированными фрагментами мРНК, длиной 10-13 нуклеотидов, образующимися из клеточных гетерогенных ядерных РНК за счет вирусной эндонуклеазной активности протеина РВ₂. Тоготовирусы отличаются тем, что содержат кэпированные вирусные мРНК без последовательностей клетки по 5’-концу. Вирусспецифические мРНК полиаденилированы по 3’-концу и не имеют последовательности, соответствующей нуклеотидам (примерно 16) 5’-конца сегмента вирусной РНК. Отмечается сплайсинг некоторых мРНК, приводящий к образованию альтернативного продукта. Синтез протеинов происходит в цитоплазме. Однако протеины NP, M и NS₁ накапливаются в ядре клетки во время первых часов репликации, а затем мигрируют в цитоплазму. Протеин NS₁ может образовывать цитоплазматические включения.

Антигенные свойства.

Наиболее хорошо изучены антигены протеинов NP, M₁, HA и NA FLUAV FLUBV. Протеины NP и M₁ инфлюэнцавирусов родоспецифичны. Значительные вариации встречаются у антигенов HA и NA FLUAV, меньше у FLUBV и FLUCV. THOV и DHOV не проявляют перекрестной активности в стандартных серологических реакциях, тогда как DHOV Batken virus – проявляет. Антитела к НА, HEF и GP обладают нейтрализующей активностью.

Инфлюэнцавирусы агглютинируют эритроциты многих видов животных. Серотипспецифические антитела могут блокировать агглютинацию. NA или HEF прикрепившихся вирионов гриппа могут разрушать клеточные рецепторы эритроцитов, содержащие сиаловые кислоты, что приводит к элюции вируса. Гемолизис эритроцитов может быть обусловлен НA при кислом значении рН. Тоготовирусы проявляют лишь ограниченную гемагглютинацию с эритроцитами определенных видов животных.

Биологические особенности.

Определенные вирусы гриппа А инфицируют в естествнных условиях человека и могут вызывать респираторные болезни. Некоторые вирусы гриппа А инфицируют другие виды млекопитающих и птиц. Возможна межвидовая передача. Штаммы вируса гриппа В инфицируют только человека и часто вызывают эпидемии. Вирусы гриппа С вызывают более ограниченные вспышки болезни среди людей, и инфицируют свиней. Вирусы гриппа А и В накапливаются в амниотической полости куриных эмбрионов, а после адаптации они также накапливаются в аллантоисной полости. Вирусы гриппа С репродуцируются только в амниотической полости. Репродукция FLUAV и FLUBV поддерживается в первичных культурах клеток почек обезьян, человека, КРС, свиней и цыплят. Спектр восприимчивых перевиваемых клеточных линий может быть расширен путем добавления трипсина в ростовую среду. Клинические образцы от пациентов, инфицированных вирусом гриппа, часто содержат субпопуляции с минорными различиями по сиквенсам протеина НА. Эти популяции могут различаться по рецепторной специфичности или предрасположенности к репродукции в клеточных линиях разного происхождения.

Естественный путь распространения вирусов гриппа – аэрозольный или водный (для уток). Вирусы Тhogoto и Dhori распространяются клещами и способны к репродукции как в клещах, так и различных органах и тканях млекопитающих, так же как в культурах клеток млекопитающих. У некоторых видов животных, используемых в лабораторных исследованиях, инфекция может иметь фатальный исход (например, инфекция, вызванная THOV у хомяков). В отличие вирусов гриппа, эти вирусы не вызывают респираторных болезней и не репродуцируются в куриных эмбрионах. Все известные ортомиксовирусы имеют в своем репродуктивном цикле МХ₁-чувствительный этап.

Род: Influenzavirus A.

Типовой вид: Influenza A virus (FLUAV) (вирус гриппа А).

Характерные особенности.

Все представители данного семейства имеют 8 сегментов генома. Гемагглютинин и нейраминидаза (рецептор-разрушающий энзим) являются разными гликопротеинами. Консервативными последовательностями вируса гриппа А являются 5’-AGUAGAAACAAGG… и 3’-UCG(U/G)UUUCGUCC… Профиль электрофоретической миграции сегментов РНК варьирует в зависимости от штамма и условий электрофореза.

На основе нуклеотидного сиквенса генов вируса гриппа А определены следующие значения молекулярных масс протеинов РВ₁, РВ₂ и РА, кодируемых сегментами РНК 1-3: Mr  87х10³ (наблюдаемая:  96х10³), Mr  84х10³ (наблюдаемая:  87х10³), Mr  83х10³ (наблюдаемая:  85х10³), соответственно. Протеин НА, кодируемый сегментом РНК 4 (негликозилированный) имеет Mr  63х10³ (гликозилированный: НА₁  48х10³, НА₂  29х10³). Протеин NP, кодируемый сегментом РНК 5, имеет Mr  56х10³ (наблюдаемая:  50-60 х 10³). Протеин NА, кодируемый сегментом РНК 6, имеет Mr  50х10³ (наблюдаемая:  48-63 х 10³). Протеины М₁ и М₂, кодируемые сегментом РНК 7, имеют Mr  28х10³ (наблюдаемая:  25х10³) и Mr  11х10³ (наблюдаемая:  15х10³), соответственно. Протеины NS₁ и NS₂, кодируемые сегментом РНК 8, имеют Mr  27х10³ (наблюдаемая:  25х10³) и Mr  14х10³ (наблюдаемая:  12х10³), соответственно.

Антигенные свойства.

Антигенные вариации антигенов НА и NA вирусов гриппа А изучены детально. Идентифицировано 15 субтипов НА и 9 субтипов NA, с минимальной перекрестной активностью (между субтипами) в серологических реакциях. Внутри субтипов также могут быть вариации. Традиционно, вновь выделенные изоляты обозначаются на основе следующих критериев: серотип/хозяин/место выделения/обозначение штамма/год выделения и (НА [Н] и NA [N] субтип), например, A/tern/South Africa/1/61(H5N3) (A/крачка/Южная Африка/1/61(H5N3)). Постоянный эволюционный процесс циркулирующих среди людей штаммов, приводит к появлению новых и, вероятно, к исчезновению старых штаммов. Антитела к НА обладают нейтрализующей активностью. Антитела к NA, присутствующие на протяжении многих циклов репродукции, ингибируют высвобождение вируса и снижают его накопление. Антитела к аминному концу М₂ снижают накопление вируса в культуре клеток.

Биологические особенности.

В 20-м веке эпидемии респираторных болезней среди людей были вызваны вирусами гриппа А с антигенными композициями H1N1, H2N2, H3N2. Ограниченные вспышки респираторных болезней среди людей, вызванные антигенно новыми вирусами, наблюдались в 1976 в Fort Dix (New Jersey), когда классический вирус свиней H1N1 вызвал инфекцию у военнослужащих; в 1997 в Гонконге, когда вирусы H5N1, вызвали вспышки болезней у промышленных птиц и одновременно болезни, иногда со смертельным исходом, у людей; и в 1998 и 1999 в Китае, когда вирусы H9N2, встречающиеся в популяциях промышленных птиц, вызывали болезнь у людей. Субтипы вируса гриппа А H7N7 и H3N8 (обозначаемые прежде “вирус лошадей 1” и “вирус лошадей 2”) вызывали вспышки респираторных болезней среди лошадей. Вирус гриппа А (H1N1 и H3N2) часто выделялся от свиней. Выделенные в последние годы от свиней вирусы субтипа H1N1 могут быть подразделены на 3 категории: 1) близкие классическим вирусам “гриппа свиней”, и вызывающие спорадические случаи заболеваний у людей; 2) впервые выделенные из проб от птиц, но которые вызывали вспышки болезней среди свиней в Европе и Китае; 3) сходные вирусы, выделенные во время эпидеймий от людей с 1977. Вирусы H3N2, выделенные от свиней, содержат гены НА и NA, близкородственные таковым штаммов, выделенных во время эпидемий среди людей. Вирус гриппа А (H7N7 и H4N5) вызывали вспышки болезней среди тюленей, сопровождавшихся распространением вируса в ткани нереспираторных органов. В двух отдельных случаях вирусы H7N7 были выделены при конъюнктивальной инфекции лабораторных работников и фермеров в 1980 и 1996, соответственно. Сообщалось об инфицировании вирусом гриппа А (H1N1) китов в Тихом Океане. Другие субтипы вируса гриппа были выделены из образцов легких китов Атлантического Океана в Северной Америке. Вирус гриппа А (H10N4) вызывал вспышки болезней у норок. Все субтипы НА и NA, в различных комбинациях, были выделены из образцов, взятых от птиц, в частности от многих видов диких водоплавающих птиц, кур, индеек и уток. Патология у птиц варьирует от инаппарантной инфекции (часто с вовлечением в процесс репродукции и распространения вируса пищеварительного тракта), до тяжелопротекающей инфекции (наблюдалось для субтипов Н5 и Н7), сопровождающейся генерализацией процесса и высоким уровнем смертности.

Ключевыми параметрами, определяющими спектр восприимчивых хозяев и тропизм вируса, являются структура протеина НА, в частности, его рецептор-связывающего сайта, и его предрасположенность к разрезанию тканевыми протеазами. Кроме этого, исход болезни определяют взаимдействия генных продуктов. В ряде случаев межвидовая передача происходила без генетической реассортации (например, H1N1 – от свиней людям и наоборот, H3N2 - от людей свиньям, H5N1 и H9N2 – от птиц людям). В других случаях, межвидовая передача сопровождалась реассортацией сегментов РНК у хозяев, инфицированных более чем одним штаммом вируса, каждый из которых имеет определенных естественных хозяев или эпидемические характеристики (например, в 1968 изолят вируса H3N2 очевидно произошел при реассортации между вирусом человека H2N2 и вирусом, содержащим гемагглютинин Н3; вирус тюленей H7N7 вероятно произошел при реассортации двух или более вирусов гриппа птиц; реассортация вирусов человека H1N1 и H3N2 в 1978 и 1989 привела к возникновению у людей инфекции, вызванной вирусом, имеющим поверхностные протеины H1N1 или H1N2 и 4-6 других генов, происходящих от вирусов H3N2).

В лабораторных условиях вирусом гриппа А могут быть инфицированы хорьки, мыши, хомяки, морские свинки и мелкие приматы, такие как беличьи обезьяны.

Критерии подразделения на виды внутри рода.

Идентифицирован только один вид. Данный род состоит из кластера штаммов, которые способны к непрерывной репродукции с сохранением наследственных признаков и реассортации между собой. Поэтому, хотя среди вирусов гриппа А, инфицирующих птиц, идентифицировано около 15 различных субтипов НА и 9 субтипов NA, определение их в отдельные виды не соответствует требованиям межвидового подразделения.

Вид (1):

Название вида вируса	Название на русском языке	№ генома в генбанке*	Аббревиатура
Influenza A virus A/RP/8/3H(H1N1)	Вирус гриппа А A/RP/8/3H(H1N1)	V00603, J02151, V01106, J02144, J02146, J02148, V01099, V01104	FLUAV

Примечание: * - в качестве примера представлены только несколько.

Предполагаемые виды: нет.

Род: Influenzavirus B.

Типовой вид: Influenza B virus (FLUBV) (вирус гриппа B).

Характерные особенности.

Все представители данного семейства имеют 8 сегментов генома. Гемагглютинин и нейраминидаза (рецептор-разрушающий энзим) являются разными гликопротеинами. Консервативными последовательностями вируса гриппа В являются 5’-AGUAG(A/U)AACAA… и 3’-UCGUCUUCGC… Размер протеинов вируса гриппа В сходен с таковыми вируса гриппа А. Второй продукт сегмента РНК 6 вируса гриппа В имеет Mr 11х10³ (гликозилированный – 18х10³).

Антигенные свойства.

Антигенные вариации антигенов НА и NA вируса гриппа В также изучены детально. В отличие от вируса гриппа А, у вируса гриппа В не найдено антигенных субтипов; однако было показано, что вирусы антигенно и генетически различающиеся по НА и NA (например, вирусы подобные В/Victoria/2/87 и вирусы подобные B/Yamagata/16/88) коциркулировали среди людей в течение десятилетий. Вирусы гриппа В обозначаются по серотипу/месту выделения/обозначению штамма/года выделения. Антитела к НА обладают нейтрализующей активностью.

