7.2.Общее положение по паразитологическому исследованию рыб

При подозрении на инвазионное заболевание у рыб проводят полное паразитологическое исследование рыб. Для исследования используют живых или свежеуснувших рыб всех возрастных категорий из каждого водоёма в следующих количествах: личинок и мальков не менее 25 экземпляров, сеголеток 15…25, годовиков 10…15, рыб остальных возрастных групп 5…10 экземпляров. Результаты исследования вносят в рабочий журнал, где указывают дату, место вылова рыб, пол, возраст, вес и длину рыбы, результаты паразитологического исследования с предварительным и окончательным определением вида паразитов.

Порядок исследования

Исследования проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость, печень, селезёнка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, почки, половые органы, кишечник, мышцы, головной и спинной мозг. Для обнаружения кровепаразитов у рыб берут кровь из сердца и делают мазки.

Исследование внешних покровов. При наружном осмотре кожного покрова и плавников собирают, предварительно определяют и фиксируют для последующего изучения всех паразитов, видимых простым глазом (паразитические, ракообразные, пиявки и другое) После этого приступают к обнаружению микроскопических паразитов путём микроскопии мазков из соскобов со всей поверхности тела ( мальки, сеголетки, годовики) или из нескольких участков ( крупной рыбы). Скальпелем соскабливают слизь с кожного покрова и плавников, помещают ее на предметное стекло и смешивают с ранее нанесенными туда же 2…3 каплями прокипяченной воды. Накрывают покровным стеклом и рассматривают сначала под лупой, а потом при малом увеличении микроскопа. Исследование рыб на возбудителя костиоза ведут при сильном увеличении микроскопа. Кроме возбудителя костиоза, на коже рыб паразитируют другие жгутиконосцы, а также инфузории, моногенетические сосальщики, пиявки, паразитические рачки. Весьма часто можно обнаружить споровиков, локализующихся в дермальных бугорочках.

Подсчет количества крупных паразитов (рачков, гельминтов) проводят в абсолютных числах, а мелких (споровиков, инфузорий и других простейших) – в относительных, т.е. подсчитывают количество паразитов в десяти полях зрения микроскопа и определяют средние показатели. При этом высчитывают экстентивность и интенсивность инвазии по каждому паразиту в отдельности для каждого вида и возраста рыб.

При осмотре кожного покрова необходимо учитывать, что паразиты могут локализоваться в толщине кожи (метацеркарии Postliodiplostomum cuticula ) и в толще чешуи ( метацеркарии Methagonimus ).

В случае затруднения видового определения тех или иных паразитов их необходимо консервировать в соответствующих жидкостях, этикетировать и сохранять для дальнейшей обработки.

Исследование жабр. Все жаберные дуги вынимают , помещают на предметное стекло , собирают всех видимых паразитов , подсчитывают и фиксируют. Соскоб с жаберных лепестков или целые жаберные дуги (сеголеток) с несколькими каплями воды зажимают между двумя предметными стёклами до прозрачности и исследуют при малом увеличении микроскопа.

Споровики, некоторые инфузории и личинки сосальщиков могут находится не на поверхности жаберных лепестков , а в особых соединительнотканных образованиях ( бугорках) ; обнаружить и извлечь их можно только после разрыва стенки бугорка с помощью препаровальных игл. В кровеносных сосудах жабр могут находиться яйца сангвиникол, споры и мицелии грибка.

Исследование глаз. Для обнаружения паразитов глаз существует два метода их исследования:

Первый метод. Глаза извлекают из глазных впадин помещают на предметное стекло и вскрывают острыми ножницами с внутренней каудальной стороны: Извлечённое стекловидное тело, хрусталик и содержимое передней камеры глаза компрессирует двумя предметными стёклами и просматривают при малом увеличении микроскопа. В глазах можно обнаружить личинок сосальщиков и круглых червей.

Второй метод. Глаза из глазных впадин не извлекают, а острыми концами кривых глазных ножниц прокалывают склеру глаза в центре и надрезают до края глаза с обеих сторон так , чтобы получился горизонтальный разрез. На оба края разреза накладывают ножницы с полуоткрытыми браншами и слегка надавливают. Под давлением хрусталик глаза выходит на поверхность разреза вместе со стекловидным телом. Его подхватывают сведёнными браншами ножниц и переносят на стекло . Исследуют так же, как описано в первом методе.

Исследование брюшной полости. Дугообразный разрез к основанию левого грудного плавника ведут от анального отверстия, вводя непосредственно в него тупой конец одной из бранш ножниц. Вскрытую брюшную полость осматривают, крупных паразитов (лигула, филометра, амфилина) извлекают, а имеющиеся на серозных покровах и брыжейке бугорки исследуют под микроскопом.

Сердце. Для исследования сердце помещают в бактериологическую чашку с физраствором, вскрывают его полости, промывают образовавшийся осадок и исследуют под микроскопом на наличие возбудителя сангвиниколёза и некоторых метацеркариев.

Печень. При наружном осмотре печени можно обнаружить на её поверхности личинок круглых червей и белые бугорки с заключёнными в них личинками ленточных червей. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих внутри печени, её делят на небольшие кусочки, которые компрессируют и исследуют под лупой и затем при слабом увеличении микроскопа.

Желчный пузырь. Для обнаружения паразитов желчный пузырь вырезают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами , делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря .Соскоб и сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стёклами и исследуют под лупой и микроскопом. В желчном пузыре можно обнаружить простейших, сосальщиков и личинок ленточных червей.

Селезёнка. Помещают между двумя стёклами ,сжимают до прозрачности и исследуют под микроскопом.

Почки. Для обнаружения паразитов почки компрессируют и исследуют под микроскопом. В почках можно найти крупных паразитов, споровиков и яйца сосальщиков.

Плавательный пузырь. Наружную волокнистую оболочку плавательного пузыря снимают, при этом паразиты, находящиеся в стенке плавательного пузыря и его полостях, обычно хорошо видны. Их извлекают и исследуют. В случае необходимости соскоб с внутренней оболочки плавательного пузыря можно микроскопировать компрессорным методом.

Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре можно обнаружить сосальщиков, споровиков, инфузорий.

Половые органы. Для обнаружения паразитов железу по частям компрессируют между двумя стеклами и просматривают под микроскопом. В половых органах встречаются микроспории и крупные плероцеркоиды, обнаруженные фиброматозными сумками и свободно передвигающиеся между икринками.

Желудочно-кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира и печени, расправляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. По ходу вскрытия обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) извлекают и помещают в физиологический раствор. Содержимое из различных отделов желудочно-кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем скальпелем делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мести исследуют на наличие микроскопических паразитов (кокцидии и др.).

Исследования мышц. Для обнаружения заражённости рыб плероцеркоидами лентецов и другими крупными паразитами мышцы разрезают на тонкие пластинки толщиной 5мм и исследуют макроскопически. Чтобы обнаружить мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей рыбы и исследуют компрессорным методом под лупой и под микроскопом при малом увеличении.

Исследование головного и спинного мозга. Исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков.

Исследование хрящей. Для обнаружения возбудителя миксозомоза (вертежа лососевых) исследуют компрессорным методом черепные и межпозвоночные хрящи.

7.3. Определение возбудителей гельминтозоонозов в рыбе и других водных животных