Биологические особенности.

Вирусы гриппа В непрерывно циркулируют среди людей с момента их первого выделения в 1940 г и вызывают рекурентные эпидемии респираторной болезни. Хотя антигенные изменения (антигенный дрейф) случаются более редко, чем у вирусов гриппа А, вирусы гриппа В вызывают эпидемии каждые 3-5 лет, характеризующиеся высоким уровнем заболеваемости среди людей молодого возраста (18-25 лет).

Критерии подразделения на виды внутри рода.

Идентифицирован только один вид. Данный род состоит из кластера штаммов, которые способны к непрерывной репродукции с сохранением наследственных признаков и реассортации между собой. Хотя между вирусами данного рода существуют значительные антигенные и генетические различия, они недостаточны для выделения отдельных видов.

Вид (1):

Название вида вируса	Название на русском языке	№ генома в генбанке	Аббревиатура
Influenza В virus B/LEE/40	Вирус гриппа B B/LEE/40	M20168, M20170, M20172, K00423, K01395, J02094, J02095, J02096	FLUBV

Предполагаемые виды: нет.

Род: Influenzavirus C.

Типовой вид: Influenza C virus (FLUCV) (вирус гриппа C).

Характерные особенности.

Представители данного рода инфицируют только человека. Имеют 7 сегментов генома. Не имеют нейраминидазы. Гемагглютини (HEF) имеет также функцию протеина слияния (fusion protein) и рецептор-разрушающего энзима, который является 9-О-ацетилнейраминилэстеразой. Консервативными последовательностями вируса гриппа С являются 5’-AGСAGUAGCAA… и 3’-UCGU(U/C)UUCGUCC… Сегменты РНК 1-3 кодируют протеины Р (Mr 87,8х10³, 86х10³, 81,9х10³). Сегмент РНК 4 кодирует HEF (негликозилированный: Mr 72,1х10³), сегмент РНК 5 кодирует NP (Mr 63,5х10³), сегмент РНК 6 кодирует М и СМ₂ (Mr 27х10³ и 18х10³), сегмент РНК 7 кодирует NS₁ и NS₂ (Mr 27,2х10³ и 21х10³, соответственно).

Антигенные свойства.

Антигенный дрейф, характеризующийся появлением последовательных вариантов, происходящих от циркулировавших ранее, у вирусов гриппа С не отмечается; однако, антигенные вариации между коциркулирующими вирусами разного происхождения, могут быть идентифицированы в реакции ингибиции (подавления) гемагглютинации (с использованием как поли-, так и моноклональных антител). Перекрестной антигенной активности между вирусами гриппа С и вирусами граппа А и В не наблюдается, хотя гомология HEF с НА вирусов гриппа А и В была найдена в амино- и карбоксиконцевых областях. Антитела к HEF обладают нейтрализующей активностью.

Биологические особенности.

Вирусы гриппа С обычно вызывают инфекцию у детей. Отмечались отдельные вспышки, но не эпидемии. Сообщалось об инфицировании в Китае свиней вирусом, сходным со штаммами вируса гриппа С человека.

Критерии подразделения на виды внутри рода.

Идентифицирован только один вид. Данный род состоит из кластера штаммов, которые способны к непрерывной репродукции с сохранением наследственных признаков и реассортации между собой. Хотя между вирусами данного рода существуют значительные антигенные и генетические различия, они недостаточны для выделения отдельных видов.

Вид (1):

Название вида вируса	Название на русском языке	№ генома в генбанке	Аббревиатура
Influenza C virus C/California/78	Вирус гриппа C C/California/78	K01689, M10087, M17700	FLUCV

Предполагаемые виды: нет.

Род: Thogotovirus.

Типовой вид: Thogoto virus (THOV) (вирус Тогото).

Характерные особенности.

Морфология и морфогенез сходны с таковыми инфлюэнцавирусов. Вирионы содержат 6 (THOV) или 7 (DHOV) сегментов геномной РНК. Общий размер генома около 10 kb. Сиквенс концов РНК частично комплементарен и напоминает таковые инфлюэнцавирусов. Консервативными последовательностями РНК THOV являются 5’-AGAGA(U/A)AUCAAAGC… и 3’-UCGUUUUUGUUC…; DHOV – 5’-AGUAGACAUCAA… и 3’-UCGUU(A/U)UUGUUCG… Ген сегмента РНК 1 не известен. 2-й (DHOV) и 3-й (THOV) сегменты РНК кодируют протеины (Mr 69х10³ и 69х10³, соответственно), проявлющие гомологию с протеинами Р вирусов гриппа. 4-й сегмент РНК кодирует гликопротеин (GP, DHOV: Mr 65х10³; THOV: Mr 75х10³), не имеющий родства с протеинами вирусов гриппа, но имеющего сходство по сиквенсу с гликопротеином (gp64) бакуловирусов. 5-й сегмент РНК DHOV кодирует протеин NP (Mr 54х10³), гомологичный NP вирусов гриппа. 6-й сегмент РНК DHOV кодирует протеин М₁ (Mr 30х10³) и может кодировать другой протеин М₂ (Mr 15х10³, протеин не выявляется) с неясной функцией. Ген 7-го сегмента РНК DHOV не известен.

Антигенные свойства.

Антигенное родство между ТHOV и DHOV не четкое, с вирусами гриппа антигенного родства нет; однако в серологических реакциях отмечается перекрестная активность между DHOV и Batken virus. Для ТHOV и DHOV известно по нескольку изолятов, однако их родство с прототипными вирусами не известно.

Биологические особенности.

ТHOV и DHOV передаются между позвоночными через клещей. Сравнительно низкий уровень гемагглютинации наблюдается при кислом значении рН, и отсутствует при нейтральном. Рецептор-разрушающий энзим не обнаружен. Слияние инфицированных клеток происходит при кислом значении рН, и ингибируется моноклональными антителами, специфичными GP, что свидетельствует о проникновении вируса в клетку путем эндоцитоза, как у инфлюэнцавирусов. Нуклеопротеин накапливается на ранних этапах репликации в ядре. GP синтезируется в цитоплазме и аккумулируется на клеточной поверхности. Экспериментально показана возможность реассортации между температурочувствительными мутантами ТHOV при коинфекции у клещей и позвоночных.

Критерии подразделения на виды внутри рода.

Тоготовирусы были выделены от клещей Boophilus sp. и Rhipicephalus sp. в Кении и Сицилии, от клещей Ambliomma variegatum в Нигерии и Hyalomma sp. в Нигерии и Египте. Тоготовирусы также были выделены в Центрально-Африканской Республике, Камеруне, Уганде, Эфиопии и Южной Европе. Вирус Дхори распространен в Индии, на Востоке Российской Федерации, Египте и на Юге Португалии. Вирус Дхори был выделен от клещей Hyalomma sp. Между DHOV и ТHOV серологического родства не выявлено. Идентифицированы структурные различия (ТHOV имеет 6 сегментов РНК, а DHOV – 7 сегментов) и дивергенция 37% и 31% по сиквенсам нуклеопротеина и оболочечного протеина, соответственно, что дает основания для определния им статуса разных видов. Вирус Баткен (Batken), выделенный от москитов и клещей в Российской Федерации, перекрестно реагирует в серологических реакциях с DHOV и проявляют 98% идентичности по части нуклеопротеина и 90% по части оболочечного протеина. Эти данные дают основание полагать, что вирус Баткен, хотя и был выделен от москитов и клещей, является близкородственным вирусу Дхори.

Виды (2 вида):

Название Вида вируса	Название на русском языке	№ генома в генбанке	Аббревиатура
Thogoto virus	Вирус Тогото	D00540, M77280	THOV
Dhory virus Batken virus	Вирус Дхори Вирус Баткен	M65866, M34002, M17435, M95567 X97338, X97339	DHOV

Предполагаемые виды: нет.

Неклассифицированные вирусы семейства: нет. Сходство с другими таксонами: нет данных.

ГРИПП КУР (КЛАССИЧЕСКАЯ ЧУМА ПТИЦ)

Pestis Galmarum (лат .); Fowl Pest, Chicken plaque (англ.); Peste aviaire (франц.); Europische, lombardische oder Klassische Gefaugelpest, Hunerpest, Geflugelpest (нем»)

Грипп кур (классическая чума птиц, КЧП - грипп птиц А1, подтип 7, экссудативный тиф, брауншвейгская болезнь кур) - острая контагиозная вирусная болезнь, характеризую­щаяся общим угнетением, отеками, поражением органов дыхания и пищеварения.

В настоящее время грипп птиц в форме КЧП регистрируется редко. Чаще инфекция проявляется эпизоотическими вспышками, вызываемыми штаммами других АГ подтипов с более низкой, чем вирус КЧП, патогенностью. Такие вспышки зарегистрированы в США, Италии, Англии, ФРГ, СССР и других странах. Вирусы гриппа птиц (ВГП) выделены от кур, индюков, уток, перепёлок, фазанов, глухарей, длиннохвостых попугаев, цесарок и др.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Для КЧП, вызывае-мой вирусом гриппа Al/Duthch/27, характерны депрессия, потеря чувствительности, си-нюшность видимых слизистых оболочек, гребня и серёжек. Отёк подкожной клетчатки в области головы и шеи, специфический, но непостоянный признак, позволяющий дифферен­цировать КЧП от НБ, наблюдается также и при заболеваниях, вызываемых шт. цыплёнок/ Шотландия/59 и реже - крачка/Ю. Африка/61. Признаки поражения органов дыхания, обычно наблюдаемые при гриппе птиц, слабо выражены при КЧП и не отмечаются при бо­лезнях, вызванных шт.: А/цыплёнок/Шотландия/59, А/крачка/ Ю. Африка/61 и А/индюк/ Онтарио /7732/66. Диарея обнаруживается при заражении птиц гриппом шт. А/крачка/ Ю, Африка/61. Шт. гриппа А/индюк/Онтарио/7732/66 постоянно вызывал этот симптом у инде­ек. Все остальные штаммы ВГП независимо от серологической принадлежности, вызывают болезни, симптомы которых чрезвычайно разнообразны и зависят от вида, возраста и пола животного, сопутствующих инфекций, патогенности вируса, стресс-факторов и пр.

Среди кур грипп протекает не только как КЧП, но и в виде респираторной болезни, при которой погибают от 1 до 70-80% больных, что зависит от вирулентности штамма, возраста и вида птицы, условий содержания и сопутствующих инфекций. У больной птицы наблю­дают сонливость, чихание, хрипы, одышку, выделения из носа, слезотечение, взъерошен-ность оперения, отставание в росте и развитии. У отдельных птиц отмечают тремор, указы­вающий на поражение нервной системы. Снижение яйценоскости у взрослой птицы - харак терный признак, наблюдаемый и при отсутствии симптомов поражения органов дыхания. При этом ухудшается качество скорлупы, снижаются оплодотворяемость и выводимость.

Выделенный в 1970-1971 гг. штамм вируса гриппа А/курица/СССР/ 315/70 вызвал за­болевание птиц с поражением преимущественно ЖКТ. Больная птица была угнетена, отка­зывалась от корма, яйценоскость снижалась. Выраженным клиническим признаком была диарея. Хотя гибель больной птицы не превышала 2-5%, однако с вынужденным убоем больных достигала 30%. После 2-3-нед переболевания птица выздоравливала и продуктив­ность её восстанавливалась. При некоторых вспышках, вызываемых низкопатогенными штаммами вируса гриппа кур, у птиц наблюдалось поражение почек. Часто инфекция у птиц протекает бессимптомно, о чём свидетельствуют выявляемые в РТГА AT. Это наблю­дается среди домашних уток. У индеек болезнь характеризуется резким снижением яйце­носкости и жизнеспособности вылупившихся индюшат

При вскрытии птицы с респираторной формой гриппа обнаруживают катаральный конъюнктивит, ринит, синусит, трахеит, аэросаккулит, интерстициальную пневмонию, катарально-геморрагические энтериты и нефриты. В отдельных случаях наблюдается поражение яйцеводов и яичников. В случае осложнения болезни патогенной E.coli отмечают фиброзно-дифтерический аэросаккулит, перикардит и синусит. Патоморфология респираторного трак­та весьма сходна и не зависит от серологической принадлежности вируса и вида птицы. У индюшат и перепелят встречаются некрозы в поджелудочной железе, а у цесарят - в гона­дах. Сведений о вирусных включениях при гриппе птиц в литературе нет.

При КЧП (грипп Н7) наблюдают кровоизлияния преимущественно в серозных покровах, паренхиматозных органах, скелетных мышцах, пищеварительном тракте. Характерны ката­ры ЖКТ с сильным утолщением слизистой оболочки и обилием слизистых выделений, оча­говые некрозы в селезёнке, печени, почках и ЦНС. Три штамма ВГП А5, как и вирус КЧП, оказывают пантропное действие. При вскрытии обнаруживали венозный застой и цианоз кожи, мышечной ткани внутренних органов, кровоизлияния в строму фолликул и желточ­ный перитонит у несушек, а также энтериты, выраженные в различной степени. У кур, за­ражённых шт. крачка/Ю. Африка/61, преобладал катарально-геморрагический гастроэнте­рит вплоть до язвенного воспаления.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Четании и Савонуции (1901) впервые доказали вирусную природу КЧП. В 1956 г. Шеффер и Уотерсон впервые установили принадлежность вируса КЧП к гриппу типа А -Myxovirus influenza А. В дальнейшем сообщалось о выделении вирусов гриппа от кур, цып­лят, уток, индеек, перепелов, крачек, воробьев и других птиц. В 1967 г. в СССР был выде­лен атипичный вариант вируса гриппа А (шт. 314), в 1968 г. - другой высоковирулентный шт. С, в АГ-отношении родственный вирусу КЧП.

Морфология и химический состав. ГА - один из самых крупных белков в вирионе, на его долю приходится 25-35% белков. Он ответствен за прикрепление вирусной частицы к клетке хозяина и вовлекается в начальные стадии инфекции. Именно против ГА направлены AT, нейтрализующие инфекционность вируса гриппа. Ввиду столь важной роли ГА в разви­тии инфекции, структура этого белка привлекла внимание многих исследователей, и к на­стоящему времени в структурном отношении он наиболее изучен. Часть углеводов ГА ВГП может изменяться в различных хозяйских клетках даже в течение одного пассажа.

Второй поверхностный АГ вируса гриппа - нейраминидаза. Этот фермент в составе ви­руса гриппа известен с 1942 г., однако функциональная роль его в репродукции вируса до сих пор в полной мере не выяснена. Предполагается, что главная функция нейраминидазы - предотвращение агрегации вирусных частиц на поверхности клеток. Также известно, что нейраминидаза играет большую роль в иммунологии и патогенезе заболевания.

Устойчивость. При температуре 55°С ВГП инактивируется за 1 ч, при 60°С - за 10 мин, при 65-70°С - за 2-5 мин. При низких температурах и в лиофилизированном состоянии (при -30°С в запаянных ампулах в тёмном месте) сохраняется до 2 лет. В присутствии MgCl2 вирус инактивируется быстpee, a Mgb04 стабилизирует его. ГА и инфекционность вируса обычно сохраняются при - 60°С несколько лет, а при 4°С - несколько недель. ГА свойства более стабильны, чем инфекционные. Инфекционность и ГА-активность вируса можно со­хранить, если в осадок добавить простой белок (протамин), квасцы или фосфат кальция или же обработать 35%-ным метанолом при -5°С. Инфекционность вируса пропадает при обра­ботке его формальдегидом, детергентами, оксидированными агентами (йодин), слабыми ки­слотами, додецилсульфатом, гидроксиламином, ионами аммония. Степень термоинактивации оказалась различной для штаммов, выделенных в одной и той же географической зоне.

Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время вирусы гриппа А птиц на основании их поверхностных АГ - ГА (Н) и нейраминидазы (N) - разделены на 13 по Н-АГ и 9 вариантов по N-AT (табл. 1) Штаммоспецифические АГ-связи определяются с по­мощью: РТГА - для определения сходства по ГА; РТНА - для определения сходства или различия по НА; теста двойной диффузии - для определения сходства ГА и НА. У штаммов вируса гриппа А птиц, имеющих АГ характеристику H1N1, выявлено не менее 4 AT детер­минант нейраминидазы. Четкие различия выявлены также у НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ формулой H3N8, следовательно, НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ харак­теристиками H1N1 и H3N8 имеет на своей поверхности не менее 4-х АГ различных детер­минант: 1 общую для вирусов, имеющих одинаковый сероподтип, 2 - перекрестие реаги­рующих и 1 - штаммоспецифическую.

Таблица 1.

Обозначения серотипов вируса гриппа А птиц

Серовариант_____Наименование штамма_____Формула

1. А/утка/Альберта/35/76/ H1N1

2. А/утка/Германия/1215/73 H2N3

3. А/утка/Украина1/63 H3N8

4. А/утка/ЧССР/56 H4N6

5. А/крачка/Ю.Африка/61 H5N3

6. А/индюк/Массачусетс/3 740/65 H6N2

7. А/вирус чумы птиц/Росток/34 H7N1

8. А/утка/Онтарио/б 118/68 H8N4

9. А/индюк/Висконсин(1/бб) H9N2

10. А/цыпленок/Германия/49 H10N7

11. А/Утка/Англия/56 H11N6

12. А/утка/Альберта/60/16 H12N5

13 А/черноголовый хохотун/Астрахань/142/7 H13N2

Кроме 13 подтипов ГА, все штаммы ВГП содержат в своей структуре НА или птичьего, или человечьего, или лошадиного происхождения. Собственно птичьей НА известно б ти­пов. Подтиповая классификация ВГП продолжается и по сегодняшний день, т.к. новые фак­ты выделения их от птиц различных видов регистрируются ежегодно в различных регионах земного шара. В 1971 г. была опубликована номенклатура вирусов гриппа А, рекомендо­ванная группой экспертов ВОЗ. Согласно этой рекомендации каждый штамм обозначается по месту и времени выделения, а в скобках указывается его АГ формула. Эта номенклатура себя оправдала, однако накопившиеся за последние годы данные требуют ее пересмотра. В 1980 г. ВОЗ предложила новую номенклатуру ВГП. Предложено обозначать серотипы ГА и НА последовательными номерами, независимо от происхождения вирусов. Таблица эталон­ных штаммов ВГП свидетельствует о том, что изменения нуклеотидной последовательности и, как следствие, замена аминокислотных остатков сопряжено с изменением патогенности вируса гриппа в отношении птиц и КЭ. Так, например, изолят А/индюк/Висконсин/68 (H5N9) ВГП состоит из 2-х популяций вируса, имеющих разные гены NS и вызывающих разные биологические реакции в КЭ: быструю (эмбриолеталъную - /REL/) или медленную (эмбриолетальную - /SEL/) летальность. Секвенирование показало, что гены NS вариантов REL и SEL различаются лишь 2-мя нуклеотидами, что вызывает замену одного аминокис­лотного остатка в белках NSl-и NS2. Замена в NS1 нейтральна, а появление остатка гена в NS2 приводило к сильному гидрофобному сдвигу. Таким образом, 2 природных варианта гена NS влияют на скорость гибели зараженных КЭ, не затрагивая репликацию вируса.

Дикие водоплавающие птицы - резервуар различных подтипов ГА (Н) и нейраминидазы (N) вируса гриппа. В этих популяциях заражения часто происходят там, где водоплавающие птицы, свиньи и люди живут близко и за счет генной реассортации могут образовываться новые более патогенные штаммы вируса гриппа. Анализ АГ свойств методами ИФА и РТГА свидетельствует о родстве внутренних белков "человеческих" и "птичьих" вирусов гриппа и различиях в структуре поверхностного гликопротеина - ГА. Вирус гриппа А с АГ формулой H2N2 не выделятся от человека с 1968 г, но изолируется от птиц и, в случае ре­версии, может стать эпидемическим. Выделенный в Японии в 1925-1926 г. ГА вирус чу­мы птиц шт. Chiba имеет АГ состав Havl Neql и обозначен как вирус гриппа А/курица/ Япония/25 (HavlNeql). Основные направления изучения АГ-вариабельности вируса гриппа А птиц - это характеристика ГА и НА первичной структуры белков клеточных мем­бран, которые служат мишенью для адсорбции вируса.

Антигенная активность. Вирусы гриппа индуцируют в организме больной и перебо­левшей птицы AT, обладающие анти-ГА- и КС свойствами. В экспериментальных условиях специфические AT можно получить на кроликах, крысах и морских свинках как на нативный вирулентный вирус, так и на инактивированный пропиолактоном.

Экспериментальная инфекция. Вирусы КЧП (грипп А - H7N1, а также H5N3) пато­генны для кур и цыплят при любом методе заражения. Белые мыши заболевают при зара­жении в носовую полость и мозг. Некоторые штаммы токсичны при внутривенном введе­нии. Экспериментальное заражение вирусом других подтипов иногда протекает бессимптомно. Экспериментальная инфекция у восприимчивых птиц зависит от вирулентности ви­руса, степени его адаптации и сопутствующих инфекций (микоплазмоз, колибактериоз, аспергиллёз и др.).

Культивирование. Все штаммы ВГП хорошо размножаются в КЭ при заражении в аллантоисную или амниотическую полость. Накопление вируса зависит от вирулентности штамма и степени его адаптации к этой системе. Все штаммы КЧП уже в 1-ом пассаже (при выделении) вызывают гибель эмбрионов через 26-36 ч, по мере адаптации вирулентность их возрастает, достигая 10⁷-10⁸ ЭЛД_5о/мл и выше. Вирус гриппа А6 слабовирулентен для эм­брионов, и ГА-титр его возрастает. Одни штаммы ВГП после адаптации размножаются в культуре клеток фибробластов КЭ, почек обезьян и других первично-трипсинизированных культурах клеток. Другие дают в определённых клеточных культурах один цикл размноже­ния, продуцируя инфекционный вирус. Так размножаются вирусы КЧП в L-клетках и неко­торые штаммы гриппа птиц в диплоидных культурах клеток человека. Вирус КЧП, адапти­рованный в культуре клеток W1-38, развивался в миелобластах цыплят, заражённых виру­сом миелобластоза, и в первичных культурах клеток лёгких эмбриона человека. Большинст­во штаммов вируса дают бляшки в первичной культуре клеток фибробластов.

Нейраминидазная активность. Нейраминидазная активность штаммов ВГП не зависит от ГА- и инфекционной активности и не коррелирует с ними.

ГА свойства. Все ВГП агглютинируют эритроциты кур, морских свинок, кроликов, ло­шадей, овец и других животных. В отличие от вируса НБ штаммы вируса КЧП агглютинируют эритроциты лошади и овцы. Это свойство используют для дифференциации выделенных на эмбрионах штаммов вируса КЧП и НБ. Эталонные штаммы ВГП (смесь различных сероподтипов) обладают разной ГА- (1:64-1:1024) и инфекционной активностью (5,28-8,70 ЭИД5о/мл) при однотипных условиях нако­пления.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Источники инфекции - больная птица. Ин­фекция передаётся воздушно-капельным путём. Больная птица выделяет вирус и с фекалия­ми, что даёт возможность заражения птицы через инфицированный корм и воду. Установ­лено, что распространять КЧП могут и дикие перелётные птицы. Так, высокопатогенный вирус индюк/Англия/63 был занесён в Великобританию перелётными птицами. От больных и мёртвых диких крачек выделен вирус, АГ родственный вирусу цыплёнок/Шотландия/59 (5-й подтип). Полагают, что 2 вспышки гриппа птиц в Шотландии были обусловлены уча­стием перелётных крачек. Трудно объяснить, почему в США вирус гриппа выделяли от ин­деек, а в Европе - от цыплят и кур. Показано, что вирус гриппа А (шт. FPV Росток) способен репродуцироваться в организме комаров A. Egypti.

В Японии вирус гриппа выделен от диких водоплавающих птиц - лебедей, уток, чаек и др., в том числе подтипов H7N7, H5N3, H10N4 и H2N2. Изучена патогенность для цыплят 91 штамма вируса гриппа. Большинство вирусных изолятов оказались патогенными ддя цы­плят и только отдельные были практически апатогенны. Они относились к подтипам: H13N1, H13N6, H11N3, H11N6.

Особенно часто заболевают домашние птицы с ноября по март в районе Карачи, когда тысячи птиц мигрируют из бывшего СССР через Афганистан и горные хребты в сторону Пенджаба, Белудпастана и провинции Синд. Самым большим пристанищем птиц является озеро Халей в 85 км от Карачи, а также меньшее по размеру озеро Дабей в 35 км от города Мигрирует около 70 видов птиц, главным образом водоплавающие - утки, пеликаны, фла­минго и др. В поисках пищи они часто располагаются на отдых вокруг птицеферм и свалок -обычно в октябре-ноябре регистрируется грипп птиц, инфекционный бронхит, инфекцион­ный ларинготрахеит. К декабрю инфекции широко распространяются и с наступлением хо­лодов у птиц выявляют колисептицемию, микоплазмоз, адено- и реовирусные инфекции. В этот период гибнет до 30% бройлеров и резко снижается яйценоскость. Вирулентность ВГП коррелирует с чувствительностью их ГА к клеточным протеазам. Наиболее вероятным ферментом, расщепляющим ГА вирулентных вирусов является, фурин-процессирующая пропротеин-эндопротеаза, родственная субтилизину. Показано, что способность расще­пления ГА вирусов гриппа птиц в куриных фибробластах определяет их вирулентность.

Обнаружена гетерогенность популяции ВГП. На молекулярном уровне различия между вирусами были в неструктурном гене. Штаммы ВГП, выделенные в 1977-1979 гг. с АГ характеристикой H1N1, характеризовались не только качественными, но и количественны­ми изменениями ГА, в частности, изменением ГА-активности и термостабильности. Нейра-минидазы ВГП оказались близкими, но неидентичными в АГ-отношении.

Вирусы гриппа A (H1N1) вызывали эпидемии гриппа на протяжении 2-х периодов: 1933-1957г. и с 1957 г. по настоящее время. Исследования показа­ли, что одна общая детерминанта остается АГ стабильной в составе ГА-вирусов гриппа А подтипа H1N1 начиная с 1933 г, в то время как другая является лабильной. Сделалан вывод о нескольких путях дрейфа начального вируса А/СССР/090/77. Наиболее перспектив­ным и иммунологически значимым представляется то изменение, которое обусловливается одновременно сменой 2-х детерминант ГА, свидетельствуя о наиболее интенсивной эволю­ционной изменчивости.

Спектр патогенности в естественных условиях. Он неоднороден и зависит от АГ подтипа. Известны 2 подтипа ВГП: А5 и А7, вызывающих заболевание типа КЧП. Патоген­ные штаммы, относящиеся к этим подтипам, разрушают протеазу многих клеток и активи­зируют протеолиз, что и составляет сущность инфекционное™ вируса. Грипп А7 КЧП чаще поражает птиц семейства куриных, менее восприимчивы водоплавающие птицы.

Дикие утки и др. виды водоплавающей птицы также чувствительны даже к самым сла­бопатогенным штаммам ВГП и являются не только переносчиками инфекции, но и резер­вуаром. Сезонные миграции диких птиц вызывают сезонные заболевания болотных птиц.

Из 14 подтипов вируса гриппа А только 3 обнаруживаются у человека (HI, H2 и НЗ). Прошло уже 25 лет с тех пор как из человеческой популяции исчез подтип H2 вируса гриппа. Однако ген ГА H2 циркулирует среди птичьих штаммов вируса гриппа.

ДИАГНОСТИКА

Поставить диагноз на грипп птиц можно путём выделения вируса и идентификации его в РСК, РН и РТГА, а также выявления специфических AT в процессе эпизоотии или по прошествии её (ретроспективная диагностика). В нашей стране биопромышленность выпус­кает 2 диагностических набора: а) набор специфических АГ и сывороток к ним для диагно­стики гриппа птиц 13-и серотипов; б) диагностический набор для идентификации вируса НБ и ГП (актуального эпизоотического типа). Диагностическими наборами пользуются в соот­ветствии с наставлениями по их применению.

Выделение вируса

Взятие и подготовка материала. В качестве вируссодержащего материала используют се­лезёнку, головной мозг, синусы, трахею, лёгкие, воздухоносные мешки, кишечник от боль­ной птицы или свежих трупов. Материал в лабораторию доставляют в замороженном виде в термосе со льдом. Инфекционные титры вируса в назальных смывах бывают максимальны­ми через 2-4 дня после заражения птицы и достигают 10 ⁵ -10 ⁷ ЭИД5о/мл смыва. Реизолировать вирусы из клоачных смывов удаётся чаще всего на 5-8-й день после экспериментально­го заражения птицы.

Заражение куриных эмбрионов. Испытуемую суспензию инокулируют 9-10-дн КЭ (не менее 5 на одну пробу) в аллантоисную или амниотическую (лучше) полости общепринятым методом и инкубируют в течение 72 ч. Экстраэмбриональную жидкость каждого эмбриона раздельно проверяют на ГА-активность капельной РГА с 1%-ной взвесью эритроцитов кур. При отсутствии положительной РГА проводят еще 3-5 слепых пассажей, используя для за­ражения КЭ эмбриональную жидкость предыдущего пассажа. Если титры ГА низкие, про­водят таким же образом еще 2-3 дополнительных пассажа. Проба испытуемого материала считается отрицательной, если в 3-5 слепых пассажах не будет обнаружено ГА и патогенно­го действия вируса (гибели КЭ). При положительной РГА проводят идентификацию выде­ленного вируса.

Заражение культуры клеток. В диагностической практике этот метод применяют ре­же. Вирус после 2-5 пассажей хорошо развивается в культуре фибробластов КЭ. ЦПД обыч­но проявляется через 24-48 ч (в зависимости от дозы и адаптации). Присутствие его уста­навливают при помощи РГА и РГАд. Предложен ускоренный метод титрования инфекционности вируса гриппа в культуре клеток путем подсчета гемадсорбирующих клеток. Метод позволяет получить результат через 8 ч после заражения.

Биопроба на цыплятах. Испытуемую суспензию инокулируют цыплятам 2-3-месячного возраста. Летальную инфекцию у цыплят можно вызвать при любом методе заражения (подкожно, внутримышечно, в мозг, конъюнктиву) подтипами А1, А7 и А5. Заражение per os с кормом и водой удается непостоянно, лишь в случае высокой патогенности эпизоотиче­ского изолята гриппа. Зараженные цыплята, как правило, гибнут через 36-72 ч в зависимо­сти от дозы и вирулентности возбудителя.

Индикация и идентификация вируса. Для этой цели широко используют методы ИФ, цитоскопию, биопробу (на птице и КЭ) и серологическую идентификацию. С помощью монАТ можно идентифицировать не только разные группы вирусов (ВГП и ПМВ), но и опре­делять подтипы ВГП и серотипы ПМВ птиц, и даже штаммы внутри одного подтипа, а так­же локализацию компонентов вириона в зараженных клетках (NРВГП - МА клонов 1С6, 5С10, N:2 - МА клоны 303 и т.д.). На основе монАТ можно готовить диагностические пре­параты для выявления АГ и AT в РТГА, НИФ, РСК, ИФА и др. реакциях.

РГА. Для индикации вируса в патологическом материале можно использовать РГА. Надосадочную жидкость после центрифугирования суспензии проб из органов и тканей боль­ной птицы, а также смывов исследуют в капельной или пробирочной РГА с 1%-ной суспен­зией эритроцитов кур или 0,5%-ной взвесью эритроцитов морской свинки. Реакцию учиты­вают через 20 мин и 1 ч. Специфичность определяют в РТГА.

Цитоскопия. Метод заключается в исследовании тканевых элементов в отпечатках, по­лученных со слизистой оболочки верхних дыхательных путей (лучше) и органов. Препараты высушивают и окрашивают одним из методов: по Романовскому, Пигаревскому, Быковско­му и т. п. При окраске по Быковскому и Пигаревскому в цитоплазме клеток при гриппе обычно обнаруживают тельца-включения ярко-красного цвета; при окраске по Романовско­му - фиолетового цвета. Внутриклеточные включения находят не только в клетках цилинд­рического эпителия, но и в цитоплазме макрофагов, лейкоцитов и плоского эпителия. В на­стоящее время этот принцип исследования используется с применением люминесцентной микроскопии.

Метод простого флюорохромирования. На мазки-отпечатки из органов и смывов на­носят 1-2 капли рабочего раствора акридина оранжевого (1:10000), покрывают покровным стеклом и свежий препарат (в течение 10 мин после приготовления) рассматривают в лю­минесцентном микроскопе. Ядра клеток выявляются по изумрудно-зеленому свечению, РНК плазмы клеток - в виде не резко ограниченных гранул красного или оранжевого цвета. В препарате, имеющем вирус гриппа, выявляются включения в виде четко отграниченных яр­ко-красных гранул в цитоплазме клеток.

Серологическая идентификация

Для идентификации гриппа млекопитающих и птиц наиболее простым и высоко досто­верным методом является РТГА. РН - штаммоспецифическая и также высоко достоверная. Ее применяют при не­ясных и спорных случаях.

РСК. Используют для определения типоспецифичности выделенного вируса, когда в РТГА не удается установить родственных связей между выделенным и эталонными штам­мами вируса гриппа по антисывороткам к ним. В этом случае в РСК с эталонными иммун­ными сыворотками против вирусов гриппа типов А, В и С устанавливают типовую принад­лежность штамма В последнее время для типирования нейраминидазы вируса начали применять РТНА, но в диагностической ветеринарной практике она пока еще не применяется. Ее используют, в основном, для изучения АГ связей различных штаммов вируса гриппа.

РТГА. Идентификацию испытуемого вируса проводят с набором эталонных штаммоспецифических гриппозных сывороток к его АГ вариантам. Для дифференциации в реакцию вводят сыворотку против вируса НБ. РТГА ставят микро- или макрометодом по общеприня­той методике.

ИФ. Может быть использована как экспресс-метод диагностики гриппа птиц. Препара­ты готовят непосредственно ex tempore от убитой больной или свежепавшей птицы. Прямой метод ИФ позволяет определять АГ ВГП в мазках-отпечатках тканей птиц, идентифициро­вать АГ данного вируса из различных тканей организма, инкубационных яиц, печени зара­женных эмбрионов и культур клеток фибробластов; выявить вирусный АГ даже в тех случа­ях, когда вирус из пораженных тканей выделить не удается.

В ветеринарной диагностической практике для идентификации выделенного вируса РДП не используют, так как необходимы концентрированные и очищенные АГ. В основном при­меняют ее для изучения АГ структуры вирусов гриппа. Разработаны наборы для ИФА с мо-нАТ, непосредственно обнаруживающие ГА, нуклеокапсидный или матриксный белки виру­са гриппа. Идентификацию вирусспецифической нуклеиновой последовательности предла­гается осуществлять ПЦР с 2-мя типами праймеров (на основе генов неструктурного белка и ГА). Тест стандартизован для определения AT к ВГП в сыворотке крови у индеек. Минимальные АГ различия между вариантами и родительским вирусом выявлялись только монАТ, продуцируемыми клетками гибридомы PEG-1 или фрагментами селезенки гипериммунных животных. МонАТ дают возможность проследить филогенетические взаимоотношения между вирусными штаммами в составе субтипа, а в сочетании с методами пептидного картирования и определения последовательности а. к. - выяснить молекулярную структуру АГ участка ГА.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Обнаружение анти-ГА, ВНА и КСА - надежный признак протекающей или уже прошедшей инфекции ГП в стаде.

РТГА. Исследование парных сывороток проводят с диагностической целью при атипичном, часто вялом течении болезни с поражением органов дыхания. Сыворотку от диких птиц на присутствие противогриппозных AT исследуют при изучении роли перелетнъ1х птиц в распространении гриппа. Обязательным условием для ретроспективной диагностики ГП является одновременное исследование парных сывороток, так как для диагностических це­лей имеет значение сравнительный титр AT против вирусов различных серологических под­типов в 1-й и 2-й пробах сыворотки. Первую пробу сыворотки хранят при 4°С или в замо­роженном виде. Обе пробы исследуют одновременно. Перед постановкой реакций сыворот­ки прогревают при 60° С 30 мин, а затем освобождают от термостабильных ингибиторов, используя С02, KI04 и др. методы. Если титр AT во 2-й пробе сыворотки (через 10-14 дн после заболевания) превышает не менее чем в 4 раза титр AT к тому же типу вируса в 1-й пробе, то РТГА считается положительной, подтверждающей диагноз гриппа птиц. При по­становке РТГА с парными сыворотками больных птиц необходимо использовать не только набор эталонных штаммов (например, к вирусам A/Fowl plague, A/Chick/Scotland, A/Turkey, A/Duck), но и местные штаммы того птицехозяйства, где зарегистрирована болезнь. При анализе результатов РТГА необходимо указывать, сколько сывороток было с низким, сред­ним и высоким титром к тому или иному штамму вируса гриппа. В ряде случаев вместо ин­дивидуальных сывороток показатели иммунитета стада (после переболевания или прививки живой вакциной) можно изучить на сыворотках, полученных от нескольких птиц. В этих случаях испытуемые сыворотки, взятые от отдельных птиц, нужно соединять в равных объ­емах. На протяжении опыта (120 дн после реконвалесценции) в сыворотках кур находили анти-ГА: до 75-го дня титры сохранялись примерно на одном уровне (5-5,8 logs), а в даль­нейшем снижались (до 4,4-4,6 logs).

РСК применяют для обнаружения АГ и AT в целях ранней и ретроспективной диагно­стики гриппа. Ставят с аллантоисными жидкостями КЭ или с очищенными диагностикумами. РДП широкого применения не нашла, так как необходимы высокие концентрации чис­тых АГ. Среди исследователей нет единого мнения о чувствительности этой реакции. Неко­торые авторы указывают, что чувствительность РДП сравнительно невысока, поскольку достоверные положительные результаты получали лишь при исследовании сывороток с тит­ром AT в РТГА 1:80 и выше.

Реакция радиального гемолиза. В настоящее время используется для серо-эпидемио­логических исследований и при оценке эффективности противогриппозных вакцин. РРГ с ВГ А обладает выраженной штаммовой специфичностью: диаметр зон гемолиза с гомологичными АГ при исследовании сывороток хорьков, зараженные 6-ю различными вирусами, больше в 1,5-3 раза больше, чем с гетерологичными. При правильном подборе штамма РРГ может быть с успехом использована для определения анти-ГА.

Лабораторные методы дифференциации КЧП и НБ (Табл 2)

Маркеры	Вирусы КЧП (H7N1)	Вирус НБ
Экспресс-диагностика (РГА)
взрослых кур	+	-
Цыплят	+	+
РГА с эритроцитами:
Петуха	+	+
Лошади	+	-
Кошки	+	-
Чувствительность ГА к действию азотистой Кислоты.	+	-
Адсорбция ГА на формалинизированных эритроцитах, предварительно обработанных: вирусом КЧП	-	+
вирусом НБ	+	-
Лабораторная диагностика: Выделение вируса на КЭ Сроки гибели заражённых :	+	+
эмбрионов (зависит от дозы)	До 30 ч	Более 30 ч
Птицы	48ч	96 ч
Патогенность для: мышей – голубей – Титр ГА в ХАО/титр ГА в аллантоисной жидкости Чувствительность к фотодинамическому действию метиленовой сини	+ - >1 +	- + <1 -

Обозначения: (+) – положительные, (-) - отрицательные результаты.

Показано хорошее совпадение результатов титрования AT в ELISA, РСК и ИФ. Однако в ELISA значительно выше (титр 1:481-1:1520), чем в РСК и РИФ. Сенсибилизацию лунок панелей проводят РНК-АГ вируса гриппа А. Предложен новый метод приготовления AT эритроцитарнь1х диагностикумов к вирусам гриппа, которые с успехом могут быть изготовлены на основе любых штаммов вируса гриппа. Они позволяют определять типовую при­надлежность эпизоотических и межэпизоотических штаммов ВГП, свиней и лошадей. В практической работе врачу ветеринарной лаборатории, возможно, придется встретиться не только с гриппом кур и уток, но и с гриппом индеек. Умея диагностировать грипп кур и уток, имея набор диагностикумов, врач лаборатории при необходимости сможет поставить диагноз при гриппозной инфекции индеек.

При респираторных вирусных болезнях КРС, свиней и птиц (грипп, парагрипп, РС-инфекция) разработан направленный тест. Это новый иммуноферментный мембранный тест быстрого обнаружения вирусов гриппа в носоглоточных смывах. Чувствительность направ­ленного метода Flu-A составляла 90%. С помощью этого теста более легко обнаруживается клеточно-ассоциированный АГ, присутствующий в клинических пробах, чем свободный ви­рус. С помощью Flu-A теста удалось обнаружить вирусы гриппа А птиц (субтипы ГА НЗ и Н6) и свиней (H1N1) в клоачньк смывах и гомогенатах.

Дифференциальная диагностика. КЧП (H7N1) и другие формы гриппа птиц следует отличать от НБ, ИБ, ИЛТ, гемофилеза и респираторного микоплазмоза. Для идентификации вирусов НБ и КЧП используется диагностический набор.

В сомнительных случаях для дифференциального диагноза ставят РН на КЭ и заражают птиц, иммунных к вирусу НБ.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

АГ изменчивость ВГП, затрагивающая поверхностные белки вириона - ГА и нейраминидазу, изменяющиеся независимо друг от друга, создает существенные трудности в реше­нии проблемы вакцинопрофилактики. Поэтому необходимы своевременное выделение но­вых эпизоотических вариантов вируса и подбор адекватных вакцинных штаммов, для чего необходимо применять эффективный метод оценки АГ соответствия вакцинных штаммов, циркулирующим эпизоотическим. Для этого широко используют радиоиммунологический метод. Для профилактики гриппа, вызываемого вирусом H7N1, применяют живые вакцины из аттенуированных шт. Ру и Р5. С целью профилактики гриппа птиц, вызываемого вируса­ми подтипов А1-А8, применяют активную инактивированную вакцину, которая производит­ся биофабриками. Для специфической профилактики в Англии применяют живую нейраминидазо-специфическую вакцину, преимущество которой в том, что она не интерфе­рирует при серологической диагностике болезни в РЗГА. Разработан метод получения рекомбинантного ВГП, который экспрессирует иммуногенные белки и выполняет функцию живой вакцины для домашней птицы. В США успешно применяют масляно-эмульсионную вакцину против ГП на цыплятах-бройлерах и курах-несушках.

Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Переболевшая классиче­ской чумой птица иммунна в течение 1-2 лет. В сыворотке крови птиц-реконвалесцентов по­стоянно обнаруживают AT, обладающие КС, анти-ГА и ВН свойствами. Какие из этих свойств появляются раньше и в какой последовательности происходит смена их в иммунных сыворотках неизвестно. Обычно ранние AT (анти-ГА) чётко обнаруживаются в РТГА в пер­вые 3-4 мес после переболеванид или иммунизации птицы. ВНА выявляются в течение 10-12 мес. Корреляция между серологическими показателями и фактической резистентностью переболевшей или активно иммунизированной птицы не изучена, особенно в отношении гриппа, вызываемого подтипом МИ А2 - А8.

Инактивированная пропиолактоновая ГОА-вакцина против КЧП индуцирует образо­вание AT в титрах 1:16- 1:64 и предохраняет от гибели птицу при заражении 5 х10⁶'⁵ ЭЛД5о вируса даже через 33 нед после прививки. Возбудитель не обнаруживается в крови, кале, моче, но выделяется из лёгких привитых птиц через 7-8 ч после заражения. Установлена корреляция между титрами поствакцинальньтх AT и резистентностью птиц к эксперимен­тальному заражению через 5-7 нед после прививки инактивированной вакциной. При испы­тании инактивированных вакцин (из шт. ГП-1, ГП-4, ГП-5, ГП-8) AT вьивляли на 5-е сут после первого введения вакцины, титры их достигали максимума к 7-му дню после 2-й при­вивки. Показателем специфического иммунитета служило наличие в сыворотке крови при­витой птицы анти-ГА в титрах 1:16 и ВНА в титрах 1:2 и 1:4. Длительность иммунитета со­ставляла 6 мес у взрослых птиц и 4 мес у молодняка. У цыплят, выведенных из яиц переболевших кур, пассивные анти-ГА исчезали к 20-му дню. В эксперименте былаа показана об­ратная зависимость распространения вируса в органах и тканях от уровня анти-ГА.

ГРИПП ЧЕЛОВЕКА

Грипп человека в современном мире превратился в глобальную инфекцию. С каждым годом увеличивается численность населения на относительно небольшой планете Земля, а технический прогресс, современные коммуникации, средства скоростного транспорта позволяют менее чем за сутки достигать любой точки Земли. Эпидемическое, а иногда и пандемическое, распространение современных вариантов вирусов гриппа человека типа А [подтипы А (Н1N1), А (Н2N2) и А (Н3N2)] cтало общеизвестным фактом. У людей по поверхностным белкам вирусов типа А, гемагглютининам (Н) выделяют подтипы А (Н1), А (Н2N2 – с 1977 года среди людей не выявляется) и А (Н3), образующие вместе с другими поверхностными белками вирусных частиц – нейраминидазами (N) cерологические подтипы А (Н1N1), A (H2N2) и А (Н3N2). Вирусы гриппа человека типа В пока пандемий не вызывали, а типа С встречаются редко и вызывают очаговые и спорадические заболевания преимущественно у детей.

В силу эволюционно выработанной способности вирусов гриппа к мутациям и гибридизации (рекомбинации), позволяющей этим вирусам преодолевать защитные иммунологические барьеры и активно циркулировать среди людей, животных и птиц, вызывая у них заболевания, сохраняется постоянная опасность возникновения эпидемий гриппа среди людей и эпизоотий гриппа среди животных и птиц.

Современный молекулярно-генетический анализ аминокислотного и структурного состава пандемических вирусов человека: А (Н1N1) – возбудителя «испанки» 1918 – 1919 гг., А (Н2N2) – «азиатского гриппа» 1957 – 1959 гг. и А (Н3N2) – «гонконгского гриппа» 1968 –1969 гг., - позволил доказать «родственные» связи этих возбудителей с вирусами гриппа животных и птиц.

Печальный опыт человечества в ХХ веке, когда пандемии гриппа имели непредсказуемые масштабы заболеваемости, смертности и приводили к колоссальным экономическим потерям, заставляет Всемирную Организацию Здравоохранения (ВОЗ) внимательно и постоянно отслеживать ситуацию по гриппу и делать заранее необходимые расчеты и прогнозы эпидемий и грядущих пандемий гриппа.

После событий 1997 года в Гонконге, когда стала понятна опасность пандемии в случае возможности появления гибрида-реассортанта вируса гриппа птиц А (Н5N1) и какого-либо вируса типа А гриппа человека, настороженность специалистов ВОЗ и национальных центров по гриппу и ОРЗ резко возрасла. Сообщения о заболеваниях в 1997 году в Гонконге вирусом А (H5N1) 18 человек, у 6 из которых грипп закончился летальным исходом, заставили резко усилить эпидемический надзор за гриппом в Гонконге и принять срочные меры по ветеринарно-санитарному надзору на рынках и птицефабриках. Эпизоотия среди птиц и заболевание гриппом А (Н5N1) среди людей были прекращены благодаря массовому и практически поголовному уничтожению домашней птицы (цыплята, куры, утки) на птицефабриках и рынках Гонконга и массовому обследованию лиц, контактировавших с заболевшими птичьим гриппом. Удалось доказать, что заболевание птичьим гриппом не передается от человека к человеку.

Приобретают эпидемиологическое значение традиционные способы потребительской реализации птицы – в живом виде (в Южной Азии) или в виде замороженного мяса (в Европе). Так как в известных случаях заражение людей происходило только при прямом контакте с больной птицей, значение второго способа распространения инфекции представляется, по крайней мере, дискуссионным. Хотя многие страны ввели ограничения на торговлю замороженными продуктами птицеводства, примечателен перечень запретов в Голландии, Бельгии и Германии, включавший, главным образом, живые объекты (живая птица, потомство, эмбрионы) и оказавшийся вполне достаточным в условиях Европы. В целом соблюдение условий GHP (Good Hygiene Practices) при переработке сырых продуктов птицеводства (личная гигиена, предупреждение контаминации, тщательная кулинарная обработка с температурой внутри продукта > 70 С) сводит риск заражения до несущественного.

В связи с поступлением в ВОЗ информации из ряда стран Азии об эпизоотиях гриппа А (Н5N1) среди домашней птицы эксперты ВОХ проанализировали основные сообщения, связанные с гриппом птиц с 1959 по 2003 годы (табл.1). Таблица 1.

Основные эпизоотии, обусловленные высокопатогенными вирусами гриппа птиц, зарегистрированные ВОЗ в 1959 – 2003 гг.

Годы	Страны/регионы	Виды домашних птиц, животных	Подтипы вирусов
1959	Шотландия	Куры, цыплята	А(Н5N1)
1963	Англия	Индюки	А(Н7N3)
1966	Канада, провинция Онтарио	Индюки	А(Н5N9)
1976	Австралия, штат Виктория	Куры, цыплята	А(Н7N7)
1979	Германия	Куры, цыплята	А(Н7N7)
1979	Англия	Индюки	А(Н7N7)
1983-1985	США, штат Пенсильвания	Куры, индюки	А(Н5N2)
1983	Ирландия	Индюки	А(Н5N8)
1985	Австралия, штат Виктория	Куры, цыплята	А(Н7N7)
1991	Англия	Индюки	А(Н5N1)
1992	Австралия, штат Виктория	Куры, цыплята	А(Н7N3)
1994	Австралия, штат Винсленд	Куры, цыплята	А(Н7N3)
1994-1995	Мексика*	Куры, цыплята	А(Н5N2)
1994	Пакистан*	Куры, цыплята	А(Н7N3)
1997	Австралия, штат Новый Южный Уэльс	Куры, цыплята	А(Н7N4)
1997	Гонконг, специальный административный регион КНР*	Куры, цыплята	А(Н5N1)
1997	Италия	Куры, цыплята	А(Н5N2)
1999-2000	Италия*	Индюки	А(Н7N1)
2002	Гонконг, специальный административный регион НР	Куры, цыплята	А(Н5N1)
2002	Чили	Куры, цыплята	А(Н7N3)
2003	Нидерланды*, Бельгия*, Германия*	Куры, свиньи	А(Н7N7)

Примечание: * эпизоотии со значительным охватом ферм (хозяйств), приведшие к большим экономическим потерям. Другии эпизоотии были меньших масштабов и не имели такого распространения по территориям.

Из таблицы следует, что за последние 44 года ВОЗ была зарегистрирована, по крайней мере, 21 эпизоотия гриппа птиц в 15 различных странах мира, а в ряде стран они неоднократно повторялись. Кроме того, крупная эпизоотия среди диких птиц была зарегистрирована в 1961 году в Южной Африке, где этиологическим агентом был высокопатогенный для всех видов птиц вирус А (Н5N3). В СССР в 1962 г. были изолированы вирусы А (Н5N1), A (H5N2), A (H5N3) от кур, а также в 1976 г. во время эпизоотии среди диких птиц в Астраханской области.

В большинстве стран, охваченных в прошлом эпизоотиями птичьего гриппа в 1959 – 2003 гг. и пораженных с декабря 2003 г. по апрель 2004 г. высокопатогенными вирусами птиц А (Н5N1), [Южная Корея (с 12.12.2003), Вьетнам (с 8.01.204), Япония (с 12.01.2004), Таиланд (с 23.01.2004), Камбоджа (с 24.01.2004), Китай (КНР) (с 27.01.2004), Лаос (с 27.01.2004) и Индонезия (с 2.02.2004)] и подтипов А (Н7) и А (Н9) (Пакистан), домашнюю птицу (кур, уток, индеек) разводят на мелких фермах со свободным содержанием птиц, на территориях без серьезных ограждений. Это создает возможность контактов домашней птицы с дикими особями птиц, в том числе и перелетных.

Нужно учитывать особенности условий жизнедеятельности населения этих стран, способствующих эпидемиологическим проявлениям эпизоотического процесса. К ним относятся:

• высочайшая плотность расселения людей и домашних животных;

• «многоэтажность» размещения их в жилых и производственных помещениях (соответственно снизу – верх: свиньи, люди, птицы);

• неконтролируемое применение антибиотиков и гормонов в промышленном птицеводстве и свиноводстве;

• большое количество людей с дефицитом иммунорезистентности (ранний возраст, белковое голодание и т.п.);

• преобладание лиц с В (III) группой крови;

• приуроченность к этим регионам основных путей миграции перелётных птиц и занос ими в популяции уток, гусей и кур вирулентных реассортантов

В Китае на 60% территории страны содержится примерно 13,2 млрд. кур в маленьких крестьянских хозяйствах (фермах), которые из-за небольших территорий земельных участков проживают в теснейшем контакте с членами крестьянских семей, с другими домашними (утки и др.) и дикими птицами и домашними животными, в том числе со свиньями и поросятами, восприимчивыми к инфекциям, вызываемыми вирусами гриппа птиц. В Индонезии, по данным местного министерства сельского хозяйства, проживают в таком же тесном контакте с людьми и дикой природой более 1 млрд. кур. Подобная ситуация существует и в других странах Юго-Восточной и Восточной Азии. Все это крайне затрудняет ветеринарно-санитарный контроль и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий, выявление заболевших и уничтожение павших животных и птиц во время эпизоотий гриппа птиц. В большинстве развивающихся стран Азии крайне затруднено уничтожение больных и павших птиц (и, тем более, контактировавших с ними домашних птиц) из-за низкого уровня жизни населения, отсутствия средств на все эти мероприятия и невозможности экономической поддержки крестьянских хозяйств со стороны большинства правительств этих стран во время эпизоотий птичьего гриппа.

В развивающихся странах крайне трудно подсчитать экономический ущерб от эпизоотий птичьего гриппа. ВОЗ, однако, располагает информацией об ущербе, причинённом ряду стран эпизоотиями прошлых лет. Так, эпизоотия 1983 г. в штате Пенсильвания (США) продолжалась 2 года. За это время там было уничтожено 17 млн. домашних птиц стоимостью 62 млн. долларов США. Общая стоимость расходов на ликвидацию эпизоотии составила более 250 млн. долларов США.

Эпизоотия весной 2003 г. в Нидерландах, которая затем перекинулась в Бельгию и Германию, привела к уничтожению четверти всего поголовья кур в Нидерландах (более 30 млн. кур). В Бельгии было уничтожено 2,7 млн. кур, а в Германии – около 400 тыс.; кроме того, там было уничтожено значительное число больных и контактировавших с больными свиней.

Вспышки и эпизоотии в Италии в 1999 – 2000 гг., вызванные вирусом гриппа птиц А(Н7N1), привели к уничтожению 14 млн. домашних птиц (в основном, индюков). Компенсация фермерам за убытки составила 63 млн. долларов США, а убытки по ликвидации эпизоотии и потери промышленности по обработке и продаже птиц составили 620 млн. долларов. Через четыре месяца после окончания эпизоотии она возобновилась с менее вирулентным вариантом вируса А(Н7N1) и вызвала ещё 52 очага заболеваний птиц в стране.

Эпизоотия высокопатогенного вируса гриппа птиц А(Н5N2) в 1995 г. в Мексике также нанесла огромный экономический ущерб. Во время крупных эпизоотий в Пенсильвании (США), Мексике и Италии отмечено постепенное возрастание вирулентности возбудителей. За 6-9 месяцев эпизоотии возбудители с умеренной или даже низкой патогенностью для домашних птиц, в процессе циркуляции среди них, становились высокопатогенными вирусами гриппа и вызывали гибель почти 100% птиц.

За 2,5 месяца (с середины декабря 2003 по март 2004 г.) в пораженных эпизоотиями странах Азии погибло более 100 млн. голов домашней птицы. ВОЗ считает, что трудно предсказать дальнейщий ход событий с эпизоотиями гриппа среди домашних птиц в мире.

Рекомендации по клинике, дифференциальной диагностике и лечению людей, инфицированных высоко патогенным вирусом гриппа A(H5N1)

Введение. Грипп птиц - высоко контагиозная вирусная инфекция, которая может поражать все виды пернатых. Наиболее чувствительными из домашних видов являются индюки и куры. Дикие виды птиц могут служить переносчиками инфекции. В силу естественной резистентности они сами, как правило, при этом не заболевают и могут преодолевать в процессе миграции значительные расстояния. Естественным резервуаром для вирусов гриппа птиц (ВГП) являются водоплавающие птицы, которые чаще всего ответственны за интродукцию инфекции в домашние хозяйства.

Этиология. ВГП принадлежат к вирусам гриппа типа А семейства ORTHOMYXOVIRIDAE. Существует несколько подтипов возбудителя, которые определяются в зависимости от особенностей антигенной структуры гемагглютинина (Н) и нейраминидазы(N). В настоящее время известно 15 подтипов Н (Н1-Н15) и 9 подтипов нейраминидазы (N1-N9), которые могут реассортировать в различных комбинациях. Среди наиболее патогенных для домашних птиц выделяются вирусы с антигенной формулой Н7N7 (вирус «куриной чумы») и Н5N1, способные вызывать поголовную гибель кур.

Патогенность ВГП для людей. За последние 7 лет вирусы гриппа птиц Н5N1 и H7N7 в результате мутаций резко изменили свои биологические свойства и приобрели способность не только преодолевать хозяйский барьер с непосредственным инфицированием людей (минуя промежуточного хозяина), но и вызывать чрезвычайно тяжелые клинические формы заболеваний, значительная часть которых заканчивается летальными исходами.

Выделяемые вирусы подтипа H5N1 активно реассортируют и, преодолевая межвидовой барьер, «направляются» из резервуара водоплавающих птиц к домашним птицам, а в последнее время – к диким птицам, обитающим на суше, и к человеку. Это определяет необходимость более широкого надзора и контроля за инфекцией, в особенности, если учесть, что вирус гриппа (в отличие от других респираторных агентов, включая SARS) необычайно быстро распространяется и этот процесс не поддается контролю традиционными способами изоляции больных, карантинных мер или рекомендаций путешествующим людям. Это определяет срочную необходимость усиления надзора за гриппом для определения фактов, позволяющих птичьему вирусу передаваться людям и для последующей разработки эффективных вакцин против вируса H5 как для людей, так и для животных.

В настоящее время вирус получил более широкое распространение в природе ввиду его адаптации к другим млекопитающим (кошкам, собакам, свиньям).

Молекулярно-генетический анализ ВГП. Исследования первичной структуры генома высоко патогенных для людей штаммов вирусов гриппа H5N1 и H7N7 (1997-2004 гг. выделения), выполненные в различных лабораториях мира показали, что они содержат, в сайте расщепления молекулы гемагглютинина на две субъединицы, множественные последовательности основных аминокислот (МАП), что является главным признаком патогенности возбудителя для кур. Наличие таких мутаций обеспечивает вирусу высокую инфекционную активность и патогенность. В отличие от апатогенных или слабо патогенных вирусов, у которых МАП последовательность не встречается, гемагглютинин высоко патогенных вирусов легко расщепляется не только трипсино-подобными протеазами, присутствующими в клетках респираторного тракта человека и кишечника птиц, но и убиквитарными фурино-подобными протеазами, которые экспрессируются в самых различных тканях, что придает патогенным вирусам способность поражать разные системы и органы (пантропизм).

Другой особенностью высоко патогенных штаммов ВГП является их способность сорбироваться не только на сиаловых рецепторах птиц (? 2,3), но и на человеческих рецепторах (? 2,6), что позволяет им расширить круг хозяев и инфицировать людей непосредственно в результате прямого контакта с пораженными птицами или их органами.

Клиническая картина заболевания у людей. Длительность инкубационного периода при гриппе А(H5N1) составляет обычно 2-3 дня с колебаниями от 1 до 7 дней. Заболевание начинается остро с озноба, миалгии, возможны боли в горле, ринорея. В странах Юго-Восточной Азии более чем у половины больных отмечалась водянистая диарея при отсутствии слизи и крови в фекалиях, в четверти случаев повторная рвота. Повышение температуры тела является одним из ранних и постоянных симптомов. Уже в первые часы болезни температура превышает 38С и часто достигает высоких и гиперпиретических значений. В разгар заболевания (на 2-3 день болезни) характерно поражение нижнего отдела дыхательных путей (нижний респираторный синдром) с возможным развитием первичной вирусной пневмонии: кашель, одышка и дисфония. Кашель обычно влажный, в мокроте нередко отмечается примесь крови. Аускультативно - жесткое дыхание, хрипы. На рентгенограмме грудной клетки в ранние сроки находят неспецифические изменения в легких – диффузные, мультифокальные или отдельные инфильтраты, которые способны к быстрому распространению и слиянию. В некоторых случаях могут быть обнаружены сегментарные или долевые уплотнения. Прогрессирование заболевания сопровождается развитием дыхательной недостаточности и острого респираторного дистресс-синдрома.

В периферической крови больных определяется:

1 Лейкопения (< 21,0 • 109 /л)

2 Лимфопения; средний уровень 0,7 • 109 /л (от 0,25 до 1,1 • 109 /л при нижней границе нормы 1,2 • 109 /л)

3 Тромбоцитопения; средний уровень 75,5•109 /л

(от 45,0 до 174,0 •109 /л при нижней границе нормы 180,0 •109 /л)

Проявлениями пантропизма вируса и развивающегося в процессе интоксикации может быть поражение печени и почек, более чем у 30% больных развивается острая почечная недостаточность. При биохимическом исследовании крови, как правило, выявляется повышение активности трансаминаз, нередко наблюдается креатининемия

Дети младшего возраста переносят заболевание в тяжелой форме. К основным синдромам у них возможно присоединение энцефалита. В этом случае симптоматика дополняются сильной головной болью, рвотой, нарушением сознания. и тошнотой.

Прогноз. Как правило, неблагоприятный. Летальность достигает 50-80%. Летальный исход обычно наблюдается на второй недели болезни.

Диагностика. Клинически постановка диагноза гриппа А(H5N1), особенно при обнаружение первых случаев, представляет значительные трудности. Предварительный диагноз может быть поставлен на основании клинических проявлений с учетом данных эпидемиологического анамнеза:

1. Высокая лихорадка в сочетании с затрудненным дыханием и кашлем;

2. Диарея ( при отсутствии примесей и крови в фекалиях);

3. Отсутствие конъюнктивита, и сыпи;

4. Наличие сообщений о вспышках гриппа А(H5N1) в регионе проживания больного среди популяции животных (в первую очередь птиц) или случаях смерти домашней птицы;

5. Контакт с больным, у которого подтверждено инфицирование вирусом гриппа А(H5N1) за 7 дней до появления первых клинических признаков;

6. Контакт с больным острым респираторным заболеванием неясной этиологии, в том числе закончившимся летально, за 7 дней до появления первых клинических признаков;

7. Указания больного о выезде в страну или на территорию, где имеются сообщения о вспышках гриппа А(H5N1) в популяции животных, особенно домашней птицы;

8. Учет профессионального риска инфицирования больного.

Окончательный диагноз гриппа А(H5N1) может быть поставлен после лабораторного подтверждения иммунологическими (иммунофлюоресцентный анализ на Н5 – антиген с использованием Н5-моноклональных антител или определение специфических Н5-антител а парных сыворотках больного), молекулярно-генетическими (PCR на А/Н5) методами или в случаях выделения вируса (положительная вирусная культура на А/Н5).

Профилактика. ВОЗ рекомендует целевую иммунопрофилактику сезонной инактивированной вакциной против гриппа в тех регионах, где зарегистрированы вспышки ВПГ H5N1 у домашней птицы с целью снижения вероятности микст-инфицирования вирусами птичьего и человеческого гриппа.

К группам риска, которым рекомендована иммунизация, относятся:

1. Все лица, предположительно контактировавшие с домашней птицей или птицефермами, подозреваемыми на заражение птичьим гриппом (H5N1).

2. Работники здравоохранения, вовлеченные в ежедневный уход за больными с предполагаемыми или подтвержденными случаями гриппа H5N1.

В настоящее время в Российской Федерации принято решение о создании опытных серий моно- и тетравакцины из сертифицированного реассортанта вируса А/Вьетнам/1194/2004(H5N1) и PR8, полученного из Национального института биологических стандартов и контроля (NIBSC) в Великобритании и последующей стандартной процедуры изучения ее безопасности, реактогенности и эффективности.

Химиопрофилактика .

Химиопрофилактика птичьего гриппа осуществляется путем приема индукторов интерферона (циклоферона и амиксина), ремантадина, альгирема, арбидола и озельтамивира (тамифлю) в качестве противовирусных препаратов. Химиопрофилатика наиболее эффективна в группах риска, среди контактных лиц и в очагах инфекции. Продолжительность приема эквивалентна периоду наступления стадии реконвалесценции.

Химиопрофилактика показана среди подозреваемых на инфицирование вирусом гриппа H5N1, уборщиков и рабочих ферм, привлекаемых к массовому забою.

Дифференциальная диагностика. Лихорадка и поражение дыхательных путей встречаются при многих заболеваниях. Наибольшие затруднения возникают в дифференциальной диагностике гриппа А(H5N1) и других острых респираторных вирусных инфекций. Дифференциальная диагностика гриппа А(H5N1) с ОРВИ другой этиологии приведена в таблице.

В связи с ожидаемым во второй половине января 2006г. эпидемическим подъемом заболеваемости гриппом, а также сложившейся напряженной эпидемической и эпизоотической ситуацией по гриппу птиц в мире и, в частности на территории Турции, реальной угрозой заражения российских граждан и завоза инфекции на территорию Российской Федерации, прошу обеспечить проведение дифференциальной лабораторной диагностики больных гриппом с учетом эпидемиологического анамнеза с использованием методов быстрой диагностики - ПЦР и иммунофлюоресценции.

При проведении эпидемиологического расследования случаев заболевания, подозрительных на инфицирование вирусом гриппа А/H5N1, прошу обратить особое внимание на следующие данные эпидемиологического анамнеза:

- указание больного о пребывании в стране, где зарегистрированы эпизоотии гриппа птиц;

- контакт с больным, у которого подтверждено инфицирование вирусом гриппа А(H5N1) за 7 дней до появления первых клинических признаков;

- контакт с больным острым респираторным заболеванием неясной этиологии, в том числе закончившимся летально, за 7 дней до появления первых клинических признаков;

- контакт с больной птицей;

- учет профессионального риска инфицирования больного.

Клиническую диагностику следует проводить в соответствии с рекомендациями по клинике, дифференциальной диагностике и лечению заболевания гриппом у людей, вызванного высоко патогенным вирусом А(H5N1), разработаными директором НИИ гриппа РАМН академиком РАМН, профессором, д.м.н. О.И. Киселевым и главным инфекционистом Минздравсоцразвития России, академиком РАМН, профессором, д.м.н. В.В. Малеевым (письмо от 02.09.2005 № 0100/7156-05-32).

В случае подозрения на заболевания людей гриппом птиц прошу немедленно информировать Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Материал для исследования от таких больных следует направлять в региональную лабораторию для работы с высокопатогенными вирусами гриппа, организованную на базе ФГУП ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» (630 559, Наукоград Кольцово, Новосибирская обл., тел/факс (383) 336-75-40, e-mail: shestopalov@vector.nsc.ru), а также в Центр специальной лабораторной диагностики и лечения особо опасных и экзотических инфекций (141 300, Московкая обл., г. Сергиев Пасад-6, тел./факс (09654) 4-57-44).

 Лечение. Лечение больных проводится стационарно. Больные могут быть выписаны из стационара не раньше 7 дня после нормализации температуры тела.

Специфическая терапия проводится противовирусными препаратами. ВОЗ в первую очередь рекомендует ингибиторы нейраминидазы в связи с их широким спектром действия:

1. озельтамивир (оseltamivir), тамифлю: 75 мг дважды в день в течение 5 дней, назначенный в ранние сроки болезни, особенно в первые сутки, дает выраженный эффект. Тамифлю показан для терапии гриппа А(H5N1) у взрослых и подростков в возрасте 12 лет и старше. Эффективность и безопасность Тамифлю для лечения у пациентов детского возраста младше 12 лет не установлена;

2. занамивир (zanamivir), реленза: препарат назначается виде ингаляции интраназально.

К противовирусным препаратам широкого спектра действия из отечественных средств лечения гриппа в первую очередь относится арбидол. Дозировку этого препарата необходимо увеличить в 2 раза.

Рекомендуются все препараты адамантановой группы для лечения птичьего гриппа, включая ремантадин и альгирем.

Показано использование симптоматических средств. При гипертермии показаны жаропонижающие препараты per os (парацетамол, ибупрофен или найз). Противовоспалительные средства имеют аддитивный эффект на противовирусную терапию.

Препараты, которые не используют в терапии гриппа А(H5N1): салицилаты (аспирин), анальгин. Анальгин и антигриппины категорически противопоказаны для лечения птичьего гриппа. Аптечная пропись антигриппина будет отдельно рекомендована НИИ гриппа РАМН При этом десенсибилизирующая терапия рекомендована при гриппе по назначению врача из числа современных препаратов.

Антибиотики назначаются только при подозрении на смешанный характер пневмонии. Кортикостероиды проявляют определенную клиническую эффективность при тяжелых формах гриппозных пневмоний с признаками системного поражения органов.

Больным с развившимся острым респираторным дистресс-синдромом помощь оказывается в условиях интенсивной терапии с обязательной респираторной поддержкой. Целесообразно использование неинвазивной вентиляции легких, щадящих методов ИВЛ, экстракорпоральной оксигенации и введения сурфактанта («Биосурф»).

Превентивное лечение или экстренная профилактика. В качестве средства экстренной профилактики рекомендуется препарат «Циклоферон» и другие индукторы интерферона. Эффективность циклоферона и индукторов интерферона тем выше, чем раньше осуществляется их назначение. Рекомендованы группам риска и медицинскому персоналу в инфекционных стационарах при уходе и лечении больных с гриппозными пневмониями.

Заключение.

Что же ожидает человечество в ХХI веке – пандемия зоонозного гриппа (куриного или свиного) или антропонозного, за счёт возврата в циркуляцию вируса-анахронизма (резерванта?). Сегодня эпидемический процесс гриппа окончательно приобрёл черты относительной автономности, когда в разное время в различных регионах мира протекают вялые эпидемии, вызываемые вирусами то сероподтипа A1, то A3, то В или их различными комбинациями, с охватом 10-15% населения. Эта ситуация несопоставима с прежними пандемиями гриппа A, когда они вызывались только одним возбудителем какого-либо сероподтипа. После лёгкой пандемии в 1977-1978 гг. в мире не было подобных ситуаций, и это вызывает тревогу, особенно в связи с заболеваниями людей зоонозным гриппом.

Несмотря на длительный период применения живых, а затем инактивированных вакцин, особенно в нашей стране, где прививками охватывалось в 70-80-е годы ХХ века до трети населения, грипп так и остался, по сути неуправляемой инфекцией. Доля заболеваемости гриппом в сумме числа заболевших острыми респираторными инфекциями за год по-прежнему не превышает 30%. При этом налицо снижение тяжести клинического течения болезни, что связано не столько с вакцинацией, которая сейчас не так масштабна, сколько с длительной циркуляцией вирусов A1 (с 1977 г.) и A3 (c 1968 г.). Усиливающийся популяционный иммунитет не позволяет указанным возбудителям в полной мере проявлять патогенность и вызывать тяжёлые эпидемии. Болеют преимущественно в организованных коллективах дети, подростки и молодёжь.

Нынешняя длительная социркуляция вирусов A1 и A3 – вряд ли уникальное явление. По сведениям, полученным на основе применения методов серологической археологии, подобное было в 1908-1918 гг., и это является признаком благоприятного течения эпидемического процесса в отличие от пандемий монопольного типа 1918, 1957 и 1968 гг.

У птиц, как известно, грипп протекает с признаками энтерита, и возбудитель может передаваться людям не только воздушно-капельным, но и контактно-бытовым, воздушно-пылевым и алиментарным путями. Это ещё одна параллель с SARS – пневмонией и коронавирусами. Подобное может быть и при адено-, энтеро-, ротавирусных инфекциях, возбудители которых в природе также циркулируют среди животных. Скорее всего нынешние эпизоотии птичьего гриппа и, как следствие заболевания людей – не столько результат очередной «попытки» зоонозных возбудителей закрепиться в человеческой популяции (это уже давно произошло), скорее результат свиноводческого и птицеводческого бума в странах Юго – Восточной Азии, в которых действенность санитарно-ветеринарных профилактических мер отстаёт от интенсификации производства в этой сфере хозяйства. Это подтверждается превалированием среди заболевших людей работников, профессионально связанных с указанными животными, и отсутствием убедительных доказательств передачи вирусов среди людей.

Настораживающим аспектом является возможность одновременной коинфекции людей человеческими и птичьими вирусами с результирующим возникновением реассортантов, несущих поверхностные гены от птичьих вирусов, а внутренние гены от эпидемических человеческих вирусов, которые могут придать возбудителю способность к трансмиссии в популяции людей и породить новый пандемический вирус.

Кроме того, вызывает опасение возможность прямой передачи птичьего вируса от человека человеку.

Сказанное определяет необходимость расширения надзора за гриппом с особым вниманием к вирусам, обладающим высокой патогенностью (Н5, Н7). Чрезвычайно важно контролировать случаи инфицирования людей, в особенности, если эти события совпадают по времени с текущими эпидемиями.

Тесное взаимодействие с ветеринарными службами становится новым важным элементом совершенствования надзора за гриппом в плане подготовки к очередной пандемии.

При этом основные направления в области совершенствования лабораторного надзора за гриппом и другими ОРВИ в России сводятся в настоящее время к следующим мероприятиям:

- усиление санитарно-карантинных и обсервационных мер, эпидемиологическом и эпизоотологическом надзоре на территориях риска, граничащих со странами Юго-Восточной и Центральной Азии, с особым вниманием к профессиональным группам и мигрантам (возможность передачи вирусов от человека к человеку всё же не исключена), а также к продукции птицеводства и свиноводства.

- увеличение объема и результативности исследований по выделению вирусов гриппа от больных людей и животных и лабораторной диагностики гриппа, в т.ч. среди животных.

- повышение оперативности представления в Федеральный центр по гриппу и ОРВИ (на базе НИИ гриппа РАМН) и Центр экологии и эпидемиологии гриппа (на базе НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН) данных быстрой диагностики ОРВИ с применением иммунофлюоресцентного анализа (еженедельно, одновременно с данными по заболеваемости).

- расширение спектра идентифицируемых агентов, вызывающих ОРВИ с включением возбудителей коронавирусных инфекций, микоплазмы пневмонии и вирусов герпеса.

- установление взаимодействия с региональными ветеринарными службами, контролирующими заболеваемость на птицефабриках (контроль за появлением вирусов Н5, Н7, Н9, способных напрямую инфицировать человека).

- проведение серологических исследований иммунитета к вирусам Н5, Н7, Н9 у работников птицефабрик как маркера прямого инфицирования людей вирусом птичьего гриппа.

Множество имеющихся средств профилактики гриппа с разными механизмами действия свидетельствуют об отсутствии средства с высокой фактической эпидемиологической эффективностью. Все они обладают невысоким потенциалом защиты. Это диктует необходимость комплексного подхода в профилактике гриппа :

• в предэпидемический период – прививки группам риска заболевания существующими вакцинами с вариантами выбора (отечественные или импортные, живые или инактивированные);

• в эпидемический период – средства экстренной профилактики для групп риска, в т.ч. и риска заражения;

• в межэпидемический период – оздоровительные меры, адаптогены (осенью и весной) в отношении тех же лиц.

Стратегия борьбы с гриппом сегодня состоит в иммунизации людей по индивидуальным и групповым эпидемическим показаниям в организованных коллективах (в группах риска) с дополнением другими противоэпидемическими средствами. Но ещё очень важно оздоровление людей из групп риска в ходе диспансеризации, традиционного врачебного контроля, поликлинического патронажа, существующие методы которых требуется рационализировать с акцентом на решение задачи снижения заболеваемости конкретных людей воздушно-капельными инфекциями.

В настоящее время в НИИ гриппа РАМН подготовлены диагностикумы из вируса гриппа А(Н5) для определения антител в сыворотках людей и изучения популяционного иммунитета в РТГА (диагностикумы активно взаимодействуют с референс-сыворотками к современным азиатским штаммам «птичьего» гриппа, включенными в состав наборов ВОЗ).

Диагностикумы зарегистрированы и прошли проверку установленным путем в Государственном НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича рекомендованы Комиссией по гриппозным вакцинным и диагностическим штаммам к производству.

Подготовлены серии флуоресцирующих иммуноглобулинов для обнаружения вирусов Н5 в клинических материалах (в случае появления вирусов в циркуляции).

В настоящее время диагностические препараты целесообразно приобрести и использовать для проведения выборочного обследования работников птицеводческих хозяйств в целях определения иммунитета, а также для быстрой диагностики заболеваний среди работников птицефабрик.

В Центральном НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора разработана новая диагностическая тест-система для выявления РНК вируса гриппа А(Н5) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) – «АмплиСенс Influenza virus А H5/H7», которая успешно себя зарекомендовала при исследовании биологического материала, поступившего из регионов эпизоотий птиц в Алтайском крае, Курганской, Новосибирской, Тюменской и Омской областях.

Указанные диагностические препараты целесообразно использовать для проведения быстрой диагностики в случае подозрения на заболевание гриппом A(H5) в первую очередь среди работников птицеводческих хозяйств.

Дифференциально-диагностические признаки гриппа A ( H 5 N 1) и других острых респираторных вирусных инфекций

Признаки	Грипп	Пара-грипп	ТОРС	РС-инфекция	Аденовирусная инфекция	Риновирусная инфекция	Реовирусная инфекция	Птичий грипп
1	2	3	4	5	6	7	8	9
Возбудитель	Вирусы гриппа: 3 серотипа (А,В,С)	Вирусы пара-гриппа: 5 серотипов (1-5)	Корона-вирус новой группы	РС-вирус 1 серотип	Аденовирусы: 49 серотипов (1-49)	Риновирусы: 114 серотипов (1-114)	Реовирусы: 3 серотипа (1-3)	Вирус гриппа A ( H5 N1)
Инкубацион- ный период	От нескольких часов до 1,5 суток	2-7 дней, чаще 3-4 дня	2-7 дней, иногда до 10 дней	3-6 дней	4-14 дней	2-3 дня	1-6 дней, чаще 2-3 дня	1-7 дня, в среднем 3 дня
Начало заболевания	Острое	Постепенное	Острое	Постепенное	Постепенное	Острое	Острое	Острое
Течение	Острое	Подострое	Острое	Подострое, иногда затяжное	Затяжное, волнообразное	Острое	Острое	Острое
Ведущий клинический синдром	Интоксика- Иция	Катаральный	Дыхательная недостаточ- ность	Катаральный, дыхательная недостаточность	Катаральный	Катаральный	Катаральный	Лихорадка, дыхательная недостаточность
Выражен-ность интокси-кации	Сильная	Слабая или умеренная	Сильно выраженная	Умеренная или слабая	Умеренная	Слабая	Слабая или умеренная	Сильная
Длительно-сть интоксика-ции	2-5 дней	1-3 дня	5-10 дней	2-7 дней	8-10 дней	1-2 дня	1-3 дня	7-12 дней
Температура тела	Чаще 39°С и выше, но может быть и субфебрильная	37-38°С, может длительно сохраняться	38°С и выше	Субфебрильная, иногда нормальная	Фебрильная или субфебрильная	Нормальная или субфебриль-ная	Субфебриль-ная или нормальная	38°С и выше
Катаральные проявления	Умеренно выражены, присоединяются позднее	Выражены, с первого дня болезни, осиплость голоса	Умеренно выражены, экссудация слабая	Выражены, постепенно нарастают	Сильно выражены с первого дня болезни	Выражены с первого дня болезни	Умеренно выражены с первого дня болезни	Отсутствуют
Ринит	Затруднение носового дыхания, заложенность носа. Серозные, слизистые или сукровичные выделения до 50% случаев	Затруднение носового дыхания, заложенность носа.	Возможен в начале заболевания	Заложенность носа, необильное серозное отделяемое	Обильное слизисто-серозное отделяемое; резкое затруднение носового дыхания	Обильное серозное отделяемое; носовое дыхание затруднено или отсутствует	Умеренное серозное отделяемое	Отсутствует
Кашель	Сухой, мучительный, надсадный, с болями за грудиной до 7-10 дня болезни; на 3 сутки влажный	Сухой, «лающий», может сохраняться длительное время (иногда до 12-21 дня болезни)	Сухой, умеренно выраженный	Сухой приступообраз-ный продолжительно-стью до 3 недель. Может сопровождаться болями за грудиной	Влажный	Сухой, першение в глотке	Редкое покашлива-ние	Выраженный
Изменения слизистых оболочек	Слизистые глотки и миндалин синюшны, умеренно гиперемиро-ваны, инъекция сосудов	Слабая или умеренная гиперемия зева, мягкого неба, задней стенки глотки	Слабая или умеренная гиперемия слизистых оболочек	Слабая гиперемия слизистых оболочек	Умеренная гиперемия, отечность, гиперплазия фолликул миндалин и задней стенки глотки	Слабая гиперемия слизистых оболочек	Слабая или умеренная гиперемия слизистых оболочек	Отсутствует
Физикальные признаки поражения легких	Отсутствуют, при наличии бронхита – сухие рассеянные хрипы	Отсутствуют	С 3-5 дня болезни часто выявляются признаки интерстици-альной пневмонии с генерализа-цией	Рассеянные сухие и редко влажные среднепузырча-тые хрипы; признаки пневмонии	Отсутствуют. При наличии бронхита – сухие рассеянные хрипы	Отсутствуют	Отсутствуют	С 2-3 дня болезни
Ведущий синдром респиратор-ных поражений	Трахеит	Ларингит, ложный круп встречается крайне редко	Бронхит, острый респиратор-ный дисстресс синдром	Бронхит, бронхиолит; возможен брохоспазм	Ринофарингоконъюк-тивит и/или тонзиллит	Ринит	Назофарин-гит	Нижний респираторный синдром
Увеличение лимфатических узлов	Отсутствует	Углочелю-стные, заднешей-ные, реже – подмы-шечные увеличены и умеренно болезненны	Отсутству-ет	Отсутствует	Может быть полиаденит	Отсутствует	Увеличены шейные	Отсутствует
Увеличение печени и селезенки	Отсутствует	Отсутству-ет	Отмечается	Симптомы токсического гепатита	Отмечается	Отсутствует	Отмечается	Возможно
Поражение глаз	Инъекция сосудов склер	Отсутствует	Редкое	Отсутствует	Конъюктивит, кератоконъюктивит	Инъекция сосудов конъюктив и склер, век; слезоточение	Инъекция сосудов склер иногда катаральный конъюктивит	Отсутствует
Поражение других внутренних органов	Отсутствует	Отсутствует	Часто диарея в начале заболева-ния	Отсутствует	Может быть экзантема, иногда диарея	Отсутствует	Отсутствует	Диарея, возможно поражение печени, почек, лейко-, лимфо-, тромбоцитопе-нии

 

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА 02.09.2005   N   0100/7156-05-23		Руководителям территориальных управлений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по субъектам Российской Федерации

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

О рекомендациях по клинике, дифференциальной диагностике и лечению птичьего гриппа

Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека направляет для использования в работе рекомендации по клинике, дифференциальной диагностике и лечению заболевания гриппом у людей, вызванного высоко патогенным вирусом А(H5N1). Рекомендации разработаны директором НИИ гриппа РАМН академиком РАМН, профессором, д.м.н. О.И. Киселевым и главным инфекционистом Минздравсоцразвития России, академиком РАМН, профессором, д.м.н. В.В. Малеевым.

Указанные рекомендации прошу довести до сведения специалистов управлений здравоохранением субъектов Российской Федерации и использовать при проведения обучающих семинаров для медицинских работников по вопросам эпидемиологии, клиники, дифференциальной диагностики, лечения и профилактики гриппа птиц.

 

Руководитель

Г.Г. Онищенко

 

____________________________________________________________________________________________________________________